A***g
发帖数: 191 | 1 我的蛋白就是抽提的不同human cell line的核蛋白，不是什么特定的蛋白。不过可能
buffer会有问题。 |
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A***g
发帖数: 191 | 2 Yes, I activated my PVDF with Methanol for 5 min.
I will try to set up 25 MA next time.
For voltage, since the protocol said: Do not exceed 25 volts, so I never try
higher voltage. |
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d*********y
发帖数: 473 | 3 是不是transfer buffer干掉了？
paper |
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c**********e
发帖数: 230 | 4 semi dry的话, 应该是constant current
wet transfer才应该是恒压的 |
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Z******5
发帖数: 435 | 5 100mA 一个小时，50kD以下都没问题。 75kD的可以考虑延长到一个半小时。 |
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s****u
发帖数: 483 | 6 i compared the result side by side for a 300kd protein transfer.
traditional wet transfer 1hr vs. iblot 7+1 additional minutes
conclusion: traditional way beat iblot by at least 5 fold. |
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A*******e
发帖数: 284 | 7 你用的是什么transfer buffer阿， 我一般20V 18MIN，都转的干干净净的，这一步从
来没有出过问题。标准的mini gel，刚开始的时候电流达到300mA 以上吧， 然后逐渐
下降。PVDF膜我一般甲醇里面过一下然后水洗 再在buffer里面泡， 滤纸胶也一起泡
泡几分钟看心情，然后就转了 |
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a***c
发帖数: 960 | 8 我也有楼主说的问题，是不是buffer有问题呢？
我用的是Towbin buffer（25 mM Tris, 192 mM glycine (20% methanol)），Bio-Rad
的机器，测了buffer的pH8.5，似乎没有问题。
你的buffer配方是什么？ |
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f*******a
发帖数: 671 | 10 Biorad有卖western用的non-fat dry milk,非常细腻容易溶解。 |
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s**u
发帖数: 9035 | 11 最近，我们实验室购买一台Bio-rad CFX96 real-time PCR， 用一个月后，数据不稳定
，特别是边缘效应明显，A12--H12数据偏高，中间也有数据乱跳的现象。公司派了一个
Engineer检查，说产品合格，Lid压力偏低，可能导致Plate压不紧，液体挥发。建议更
换新的Lid， 可是地区Manager不同意，说完全合格。
只几天8/27，8/28 作8块plate,效果还是比较好，8/29连续2块Plate均不好，数据乱跳
。我们现在每次Run完，均需要让PCR shut down15 分钟再继续Run,可是还是很不稳定
，正是愁死我了。我们有大量临床Sample。
请教使用过Bio-rad CFX96 realtime PCR的朋友们，仪器不稳定的原因有哪些？如何解
决？我们3人操作绝对没有问题，以前使用Biorad-IQ5也有同样问题。 |
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v***2
发帖数: 131 | 12 Hi, have you run minus RT? and have you checked the primer dimer? I dislike
the BioRad instrument too, it is not as stable as the Applied Biosystem |
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s**u
发帖数: 9035 | 13 We use Biorad multiplate PCR plates Low 96-well clear (MLL9601, LOT# LCRN1,
DOM: 230311), and PCR sealer Microseal 'B' film (MSB1001, LOT# 115084, DOM:
230211) to do our experiment. |
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s**u
发帖数: 9035 | 14 Bioread sales representative came to our Lab this morning and told us that
Biorad will replace our current CFX96 and replace a new one, hopefully we
will get it next week. |
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s**u
发帖数: 9035 | 15 I just got email from FEDEX, our new biorad CFX96 realtime PCR has been
picked up in CA, on 9/9/11 16:19 pm (Eastern time 19:19). |
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a***e
发帖数: 1010 | 16 Agilent 的 bioanalyzer 2100 和 BioRad 的 experion
比较起来, 谁好用些? 各有什么好坏的地方?
多谢. |
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s*********t
发帖数: 600 | 17 是每次都要做标准曲线吗？那也太麻烦了吧
我们实验室的做法：167ul的BioRad的bradford溶液 加833ul水，混好加1ul稀释的样品
，用空白的样品调零，595nm测得的读数，每0.06算1ug／ul。读数最好不低于0.1，不
高于0.6, 高了就稀释样品。
这个误差是不是很大啊？一直对这个protocol不放心，不过大家都是这么测的。 |
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s*********t
发帖数: 600 | 18 那做一次标准曲线是不是可以一直用啊？
我看biorad的instruction manual给出了bsa和IgG的标准曲线啊
你介绍介绍在非英语国家转行的经验啊，我也不想干生物了，累得要死还没钱没成就感，实验老是失败。
鸥鸟师兄挺能耐得住的，一把年纪了，坚持了那么多年，我佩服他。 |
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M*******C
发帖数: 183 | 19 当我用含1-2% SDS 的lysis buffer收的蛋白，就没法用平时的那种Biorad的棕色那个
来定量了，因为有SDS的lysate加进去就变绿了。 想重新根据波长制作曲线，但失败了
，就是说在试不同的蛋白梯度做曲线时，蛋白量太大呢，有时甚至变成深蓝。。 反正
乱七八糟的。
多谢！ |
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s******s
发帖数: 13035 | 20 蛋白沉淀下来再测就行了。biorad RC-DC |
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R****n
发帖数: 708 | 21 杂志社要求
We need to have full control over the figures, that is, to be able to click
inside the figure to edit the lines, the arrow heads, and the font of the
words written inside the figure to match the journal style.
Please access the MTS and upload each figure in a separate (ps, eps, fig, ai
, Visio, wmf, emf, jnb, pzf, Excel, PowerPoint, opj, or cdr) files to
proceed with the publication process of the manuscript but please make sure
that it is editable, taking into consideration that any figur... 阅读全帖 |
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s**u
发帖数: 9035 | 23 Req Number: L11-177
Location(s): Boston MA
Career Field: Sales/Field Applications Scientist
Education: MS/PhD
Duties and Responsibilities:
Digital PCR Specialist Position
The successful candidate will utilize their knowledge and understanding of
digital PCR technologies to develop and support sales initiatives in the
United States. As part of the QuantaLife team in the Gene Expression
Division, this position will serve as the key liaison between the customer
and QuantaLife. The Specialis... 阅读全帖 |
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b*******8
发帖数: 39 | 24 这个fiedl application scientist职业发展前景怎么样呢？ |
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t**********n
发帖数: 283 | 26 Thanks for your post...though not a good match... |
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K**y
发帖数: 34 | 28 想做个大蛋白。准备买Invitrogen的胶。除了Invitrogen自己的一个转膜系统，tris-
acetate的胶也能用biorad的semi-dry么？
他们的说明书上只是用很小篇幅说了下Bis-Tris的能用。没有提tris-Acetate胶 |
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D*a
发帖数: 6830 | 29 我们的biorad agarose胶和WB膜都可以扫，然后quantification用它自带的软件，也不
算浪费啊。 |
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s********r
发帖数: 312 | 30 我是biorad的那个loading buffer,950ul+50ul beta-ME,然后用水1:1稀释。直接加到
孔里，一般12孔板一个孔100-250ul，晃一晃等2分钟，然后200ul的tip前面剪掉，刮一
刮收起来，煮沸上样。 |
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A*******e
发帖数: 284 | 31 用biorad 4-15%的precast gel，用的倒是很爽， 跑得也挺好，但有点小贵，尤其是大
量用的时候。 想自己制一些，请问有无高人自己制过？ 能share一下制法吗？ 多谢了
！ |
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R*****o
发帖数: 14902 | 32 你如果能复制biorad的干胶，你不业发财了？哈哈。
试试把凉的gel真空包装放-20C，看看能放多久 |
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s******y
发帖数: 220 | 33 转膜后，在page 胶的顶部（分子量大的蛋白部分）总是残留在膜上，下部很快就能弄
下来。
为什么会这样呢？
跑得是biorad的4-20%梯度胶，
我要看的一个目标蛋白正好还在有胶残留的那块，会影响下游的WB结果吗？ 用的那个
一抗本来就有点tricky，有这个残留的胶估计更讨厌了。
有什么办法能把膜弄得更加干净点吗？
谢谢。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 34 它自己说TGX gel可以跑到300V不smile...当然我是不会试300V |
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C*********m
发帖数: 213 | 35 en 还可以,15分钟就差不多可以取下来染色了 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 36 best gel should Bistris from invitrogen. |
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C*******e
发帖数: 4348 | 37 我们现在就用TGX的
不过没听说“prestain”
我们跑150V-160V
半小时就好
觉得够快了
没试过300V跑 |
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j*******n
发帖数: 8 | 39 各位亲，实验室要新买一台qPCR仪，本人没有经验，请教一下版上各位有经验认识这几
家公司的那个型号比较好用？bow！
BioRad Agilent, Applied Biosystems, Roche Applied Science |
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E*****1
发帖数: 610 | 40 The possibilty of gel:
Impossible, I tried gel from both pre-made of biorad and home-made
neither works
I checked TBS, PH is 7.6, a little bit high but not that high
I doubt maybe protein penetrate through PVDF membrane but like sunnyday
said "即使转膜不完全，不可能一点都看不到的"
It is so werid! |
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D*a
发帖数: 6830 | 41 我们用的biorad的，不知道Oddysey，彩色的是啥彩？maker和带叠加那种？
彩色的Fig贵啊。。。自己打印反正就是墨盒，无所谓拉。
的？ |
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k****o
发帖数: 589 | 42 有产品的说明吗？一般还是按厂家推荐的来比较好，因为是实验确认过的。cDNA浓度你
可以用普通的qPCR摸摸范围，一般Ct在20－35这个区间比较好。但是据我经验，Biorad
的机器15－35都没啥问题。
个人觉得不宜用PCR array下结论。这东西更适合作为一个筛选工具。何况要做下去你
也得重复验证才行。这点和microarray比较像。 |
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E*******2
发帖数: 131 | 43 我没做过，听大家讨论的时候教授说这个实验的ct要控制在30以下，而不是35。具体理
由没能说服我，忘了。同意你说的这只适合做筛选，我导师被一外援教授忽悠买了好几
套板了，结果重复性比较差。
Biorad |
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r*m
发帖数: 16380 | 44 我们刚买了biorad的QPCR系统，培训的时候专门讨论了这个。
还有更高级的QPCR（不太普及），可以精确到10%这个范围。
用普通QPCR定量到20-30%，某种意义上是欺负reviewer也不懂。 |
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b***n
发帖数: 36 | 45 请问版上有玩ＧＰＣＲ尤其是dopamine receptor的兄弟姐妹不
我现在在做DR internalization, 试了好几种办法，
不管是Membrane biotinylation,
或者是用Flag M2在没有fix之前去label外膜上的receptor
或者是用Radio ligand来做，
都不是很成功，最近试了一下用Sucrose gradient (35%)来分heavy membrane 和light
vesicle, 应该是有看到了一些internalization.
不过最大的问题是用ＦＬＡＧ Ｍ２做完ＷＢ后看到的并不是一条单一的带，而是一片
的smear,
应该是某些地方没做好，所以Ｄ２Ｒ都聚集了
用的是Biorad的ＳＤＳ loading dye 配方直接溶解膜
或者也试过ＲＩＰＡ和ＴＢＳ＋１０％甘油＋１％triton
效果都不是太好
但是看了不少ｐａｐｅｒ貌似人家都是做得出来了
这个事情搞了大半年，一直没能搞定，老板又特别楞，从来不给些建设性的意见，每隔
一段时间都要威胁一下做不出来就开除，已经被威胁了十数次，真是有点窘境穷途了,,
,,还能不能接着... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 46 Re LZ
>当时跑电泳的胶是自己配的，
and
>我还是想选择去另外准备一份
Biorad 梯度胶 在有的代理商那里 批量进货 有打折价的
如能 用下预制的这个, 2D PAGE 后做array LC/MS-MS 才较保险
省了子弹费 现在问炮弹费 2K USD 要不要省的话 是本末倒置的做法
Ps:
just curious
>样品比较珍贵
>现在已经在那里放了7个月了。
LZ Are your kidding us? |
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c******m
发帖数: 503 | 49 听说有人归了国内Biorad。有没有了解的，这个和药厂比待遇，出路怎么样？想试试投
国内的了。
多谢！ |
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s******s
发帖数: 13035 | 50 跑歪倒不会，会越跑越宽， 每个空孔都要加上sample buffer。
多数蛋白都是梯度胶比较好，有些糖基化啥比较厉害的，可能普通胶好 |
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