l**********1
发帖数: 5204 | 1 Materials and Methods
Mice
FVB/N mice carrying the human DTR transgene under control of the CD11c and
CD11b promoters obtained from Dr. R. Lang (Divisions of Ophthalmology and
Molecular and Developmental Biology, Children’s Hospital, Cincinnati, OH)
were backcrossed onto NOD/LtJ mice (origi- nally purchased from The Jackson
Laboratory) for 10–12 generations to produce CD11c-DTR/NOD and CD11b-DTR/
NOD mice;
DTR transgenes were identified by PCR on tail DNA using primer se- quences
for DTR-1 (5'-A... 阅读全帖 |
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m******5
发帖数: 1383 | 2 想构建ChR2 T2A linker DTR pA这样一个cassette
打算Gblock ChR2 T2A
T2A DTR这样一个组合，然后 Gibson assembly
求可靠的ChR2 DTR T2A linker序列！
谢谢！ |
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z****u
发帖数: 1007 | 3 channelrhodopsin 光控激活action potential.
DTR 表达 diphtheria toxin receptor,加入diphtheria toxin DTA后导致细胞死亡。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 4 主要是可靠的DTR序列和T2A序列，版本多得玲琅满目 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 5 写伊妹儿问他要 mice DTR full sequence data
above paper last/corresponding author:
Jonathan D. Katz, PhD
Professor, UC Department of Pediatrics
Phone: 513-636-5306
Email: jonathan.katz (at) cchmc.org
from
//www.cincinnatichildrens.org/bio/k/jonathan-katz/
就说你们lab CNS submitted draft will cite his that paper bla bla bla... |
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C********4
发帖数: 308 | 6 一个条件性细胞剔除模式小鼠的诞生 (2013-02-22 18:10:22)转载▼
标签： talen 创业 大鼠基因敲除 基因敲除 杂谈 分类： 个人随笔
对于基因敲除（gene knockout）小鼠大家并不陌生，比如我们想要研究一个基因
在体内的功能，我们就可以把这个基因从小鼠体内敲除掉。而有的时候我们除了关心一
个基因的功能外，还想知道表达这个基因的细胞在体内是干嘛的。比如，我们想知道B
细胞是干什么的，胰岛细胞是干什么的？我们可以从小鼠体内把这些细胞清除掉（也叫
细胞剔除，cell depletion），一看不能产生新抗体了，或是胰岛素没了，血糖升高器
官衰竭了，我们就可以恍然大悟说：“你看，胰岛细胞是产生胰岛素的，B细胞是产生
抗体的”。然后就可以发文章到CNS（Cell, Nature, Science）了。当然这些都被别人
发现过了，是我们没有赶上好时代呀。
那怎样才能在体内把一群细胞清除掉呢？方法可能很多，但也真不多。这里我讲一
个非常简单的方法，就是白喉毒素介导的细胞剔除。白喉毒素（Diphtheria toxin, 简
称DT）大... 阅读全帖 |
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c***s
发帖数: 70028 | 7 如何在新兴市场行事，这对于所有企业都是一个严峻挑战。IBM就陷入这样的漩涡：IBM在新兴市场实现了关键的增长，但伴随的是上百件违规案例的曝光。
近日，美国华盛顿哥伦比亚特区联邦地区法院公布的文件称，IBM已同意支付1000万美元了结一桩与海外贿赂有关的民事诉讼。IBM旗下三家子公司和韩国合资公司的雇员涉嫌在1998年至2009年间以现金、不适当的礼物和海外旅行方式贿赂韩国和中国官员。
本报独家获得的这份提交给Leon,RichardJ。法官、编号为“1:11-cv-00563”的诉状称，尽管拥有广泛的国际业务，但IBM缺乏足够的内部监控用以阻止或者侦查违反FCPA(《美国海外反贿赂法案》)的行为。
3月24日，IBM中国所有员工收到了来自公司公共部门的一封邮件，要求“不对外界就此事作任何评论”。“此事”，指的是SEC(美国证券交易委员会)的上述指控。
行贿细节
上述诉状显示，在1998至2009年期间，IBM不能提供在中国和韩国不当支出的账簿和记录，因为这些支出都被计入了合法业务开支。其中，2004年至 2009年间，IBM在中国的两家全资子公司——IBM(中国)投资有限公司和IBM全... 阅读全帖 |
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J********3
发帖数: 3151 | 8 这个文章有矛盾哈！
文章第5段有如下内容：“且慢，还不行。因为Rosa26启动子太弱了，即使是用EYFP单
基因，阳性跟阴性也只有不到一个log的区别。把DTR-2A-EGFP放那里，谁知道是不是能
够看到EGFP信号呀。所以我们想可以放一个强启动子，于是我们选择了pCAG启动子，这
家伙不但动力强劲，而且是放哪儿都混不吝。也就是文言文里说的ubiquitous。这样就
开始做一个叫做pCAG-loxP-STOP-loxP-DTR-2A-EGFP的工具鼠。”
说的Rosa26启动子太弱了，所以做了pCAG-loxP-STOP-loxP-DTR-2A-EGFP的工具鼠！
可是第6段如下：
“于是我们把它跟一个免疫细胞特异基因（CD19）的cre小鼠交配，年前得到了一只
CD19Cre/Rosa-iDTRGFP小鼠。”
这一句显示并没有用到动力强劲pCAG-loxP-STOP-loxP-DTR-2A-EGFP的工具鼠，明明是
用的启动子太弱的Rosa26-loxP-STOP-loxP-DTR-2A-EGFP工具鼠，呵呵。
自相矛盾啊！ |
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D*****r
发帖数: 1239 | 9 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: longwoodwalk (长木行走), 信区: Biology
标 题: 讲讲我的生物创业过程
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Apr 8 09:21:11 2013, 美东)
我因为最近一直在中国，所以来这里很少了。这次回美国来再到这个版，读帖子觉
得非常亲切，不管是积极的还是消极的，都还是那样熟悉。一时心血来潮就想写点自己
的经历，希望对学生物的朋友有点帮助，或者至少知道还有别的路可以试试。没想到会
有这么多的网友读了，并得到了这么多的祝福与鼓励。非常感谢大家。尤其是好多朋友
还给了非常具体的建议，包括知识产权建议（这些我们已经意识到并跟一个知识产权律
师事务所签订了服务协议）、公司运作方法建议、未来公司应该发展的方向等等。这些
都让我受益匪浅。现在不是我的帖子给大家鼓励了，而是我从大家的回复中获得了很多
的灵感，这对我后面把公司做好非常有益处。
本来在这里是写着玩儿的，以我以前的经验来看，读者应该不过几百人或最多1、2
千人。现在看到这么多人来读，并已经有人把这个帖子转到了国内微博上，我还真有... 阅读全帖 |
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a****y
发帖数: 1035 | 10 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: longwoodwalk (长木行走), 信区: Biology
标 题: 讲讲我的生物创业过程
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Apr 8 09:21:11 2013, 美东)
我因为最近一直在中国，所以来这里很少了。这次回美国来再到这个版，读帖子觉
得非常亲切，不管是积极的还是消极的，都还是那样熟悉。一时心血来潮就想写点自己
的经历，希望对学生物的朋友有点帮助，或者至少知道还有别的路可以试试。没想到会
有这么多的网友读了，并得到了这么多的祝福与鼓励。非常感谢大家。尤其是好多朋友
还给了非常具体的建议，包括知识产权建议（这些我们已经意识到并跟一个知识产权律
师事务所签订了服务协议）、公司运作方法建议、未来公司应该发展的方向等等。这些
都让我受益匪浅。现在不是我的帖子给大家鼓励了，而是我从大家的回复中获得了很多
的灵感，这对我后面把公司做好非常有益处。
本来在这里是写着玩儿的，以我以前的经验来看，读者应该不过几百人或最多1、2
千人。现在看到这么多人来读，并已经有人把这个帖子转到了国内微博上，我还真有... 阅读全帖 |
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s**********8
发帖数: 25265 | 11 The International Organization for Standardization (French: Organisation
internationale de normalisation, Russian: Международная орг
анизация по стандартизации, tr. Mezhdunarodnaya
organizaciya po standartizacii),[1] widely known as ISO, is an international
standard-setting body composed of representatives from various national
standards organizations. Founded on February 23, 1947, the organization
promulgates worldwide proprietary industrial and commercial standards. It
has its headquarters in ... 阅读全帖 |
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z****e
发帖数: 2024 | 12 9,我同意你说得。原因不是因为在dtr里边，也不是因为是pure virtual，原因是因为
一个没有定义的pure virtual。定义了，就可以调。但是dtr里边只能调local版本。
if
this |
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z****e
发帖数: 2024 | 13 class refc{
public:
refc():cnt(1){cout<<"refc ctr: "<
refc(const refc& x):cnt(x.cnt){++cnt;cout<<"refc cp-ctr: "<
refc& operator=(const refc& x){
cnt=x.cnt;
++cnt;
cout<<"refc op= "<
return *this;
}
~refc(){--cnt;
cout<<"refc dtr "<
}
void nul(){}
private:
int cnt;
};
refc f10(){
refc k;
cout<<"k exist()"<
return k;
}
int main(int argc, char* argv[ ]){
refc x=f10();
}
》
refc ctr: 1
k exist()
refc dtr |
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k*****2
发帖数: 252 | 14 你用的是g++吧
VC2008的输出就不一样：
refc ctr: 1
k exist()
refc cp-ctr: 2
refc dtr 0
refc dtr 1 |
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c*******c
发帖数: 62 | 15 3-3-44
Both serum K and serum Ca are low. This pattern is highly suggestive of
hypomagnesemia. Given that the serum Mg is only 0.8mEq/L, this confirms our
suspicion; therefore, the answer is B.
I agree that theoretically hypomagnesemia should give hyperactive DTRs, but
this guy has probably got alcoholic peripheral neuropathy, so DTRs are not
very reliable at all.
3-3-26
I remember looking up this question as well. I think in early septic shock,
preload and afterload are decreased, and myocardia |
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d*********n
发帖数: 18 | 16 this one of my CS protocols, hope can help whoever going to take the test, I
don’t need any more.
not perfect, but good to figure out diagnosis, should not miss the diagnosis
,
do not need to ask all questions , must adjust base the case,
if better ideas, pleas modify to make easier for people who may need
Amenorrhea
Mental check list:
Pregnancy,
hyperprolatinemia,
hypothyroidism,
PCOS,
premature menopause,
depression
asheman syndrome,
anorexia nervosa,
strenuous exercise
Patricia Garrison, a 36... 阅读全帖 |
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x*f
发帖数: 902 | 17 把dtr的衰落简单归咎于黑鬼暴动，楼主没逻辑，没脑子。脑子可能有，但可能脑洞太
大，光吹风，不运算。 |
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s*******a
发帖数: 840 | 18 要搬家了，估计几年之内安定不了。准备把前几年攒的东西都处理掉。先发到这里看看
有没有人要，然后再放医院。这次先放大点的设备。以后会另发一帖随身设备。下面的
价钱都含邮费。我买东西的时候基本都是盯医院几星期到几个月，非最低价不买，而下
面列的价钱都远低于我的买入价，只是想尽快把东西清完。如果想看照片的话可以给我
发邮件。
音箱：
Mission（美声）773e 落地箱. good condition，有两处chip。 英国造. 带原装
box。$220
Mission 700 书架箱一对, 加Mission 70c1中置音箱一个. 欧洲/英国产. good/
fair condition. $90
多声道前级:
Lexicon MC-1，曾经Lexicon的旗舰，MSRP>$6000.带DTS解码.带原装remote和说明
书等。 Very good condition. $260
Lexicon DC-1，比MC-1早一代的旗舰, MSRP>$2000. Good/fair condition. 带说
明书。$80
后级：
Myryad T-70... 阅读全帖 |
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i****x
发帖数: 17565 | 19 不是导购贴，已经买了，也不打算换新或升级。只是我自己完全不懂器材，按自己需求
和感觉稍微研究一下试听了几款就买了，好奇这套东西的档次如何，短板在哪，也算长
点知识。
主要用途：nvidia 3d vision pc播3d电影，玩3d游戏，ps3玩游戏和播3d蓝光，卡拉ok
，偶尔听音乐（尚且没有那种静坐几个小时的闲情逸致）。
影音设备：
松下60寸3d等离子，四副眼镜。电视$1.7k（阁楼空间装不下投影，另外坐的离电视较
近）。效果较满意，有的游戏略有鬼影，3d模式下需关灯否则太暗。游戏UI会造成轻微
烧屏现象，比如一个圆形的地图等。久了好像就又淡了。
onkyo 818 receiver（碰到deal，$700)，7.2，主音箱双驱。支持Audyssey MultEQ
XT32最新校准功能，很多人说神奇，我没听出什么翻天覆地的变化。店主推荐integra,
DTR 20.4, $550，我一查，只是个最低端onkyo拉皮款。正好去年black friday，出来个
amz onkyo 818的$650的deal，我赶紧说我就买哪个，把店主气得够呛，说什么onkyo
不好，integr... 阅读全帖 |
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s****g
发帖数: 56 | 20 singleton for sure.
I don't think you can call dtr from ctr.
before ctr finishes, the object does not exist, yet.
of |
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l****c
发帖数: 838 | 21 If ctr throws exception, dtr will not be called at all. |
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h*****s
发帖数: 275 | 22 【 以下文字转载自 Sex 讨论区 】
发信人: hopless (不堪回首), 信区: Sex
标 题: what a hotel room
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 17 18:10:25 2012, 美东)
gotta a business trip down to NYC today.one of the neighbourhoods got crazy
Jiao Chuang this afternoon, fortunately it is not mid-night, otherwise how
could i survive with it?
DTr financial street is not recommended in terms of this...
sigh...................
where is my lovemate? |
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s*******a
发帖数: 840 | 23 【 以下文字转载自 HiFi 讨论区 】
发信人: stchenhua (stchenhua), 信区: HiFi
标 题: [bssd] moving sale [不上十大][请勿转载]
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jun 24 14:27:09 2011, 美东)
要搬家了，估计几年之内安定不了。准备把前几年攒的东西都处理掉。先发到这里看看
有没有人要，然后再放医院。这次先放大点的设备。以后会另发一帖随身设备。下面的
价钱都含邮费。我买东西的时候基本都是盯医院几星期到几个月，非最低价不买，而下
面列的价钱都远低于我的买入价，只是想尽快把东西清完。如果想看照片的话可以给我
发邮件。
音箱：
Mission（美声）773e 落地箱. good condition，有两处chip。 英国造. 带原装
box。$220
Mission 700 书架箱一对, 加Mission 70c1中置音箱一个. 欧洲/英国产. good/
fair condition. $90
多声道前级:
Lexicon MC-1，曾经Lexicon的旗舰，MSRP>$6000.... 阅读全帖 |
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z****e
发帖数: 2024 | 24 下面这个调试过了。
但是觉得改动比较大，看着很水。
等着哪位大牛给说说用auto_ptr的事了。
另外，像我这样在ctr里加一个new，op=很可能要重写的。我没写。
#include
#include
using namespace std;
class Point {
public:
Point(){}//加一个ctr
Point(int xx, int yy):x(xx),y(yy) {}
private:
int x, y;
};
struct RectData {
Point ulhc;
Point lrhc;
};
class Rectangle {
public:
Rectangle(Point co1,Point co2) {
pData=new RectData();//加一个new
pData->ulhc=co1; pData->lrhc=co2;
}
virtual ~Rectangle(){//加一个dtr
if(pData)delete pData; |
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z****e
发帖数: 2024 | 25 1.D std::string lack of virtual dtr
2.E make everything an object
3.C singleton
4.
SomethingExtraordinary() : mCacheValue(mValueMaker.GetValue()){}
int GetValue() const{
return mCacheValue;
} |
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z****e
发帖数: 2024 | 26 virtual destructor？不需要吧？
如果ctr等等都是private了，就无法继承，就不需要virtual dtr了吧？
小的要挑战权威啦。哈哈。
也可能没有理解你的意思。
版主还是看看我那个heap和stack的帖子，你有没有教导。 |
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z****e
发帖数: 2024 | 27 我知道你知道我不知道。
我理解错了，我还以为你后面那个“3”是说第3题，我就说不需要vritual dtr，因为private ctr，都无法继承了。当时还想，怎么红猪侠说这个？
原来你是引用的标准。
唉，不好意思，又烦劳你打了一遍，算在我头上吧。 |
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g****y
发帖数: 436 | 28 请问下面MAPPER的type应该如何写？先谢过了！
//hist_helper.h
namespace hist_aux {
template<
typename C,
typename T,
typename MAPPER
>
void getHist(const T& vals,
MAPPER pf,
C& res) {
typename T::const_iterator it;
for (it = vals.begin(); it != vals.end(); ++it) {
res.at(pf(*it))++;
}
}
} /* namespace hist_aux */
namespace hist{
class Hist {
public:
// ctr & dtr
// ...
size_t count_mapper(size_t v);
size_t index_mapper(size_t v);
size_t pixe... 阅读全帖 |
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l*****m
发帖数: 122 | 29 最近需要在老鼠里杀掉DC看看 但是又不能用DTR来做 想看看有没有直接用antibody
deplete DC的应用 我查到的基本都是in vitro条件的 想问问大家有没有谁做过in
vivo的呀？或者有推荐文献也行 谢谢啦！ |
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s****9
发帖数: 932 | 30 I do not know. I assume that DC is very good at internalizing antigens and
bounded Ig can be easily internalized before successful ADCC occurs.
Similarly, I never see any reference depleting macrophages in vivo using mAb.
In addition, if CD11c-DTR cannot be used and macrophages play little role in
your system, you might consider clodronate liposome. High dose of CLL
depletes macrophages and most dendritic cells. |
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p****l
发帖数: 291 | 31 in vivo不都是用
Steffen Jung或者Guenter hammerling的老鼠吗
你不能用DTR为啥？ |
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U******u
发帖数: 5829 | 32 shyj: 我的考版match路--以此文纪念在美国逝去的10年青春
http://mitbbs.com/pc/pccon_2289_t379_150975.html
发信人: shyj (baobao), 信区: MedicalCareer
标 题: 我的考版match路-以此文纪念在美国逝去的10年青春 (很长很罗嗦，慎入！）
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 3 17:31:55 2010, 美东)
Match的结果终于尘埃落定，周1等电邮的时候非常紧张，因为成败就在此了，虽然一直
告诉自己，今年只是热热身，成败都可以接受，但到真的揭晓的时候，还是很紧张，毕
竟一旦卷入其中就身不由己，何况自己也还是有所付出。到周4等match program的时候
虽然也有点紧张，但程度已经大大减少，1个原因是毕竟match上才是头等大事，去哪里
尚在其次，还有1个原因是心理还是有所准备了，虽然希望留在home school，但直觉告
诉我恐怕是非常困难了，在我rank list上第二位的program应该就是我要去的地方，果
不其然。经过几天的等待，发现果然是要搬家了。
对于我... 阅读全帖 |
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y*********u
发帖数: 183 | 33 问问，这种transgenic mice常用组件质粒哪里有卖啊？
搜了半天搜出来一堆老鼠，没有质粒 |
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v*********d
发帖数: 382 | 34 jackson has iDTR mice available, for plasmid, you has to request from
Germany |
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z****u
发帖数: 1007 | 36 functional + ablation study. Cool. |
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l**********1
发帖数: 5204 | 38 双十包子 = 200 W-E-I-B-I 还差不多 值份外的脑力 手力labor (joke only) |
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m******5
发帖数: 1383 | 41 直接表达后可用的，非precursor
google半日后只找到human版本 |
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m******5
发帖数: 1383 | 42 Thank you!! I have still looking for full length sequence
Jackson
AGATGAACTTCAGGGTCAGC |
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m******5
发帖数: 1383 | 43 Dtr dt
embryoid body differentiation 常用 |
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C********4
发帖数: 308 | 44 1）DT注射到体内的量很少，一个细胞分不到多少DT; 2) DT有两个亚基A和B，B负责跟
受体结合进细胞，并在endosome/lysosome里降解，A进cytosol里搞破坏。即使A流出来
，没有B也进不了别的细胞。3）现在打靶载体上都带DTA做阴性筛选，从来没有见到DTA
从被杀死细胞流出来影响别的细胞。
再有就是这个方法已经应用了超过10年，没有遇到过问题。做这个改进主要是两个目的
： 1）提高细胞剔除效率: A)用强启动子，使DTR表达水平提高；2）加EGFP使细胞可以
被追踪又可以随时被清除，比如我们想观察某群细胞被杀死之后的再生情况。 |
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b********e
发帖数: 50 | 46 这个估计楼上有几位根本就没看懂或根本没仔细看。常做动物实验的肯定就能明白区别
。说rosa-GFP-dta鼠，这个小鼠一出生全身是绿的。用Cre后去掉GFP, Dta表达，细胞
直接死掉。楼主这个小鼠是有Cre的细胞才表达GFP, 但细胞不会死。只有给DT这些细胞
才死。至于rosa启动子，LZ说了设计的时候是为了跟踪DTR阳性细胞。什么时间说rosa
能够survive了？我们实验室有很多cre鼠，我觉得这是非常有用的一个，至少在某些方
面比楼上提到的几个有优势。
B |
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y***i
发帖数: 11639 | 47 去他的微博看了一下，好像是他们公司自己发展出来的技术
“我们用Extreme Genome Editing (EGE)系统通过基因敲进的方式，分别跟ACTB（细胞
骨架）和LMNB1（核蛋白）加上GFP标签。可以看到其效率比CRISPR/Cas9高很多倍。而
且，通过各种检测，发现90％以上是同源重组，随机插入很少。现在我们正在做多基因
敲进，这对于研究细胞内蛋白相互作用非常有帮助。”
“这是在两个不同基因上分别敲进了DsRed和DTR-EGFP，并做成融合蛋白。这次敲进不
是用ODN, 而是比较大的DNA片段敲进。看来我们的EGE系统真的非常好用。是不是应该
发一篇文章。” |
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l**********k
发帖数: 189 | 48 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
基因组编辑系统。然后我们就看这个系统是不是可以在大鼠上用。因为信心比较大，我
们就直接进行双基因敲进实验了。分别是在大鼠CD4基因后面加上DsRed，在FoxP3后面
加上 IRES-DTR-2A-EGFP-p... 阅读全帖 |
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