c*********u
发帖数: 3128 | 1 就是那种剪了尾巴或耳朵，蛋白酶K随便消化几个小时就可以直接PCR的kit。
用来做genotyping
我以前没做过这方面。
谢谢各位了。 |
s**********d
发帖数: 1694 | |
c*********u
发帖数: 3128 | 3 No, I mean the PCR kit for genotyping. this kit can be used for the dirty
and unpurified DNA sample.
【在 s**********d 的大作中提到】
: 你说的是消化尾巴的试剂吗
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O******e
发帖数: 4845 | 4 If you don't care about the price, you may want to try Sigma's kit. I don't
remember the name,but it is very quick and efficient.
【在 c*********u 的大作中提到】
: No, I mean the PCR kit for genotyping. this kit can be used for the dirty
: and unpurified DNA sample.
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w****l
发帖数: 5 | |
s******e
发帖数: 370 | 6 we use a digestion kit from Zygem for embryonic tissue, it does save a lot of time |
h********n
发帖数: 4079 | 7 I guess you mean extract-n-amp.
Sometimes it does not make good DNA for PCR, its PCR master mix is good. So
I go back to DNeasy.
t
【在 O******e 的大作中提到】
: If you don't care about the price, you may want to try Sigma's kit. I don't
: remember the name,but it is very quick and efficient.
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n****n
发帖数: 165 | 8 Viagen directPCR plus Promega GoTaq flexi |
c*********u
发帖数: 3128 | 9 Thanks, this is my first time to hear these.
【在 n****n 的大作中提到】
: Viagen directPCR plus Promega GoTaq flexi
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r***e
发帖数: 2539 | 10 sigma jumpstart 2x premix.
非常好用，组织消化下，异丙醇沉淀，溶在水里就行。
【在 c*********u 的大作中提到】
: 就是那种剪了尾巴或耳朵，蛋白酶K随便消化几个小时就可以直接PCR的kit。
: 用来做genotyping
: 我以前没做过这方面。
: 谢谢各位了。
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h****g
发帖数: 439 | |
D*a
发帖数: 6830 | 12 自己配的，
网上搜了搜，这是跟我们完全一样的protocol
Final concentration of tail digestion buffer (TDB):
50 mM KCl
10 mM Tris-HCl (pH 9.0)
0.1 % Triton X-100
0.4 mg/ml Proteinase K
Add 100 ul of TDB per tail piece (2-5 mm) in a microcentrifuge tube. Be
careful not to cut too much tail.
Incubate the tube at either 60 C for 3 hours, with gentle mixing every 30
minutes, or 55 C overnight.
Incubate the tube at 94 C (or boil) for 10 minutes to denature the
Proteinase K.
Spin in microcentrifuge at top speed for 15 minutes. |
D*a
发帖数: 6830 | |
c*********u
发帖数: 3128 | 14 多谢，不过你们用什么taq啊？这个是关键
有的PCR kit不行的。
genotyping的pcr我一直觉得随便消化消化就能做出来，我们就用invitrogen的taq
【在 D*a 的大作中提到】
: 忘了給链接
: http://www.research.uci.edu/tmf/DNAprep.htm
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w*e
发帖数: 740 | 15 HEAT SHOT的方法，
尾巴加热半个小时就可以做PCR了
5块钱的试剂用1年
【在 c*********u 的大作中提到】
: 就是那种剪了尾巴或耳朵，蛋白酶K随便消化几个小时就可以直接PCR的kit。
: 用来做genotyping
: 我以前没做过这方面。
: 谢谢各位了。
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D*a
发帖数: 6830 | 16 请问具体protocol是什么呀
【在 w*e 的大作中提到】
: HEAT SHOT的方法，
: 尾巴加热半个小时就可以做PCR了
: 5块钱的试剂用1年
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D*a
发帖数: 6830 | 17 Platinum®Taq DNA Polymerase
【在 c*********u 的大作中提到】
: 多谢，不过你们用什么taq啊？这个是关键
: 有的PCR kit不行的。
:
: genotyping的pcr我一直觉得随便消化消化就能做出来，我们就用invitrogen的taq
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M*****e
发帖数: 279 | 18 We use Sigma's RedTaq for mouse genotyping (tail). It does not need to add
DNA sample buffer (loading dye) to your PCR products, so you can directly
load your PCR samples to agarose gel and run. |
