h******u
发帖数: 602 | 1 是从HYBRIDOMA来的单抗。一直都是收集细胞培养的MEDIUM，直接用做免疫组化和
WESTERN。用几次后就扔掉。
现在想节约点，除了分装小体积，避免多次冻溶，是不是还可以加点proteinase
inhibitor？ 别的招呢？ |
s******y
发帖数: 28562 | 2 不要加protease inhibitor, 对于antibody 这种东西没有什么用。
使用过的抗体可以冷冻保存起来啊，一直可以反复使用好几次的。
【在 h******u 的大作中提到】
: 是从HYBRIDOMA来的单抗。一直都是收集细胞培养的MEDIUM，直接用做免疫组化和
: WESTERN。用几次后就扔掉。
: 现在想节约点，除了分装小体积，避免多次冻溶，是不是还可以加点proteinase
: inhibitor？ 别的招呢？
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g********0
发帖数: 6201 | 3 抗体不怕反复冻融。
抗体的腐败反而是由于它的亲密战友-所谓工作液里起降背景的脱脂奶粉或BSA的快速腐败而
导致的。
我一向不认为脱脂奶粉或BSA能起多大的所谓降背景的作用。
我用抗体直接稀释在TBST或PBST里，含点triton就行了，我一抗里连叠氮钠都不加的。而如果有奶粉的话，加叠氮钠也没用，该臭就臭。
用完就冻起来，反复用几个月都没有问题。
总之，配抗体的buffer里除了抗体本身不要有其他蛋白，这样保质期就长了。 |
h******u
发帖数: 602 | 4 谢谢大家，长见识了，那就不加 inhibitor。
我是收集细胞培养液直接用,细胞培养液中有没有使抗体变坏的成分？ |
g********0
发帖数: 6201 | 5 有啊，死细胞释放的蛋白，血清等等，培养基里有机物比较多，容易腐败。
【在 h******u 的大作中提到】
: 谢谢大家，长见识了，那就不加 inhibitor。
: 我是收集细胞培养液直接用,细胞培养液中有没有使抗体变坏的成分？
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