b****a
发帖数: 37 | 1 想在BOSTON地区找一个实验室, 免费安装一台荧光化学发光成像仪, 此仪器比较适合
做WESTERN BLOTTING等实验的结果分析. 唯一条件: 仪器能被频繁使用. 如果您已经有
BIORAD或其他公司的仪器, 作为对比效果会更好.
免费使用期限：２个月至 永久（面谈）． 无需您反馈使用的具体信息（有反馈更好
）， 除您同意外，不会带其他客户来参观贵实验室．
需要资料的话，可站内联系，或发邮件到b****[email protected]. |
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l********0
发帖数: 606 | 2 如果不在乎好看不好看的话，可以用泡沫塑料盒子，我们实验室经常寄东西过来，特别
是biorad的gel，那个盒子很大，很好用 |
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M****e
发帖数: 70 | 4 throw in a couple of points:
when you run an SDS-PAGE, you try to fractinate the protein
by the matrix of acrylamide. so the qualities of both the
gel and the samples are important to determine migration.
basically, do not use gels that have been stored for a long
time, use fresh AP and high-quality of acrylamide to make a
PAGE gel, giving long time for the bottom separation gel to
polymerize; or, just buy a commercial gel from BioRad, either
non-gradient or gradient (this one seems to be better |
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M****e
发帖数: 70 | 5 you should set constant VOLTAGE instead of CURRENT.
i use semidry from BioRad, and it works very nice for my
western. set to 15V, transfer @ RT for 1hr to 1.5hr. i never
think that all the protein could be transferred onto the
membrane. and thus to make a homogenous sandwitch is very
important, which means that you treat the gel, the membrane,
as well as the blotting paper very equally well.
think about this, it is the electric field that pushes the
charged molecules to move rather than the curr |
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c*********e
发帖数: 1 | 6 1. Never expect to isolate a large amount Plasmid DNA from yeast.
2. What I did is:
Incubate lytic enzyme with your yeast for an hour. Then followed the
BioRad kit miniprep protocol, start from lysis solution (equal to solutionII
in classical protocol). I guess kits from other companies are also work.
At the end, elute your DNA from matrix with 20microliter of TE instead of 100
microliter. One microliter of such extract is sufficient for a bacteria
transformation, even though it's CEN plasmi |
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p*****n
发帖数: 981 | 7 ☆─────────────────────────────────────☆
elity (elity) 于 (Sun Feb 4 12:10:55 2007) 提到:
实验室要新添一台纯化蛋白质的仪器，不知道大家觉得什么样的较好。现在在考虑的有
： ActaPrime, BioRad 的 BioLogic DuoFlow, 以及ISCO的Foxy。不知道大家有什么建
议。 谢谢。
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anoia (阿诺) 于 (Sun Feb 4 12:16:28 2007) 提到:
FPLC?
☆─────────────────────────────────────☆
goodpop (姚期智老师对我说不要自满) 于 (Sun Feb 4 15:09:47 2007) 提到:
蛋白纯化系统还是akta系列最好
有钱就买purify,甚至explorer
钱不够就FPLC
prime这种破烂货就别要了
你要是买了prime,大部分prepacked columns就别想用了
只要钱 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 8 取决于设备，而不是电流电压参数。
我们用的湿转设备，有效面积比膜或者胶的面积大4倍。用含20%甲醇的buffer，电压
50v，电流0.2A，半小时-1小时，转500kD的蛋白完全没有问题。
如果用传统biorad的小盒子，面积也就1.5倍于膜。即使电压100，电流0.5，也很难在2
小时内将200kd蛋白转完全。 |
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i*********0
发帖数: 915 | 9 我用的那种老式的biorad的盒子，刚才用120v跑了3个小时，基本上电流是从230mA最后
跳到了430mA，250的marker都转过去了，不知道330的怎么样。
等下stain一下gel看看。 |
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b******g
发帖数: 841 | 10 测plasma里面homocysteine的含量，biorad的EIA kit 要2000块，才96个well。
请问有没有谁知道便宜点的kit？或者其他的方法？有人用色谱仪做过吗？会不会特复
杂？ |
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d******r
发帖数: 124 | 11 ambiom, invitrogen or biorad?
用过的xdjms比较下吧。谢过！ |
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h**2
发帖数: 2841 | 12 我们的实验一般细胞都不能太confluent，一般65~90%吧
WCE protein concentration如果用100 ul的RIPA的话有1~2 ug/ul，不过这个跟我们的
spectrometer有关，我们一般1:400 dilute，终浓度太稀的话reading unreliable
Loading的蛋白量的话就根据看什么了，一些oncogene或者tumor suppressor的话我喜
欢10~30 ug，不过30 ug WCE的actin 1:10k，20 min还是太深了，我有时候用tubulin 1:10k，15 min好一点
BioRad的那套东西，15-tooth standard comb的话max应该是55 ul, 10-tooth好像可以
load 80 ul吧？ |
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c******k
发帖数: 252 | 13 是吗，用得如何？我们的目标是用来检测多个基因的mRNA表达水平。我们这个学校似乎
还没有人买这个仪器。。。。。 |
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A******y
发帖数: 2041 | 14 Personally I like Bio-rad one, I think CFX96 still has the best optic design
acquired from MJ-research now with the 2nd best (reliable) thermal cycler. |
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s******s
发帖数: 13035 | 16 biorad小胶15孔1mm梳子, 大概每孔50ug. 如果孔都连上, 大概能上1mg.
如果你蛋白只有30%, 又要个2mg打抗体的话, 只能去找大胶. 一般做分子
的有点年头的实验室都有, 只是藏起来不用而已. |
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C****o
发帖数: 994 | 17 做了一年多phospho-p38 的western，用自己配的gel和transfer buffer一直出不来。
可最近用biorad的胶p38就很容易出了band.
我猜是自制gel的问题，transfer的时候不完全。
这个可能性大不大？ |
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C****o
发帖数: 994 | 18 10% gel
60min 0.24A transfer semi-dry
跑胶的时候biorad成品胶用60min跑完，自制的gel要70分钟，所以我怀疑自制的gel浓
度高于10%，transfer的时候可能也需要更多的时间。
谢谢回帖。 |
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c*********y
发帖数: 1952 | 19 biorad还凑合。最近好像在搞买胶送电泳槽的活动？ |
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k****u
发帖数: 3454 | 20 我们用biorad的precast gel
普通胶的分辨率没有自己做的好，但是据说梯度的胶比较优秀
上次我准备配胶，被老板抓住了，说unless you have a specific reason, don't
pour gels, buy gels... |
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C*******e
发帖数: 4348 | 21 你老板真好
我们用的也是梯度的precast啊
biorad的保质期短，而且过了期就真的不能用了 |
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a*****s
发帖数: 838 | 22 两个放在同一个电泳池子里一起跑，没什么问题吧？还是需要分开电泳池跑？就是那种
biorad的mini蛋白电泳系统。就一
块15％的，想吧它跟其他的7%的胶配着跑，主要是其他的电泳槽也都用来跑7%的胶了。
。。 |
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L**********r
发帖数: 143 | 23 Can someone comment on qPCR systems from ABI, BioRad, Stratagene, Eppendorf,
Roche, and Cepheid;
regarding cost, analysis software, reliability, customer support, etc. |
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R****n
发帖数: 708 | 24 我用过这五种
CFX96 system,
Opticon2 system (Bio-rad),
7300 fast system,
Step one plus system (ABI)
Lightcycler II 480 (Roche).
我觉得如果不是做HRM，其实都差不多。不过我们组里都觉得Biorad CFX96比较user
friendly,但是出来的最晚。roche是用idaho的技术，资格比较老。ABI硬件很好，软件
很不好用。Rotorgene似乎温度控制的最好，不过没用的。能做HRM大概都是四五万块钱
.刚买没多久，还不知道售后怎么样。
http://hrm.gene-quantification.info/
Eppendorf, |
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w***a
发帖数: 4361 | 25 biorad CFX96一个run也就1小时多点吧。
这个机器还可以连上网络，设置一下，程序结束了直接email发结果。
两年要换，bio-rad是LED,基本上不用.bio-rad就像普通pcr仪可以开着overnight，第
二天看结果。前两个一定要走前关掉，要不机器一晚上轰轰响。bio-rad不好的地方就
是，升温降温比较慢。ABI和ro |
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e****p
发帖数: 354 | 26 做3’RACE 快半年了，用了好几种TAQ - strategen pfu, takara, biorad bioline,
invitrogen platium hifi. 3‘引物设计了6个，条件也优化（AT,elonging time, mg+
)，要不什么也没有要不没有P出目的条带（测序后错配了）。。。唉 都要崩溃了..
另外的一个基因到是P出来了，这个基因3'端有很多重复序 GC 50-60%的样子 请教大家
一般用什么办法或强大的酶。。。
非常感谢 |
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d***e
发帖数: 243 | 27 生物医学检测上应用很多，定量PCR仪，测序仪，液体芯片都能用到。检测仪器厂家如
Life tech, BioRad, Luminex都可调研一下。
统光学在 |
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M*****n
发帖数: 16729 | 28 biorad报价是不是水分很大？能还价多少？
今天刚刚拿了一个quote。 |
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a****d
发帖数: 1919 | 29 I used Geldoc from Biorad before,and I don't recommend it. |
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s******y
发帖数: 220 | 30 我买的biorad 的10x stock，dd水稀释成1x，做WB用， 室温保存，可是过一阵子就有
絮状物出现，
是长菌了吗？
这个1x的pbs要灭菌吗？ 还是低温保存了就好，
谢谢。 |
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b****y
发帖数: 105 | 31 对阿,biorad有用来做gene gun bullet的金子卖，我都用了好多了
或者买Pt金属条，我上次就买了一根1英尺的 |
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s******y
发帖数: 220 | 32 用的是biorad 的4%-20%的ready gel，用120v跑，跑完后都是梯形的，为啥呢？
谢谢。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 33 不太明白你的描述，是说跑完后胶本身变成梯形的还是每条lane从上到下由窄变宽？我
也用过他家的precast胶，虽然用得不多，但是胶本身变成梯形的情况好像没遇到过。
样品lane从上到下由窄变宽的情况倒是经常遇到，但也不光是跑biorad的胶会这样，
invitrogen的胶也这样，我自己配的胶也这样，可能像楼上说的那样，如果外电泳槽的
buffer加得少的时候会比较明显一点，但我也没特别注意过。我觉得只要resolution够
了就行了吧，反正大部分时候跑的胶都不是拿来publish用的。 |
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m**********d
发帖数: 137 | 34 新设计了primer，扩增genomic DNA的某片段，170bp左右，用qPCR来定量，primer退火
温度已测好，57°C
用SYBR green做qPCR，SYBR新从BioRad订的
25μl total volume
12.5μl SYBR green master mix + 0.1μl primerF (0.1μM in the fianl
concentration)+ 0.1μl primerR + 50ng genomic DNA + H2O fill up to 25μl
用的PCR program如下：
95°C 10min + (95°C 30sec, 57°C 30sec, 72°C 30sec) 40cycle + dissociation
curve
72°C elongation step读数
结果没有任何信号，dissociation curve当然也没信号或者有一些非常弱且杂乱的信号
我把sample拿出来，跑了个2%agar gel，结果非常清晰干净的一条带，size完全正确，
看不到primer dimer或者其他non-specific ... 阅读全帖 |
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c**********6
发帖数: 1173 | 35 你这样的条件足够强了，没有道理分不开
可能是你的urea gel不够好，我用过的invitrogen和biorad的precast gel的
denaturation效果都不如自己配置的8M的acrylamide gel好
然后，我觉得0.05M的NaOH 95C 30min 可能太强了，多条带有可能和DNA的degradation
有关吧 |
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M*****e
发帖数: 279 | 36 RNALater did not work for me when I extracted total RNA from my mouse (thin)
tissues that were snap frozen in liquid nitrogen, stored frozen, and ground or pulverized while it was frozen.
Without RNALater treatment and storage of mouse tissue in RNALater, I got
perfect total RNA from mouse tissues using the same RNA extraction method.
The quality of total RNA extracted from RNALater treated mouse tissues may
look good by NanoDrop. However, the quality is actually bad when it is
checked by Agilen... 阅读全帖 |
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l******a
发帖数: 3339 | 37 You can use Detergent compatible BCA assay from Biorad. Or Ellman's
reagent for thiol containing protein.
bound
phospholipid
how |
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B*****e
发帖数: 1005 | 38 刚开始的时候就是低压overnight,以dye跑不了胶为基准，第二天来再跑，这样就可以
算到时间了。如果你跑的是biorad的mini胶的话，好象十多个小时就可以了，但前面的
预跑很麻烦。 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 39 Biorad Protein assay, compatible with 0.1% SDS. |
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A******y
发帖数: 2041 | 41 I hope you have checked your primer linearity at least. I don't think Biorad CFX-96 needs adjustment. Its optic is based on the chrome4 fiber-optic module. |
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v***2
发帖数: 131 | 42 Have you done the melting curves? how many products do you have after the
real time PCR? Have you perform the cDNA gradient dilution to optimize your
template concentration? Have you use ROX as refrence? And where do you fill
your samples? is it in edge?
Biorad real time PCR is not so specific, from my experience, Applied system
is far better. |
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c**********e
发帖数: 230 | 43 功课没做够，打回去。
biorad网上，qPCR相关的介绍里就推荐的 |
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D******U
发帖数: 385 | 44 还是miniblot湿转吧
着急的话40-50v/gel 冷室加冰 20%甲醇 2-3hrs
250-5kd转的刚刚的
Nitrocellulose膜好点 就是杂交时不禁造
WB这玩意 这么多年 各种新设备都试了 还是老办法效率最好 |
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i**********a
发帖数: 1402 | 45 一般是15v一个小时，不要用他们建议的，20v一个小时也行 |
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q*****n
发帖数: 331 | 46 Did you pre-sock and activate your PVDF with Methanol?
Check your transfer buffers? Were they made correctly?
We use:
25 mA per membrane and maximum voltage set at 35V for 0.5 hour.
It transferred really well. |
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p*3
发帖数: 45 | 47 我一般是40mA 每块胶 三小时，或者10mA每块脚过夜的。如果蛋白小于20kd就稍微缩短。
做过几百回，没问题的。 |
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J******r
发帖数: 2806 | 48 我觉得以上说的有道理，同时提醒一下：
check the PI of your protein
因为buffer的ph是一定的，所以半干的buffer不试用于所有的protein |
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