r****r
发帖数: 6957 | 1 include 1/1000 of estradiol with tamoxifen will help the problem.
Tamoxifen (T5648; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) was diluted to 10 mg/ml in
sunflower oil. All doses were adjusted for maternal bodyweight, so that a 1
mg dose of tamoxifen means that 1 mg per 40 g of bodyweight was provided.
For most experiments, pregnant dams received 1 mg/40 g bodyweight by oral
gavage. Estrodiol (E8875; Sigma-Aldrich) at 1/1000th the concentration of
the tamoxifen dose was included in most gavage experiments to... 阅读全帖 |
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b*****n
发帖数: 1841 | 2 新鲜配的tamoxifen很清澈，没问题，溶剂是玉米油（85%）和酒精（15%）。分装冻融
后有的管子有气泡，摇一摇就呈浑浊状，而且即便在65度温育也不能重新溶解。没有气
泡的管子的tamoxifen正常。
并且正常的tamoxifen溶液通过needle后，也变得不可溶地浑浊。
这种浑浊液有点像水相/油相形成的乳浊液。但是也怕是tamoxifen固体析出形成的。
不知道板上有没有人遇到类似的情况。这样的tamoxifen还能用吗？ |
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K**R
发帖数: 193 | 3 我在想一个问题，现在都做tamoxifen 去敲出基因。 一个加过tamoxifen 一个没有，
然后用sequencing 或者其他技术比如western测试下游信号变化。
但是我想，如果到到时候会有人质疑你数据 因为一个你加过tamoxifen，很可能是
tamoxifen引起的，这个还挺难解释的。
如果这样，那我做RNA-seq 是不是还的加上一个tamoxifen处理WT mouse的，然后用
treatment group信号减去negative control 然后在和control比？
但是似乎很少看有人这么做？
谢谢 |
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s********l
发帖数: 58 | 4 问个弱弱的问题，tamoxifen和4OH-tamoxifen结合雌激素受体，会不会有非特异效应？
比如说，它的雌激素拮抗作用会否引起老鼠骨质疏松？
如果用在细胞系，是不是应该先确定这个细胞系不表达雌激素受体？
如果是骨髓间充质细胞或者骨肿瘤细胞系，都是有可能表达雌激素受体的，这种情况下
用tamoxifen或4OHT的诱导系统就不太好了吧？
非常感谢！ |
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C**S
发帖数: 522 | 5 需要在老鼠出生后诱导KO，前一阵用tamoxifen 1mg连续5天，没有检测到KO。有人说要
用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗？
还有，我查了一下sigma，有两种4OHT，一种50mg，$190;一种25mg，$380。哪种效果好
？ |
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S******9
发帖数: 2837 | 6 老鼠诱导用tamoxifem是work的。
但是不同的cre不一样的，有些cre需要gastric lavage才行，大多数是IP。
我做过有ve-cad Cre和Tie Cre无论用那种方法都没有work。我Tie Cre用过每天灌胃
1mg，连续3周也没work。文献有报道6周食物加Tamoxifen。
有几个系统剔除的cre，一般IP 10天， 每天1mg， 在3~4周开始，然后停药1周以后可
以用，老鼠剔除效果在95~99%之间。 感觉IP 5天的，剔除率大概在92~95%。这个都是
根据不同的target定的。
再者，有些cre对于不同组织剔除IP的老鼠年龄也有很大关系，有些脑血管内皮剔除需
要在新生鼠24小时内IP一次，这个时候就需要用4-OH，估计是新生鼠肝脏功能还没有成
鼠成熟，对于Tamoxifen的代谢利用不足吧。 |
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s********l
发帖数: 58 | 7 问个弱弱的问题，tamoxifen和4OH-tamoxifen结合雌激素受体，会不会有非特异效应？
比如说，它的雌激素拮抗作用会否引起老鼠骨质疏松？ |
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l**********n
发帖数: 240 | 8 用tamoxifen连续5天后，可以多等几天再测蛋白。有的蛋白半衰期很长。 |
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i*********0
发帖数: 915 | 9 tamoxifen
这个东西可以在体内被代谢一下，变成4-oht吧。 |
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S******9
发帖数: 2837 | 10 Tamoxifen对于乳房的雌激素受体是antagonist的作用，对骨骼是agonist，这就是为何
可以用于乳癌和绝经后骨质疏松的病人的原因。但是由于对子宫内膜雌激素受体有
partial agonist的作用，所以增加子宫内膜癌的患病率。
现在一般用raloxifene是乳房和子宫内膜雌激素受体的antagonist |
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b*****n
发帖数: 1841 | 11 为了尽早启动表达，pups不大的时候就开始比较大量地涂tamoxifen。之后已经有快两
个月，母鼠一直不孕。我怀疑是母/公鼠一直舔小鼠，扰乱了她/他们的激素导致的。
板上各位有没有见过老鼠注射了tamoxifen就不孕的现象？还可能是其它什么原因。
一直等小鼠，好着急。 |
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a*****s
发帖数: 131 | 12 Hi everyone, I want to give mouse tamoxifen and look at ovary tissue. What
is the dose range and how to dissolve tamoxifen - it seems to be really
difficult in my hand?
Thank you every one for input!!! |
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a*****s
发帖数: 131 | 13 Hi everyone, I want to give mouse tamoxifen and look at ovary tissue. What
is the dose range and how to dissolve tamoxifen - it seems to be really
difficult in my hand?
Thank you every one for input!!! |
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F*****e
发帖数: 182 | 14 usually around 20-30min. I don't know why yours didn't dissolve.
Where did you get the tamoxifen powder? Our tamoxifen and sesame oil are
from Sigma and they work well. |
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F*****e
发帖数: 182 | 15 Our tamoxifen is T5648. I checked T9262 and found it is "Tamoxifen citrate
salt", maybe that's the problem... |
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t******k
发帖数: 599 | 16 我用的也是一般的tamoxifen，原来老板也想买4oht，然后我说还是tamoxifen吧，咱省
钱。。。 |
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P*******1
发帖数: 169 | 17 There is no problem with tamoxifen at all. if efficiency is low, don't blame
tamoxifen. It's your CreER level being too low. |
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t******k
发帖数: 5617 | 18 Compare mice group A and B after tamoxifen treatment:
Group A genotype: tamoxifen-Cre+ Flox/flox
Group B genotype: flox/flox |
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K**R
发帖数: 193 | 19 谢谢您，
另外 那如果用 Cre做control是不是更好？
我看过还有些人是这样做的， 首先用WT加tamoxifen和不加，在用lox system 加
tamoxifen和不加。 发现WT 加和不加变化不大， 然后两个图同时放上去。 |
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s*********y
发帖数: 579 | 20 在做一个皮肤病模型，腹腔注射Tamoxifen诱导K14-ERT2-cre表达。连续注射5天，每次
0.3mg。停止注射两周后开始实验，持续2周。
1. Tamoxifen半衰期只有48小时，和玉米油混合后不知道能延长多少。4周后是不是已
经完全代谢没了？
2. 皮肤的turnover比较快，是不是很快就修复了。
谢谢！ |
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s*******n
发帖数: 452 | 21 tamoxifen 他莫昔芬似乎是乳腺癌的标准药物，有什么副作用，中医有什么说法？
他莫昔芬
他莫昔芬也叫枸橼酸他莫昔芬（tamoxifen），英文商品名为Nolvadex®。其为
一种选择性雌激素受体调节剂（SERM）。这种药物能干扰雌激素（estrogen）的某些活
动，模拟其它雌激素作用。他莫昔芬用于治疗某些乳腺癌和卵巢癌。目前，科研人员正
在比较他莫昔芬与雷洛昔芬（raloxifene）（另一种SERM），比较它们在降低高危人群
的乳腺癌发病率方面的作用。
【药理作用机制】该药为雌二醇竞争性拮抗剂，能与乳腺细胞的雌激素受体结合，
不刺激转录或作用微弱。药物-受体复合物不易解离，组织受体的循环应用，也是作用
机制之一。他莫昔芬能上调转化生长因子β生成，此因子减少与恶性肿瘤的发展有关。
还对蛋白激酶C有特异性抑制作用。这些作用都对依赖雌激素才能继续生长的肿瘤细胞
有抑制作用。多用于绝经期后呈进行性发展的乳癌的治疗。他莫昔芬对血浆脂代谢、子
宫内膜和骨的作用则仍是雌激素性质，不呈拮抗作用。他莫昔芬的抗骨质疏松作用也可
能与上调转化生长因子β有关，因为此因子能够控制成骨细胞和破 |
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J********3
发帖数: 3151 | 22 Tamoxifen已经先用ethanol溶解了，你如何还能去掉ethanol呢？
及少量ethanol注射老鼠没啥问题啊。 |
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s*****d
发帖数: 2451 | 24 如果小剂量的话，tamoxifen想要直接溶在oil里也不是不行，但是有的时候需要加热。
加热的后果也是问题。10%的酒是完全没问题的，而且肯定work，只要你有control，也
不怕啥问题。 |
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l****i
发帖数: 20439 | 25 tamoxifen注射孕鼠，总是会难产 发生好几回了
是剂量太高的缘故吗
剂量低了 又怕recombination不够 唉 |
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D*****l
发帖数: 554 | 26 I tried tamoxifen from Sigma. But I am not happy with the data. |
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s******y
发帖数: 28562 | 27 这个实验其实是我们实验室其他人做的，我们是做诱导性KO，所以我们只要确认
有足够量的cre表达，让目标基因被切了就好了。
停药之后cre应该就停了。但是因为这个诱导的效率其实不是那么高，所以有些时候必
须反复的处理好几次，有的时候几天就好了，一切取决于genotyping 的结果。
如果你要用诱导性表达其他蛋白，tamoxifen 不是一个好系统。 |
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f*******a
发帖数: 671 | 28 根据一般的protocol是inject一周,再等一周才能用? (我是看brain)
为什么不能inject直接用?再等一周什么意思?
还有,有人知道用tamoxifen好还是4-hydroxytamoxifen吗? 我是指in vivo
谢谢! |
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F*****e
发帖数: 182 | 29 1. 100mg tamoxifen in 1ml 100% ethanol, vortex for 2-5mins.
2. Add sesame oil to 10ml, leave it on a shaker until fully dissolved.
Aliquot into 500ul/tube and store tubes in -20oC for 1-6 months (final
concentration: 1mg/100ul).
3. Oral administration: 250-350ul/25g body weight. |
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F*****e
发帖数: 182 | 30 1. 100mg tamoxifen in 1ml 100% ethanol, vortex for 2-5mins.
2. Add sesame oil to 10ml, leave it on a shaker until fully dissolved.
Aliquot into 500ul/tube and store tubes in -20oC for 1-6 months (final
concentration: 1mg/100ul).
3. Oral administration: 250-350ul/25g body weight. |
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a*****s
发帖数: 131 | 31 Thanks!
But I tried - after 1 hr shaking in sesame oil, why is there no any sign
that tamoxifen can be dissolved? How long does it usually take?
Thanks again!! |
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a*****s
发帖数: 131 | 32 My tamoxifen is from Sigma (Cat# T9262); how about yours?
My sesame oil is also from Sigma...
Thanks a lot - please help! Very frustrated... |
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s******r
发帖数: 2876 | 33 试着腹腔注射，结果肚子里有很多液体都流出来，也不知道有多少Tamoxifen进去了，
第二天老鼠多数死了，哪位有这种经验啊。 |
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t******k
发帖数: 599 | 34 最近在做postnatal小老鼠（大概p0-p4）tamoxifen induce，主要也是研究这个时期的
变化，然后发现有一堆问题。。。
这么小的老鼠，到底是对怀孕的母老鼠用药好呢，还是生出来以后ip好呢？我看到有文
献是对生出来以后的小鼠做ip，然后就试了这个方法，结果针头一出来，oil就滚滚的
出来了（在p10的老鼠里做过，没有这个问题），搞得极度郁闷。一是不知道到底打进
去没，二是这样的话很有可能污染cage，然后污染父母老鼠，搞得之后的后代都不敢用
了。但如果对怀孕的母鼠用药的话这个妈妈是不是只能用一次呢？
现在头也要大了，不知道大家有没有啥好主意啊。。。。。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 35 唉给小小鼠ip。。。
当时看了paper说inject brdu (dissolved in dmso)是ip的，我就试了一下，结果刷刷
的，小小鼠就给挤出来，最后还是sc好使。。。不过我只要等一两个小时，sc不适用于
tamoxifen吧。。。
有些东西，就是得learn in a hard way... |
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t******k
发帖数: 599 | 36 今天是诸事不宜啊，实验室和动物房之间跑了n趟，不是忘了这个就是忘了那个，然后
再又是tamoxifen这破事，感觉应该说服老板转向研究adult老鼠算了。。。。。 |
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z****u
发帖数: 1007 | 37 针头太粗了吧。。用最细的26G
要么就是嘴巴灌。给母鼠用造成流产的几率比较大，一死死一窝。
Tamoxifen这个技术真是设计的不好。谁整的哦。远不如doxy 诱导有效，安全。 |
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t******k
发帖数: 599 | 38 oh yeah 找到一片cell的文章他们是用sc给p0小鼠打tamoxifen的，准备明天去试试看
。。。 |
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l******n
发帖数: 298 | 39 ER老鼠，4OHT太贵，sigma买的，一小瓶25毫克就是几百块。
想打tamoxifen,还怕效果不好。。。。
请支招 |
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S******9
发帖数: 2837 | 40 不是也可以打一般的Tamoxifen吗？
我是用的普通的 |
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b*****n
发帖数: 1841 | 41 坑爹的，4OHT诱导效率高但真太贵，我们用不起只好还是用tamoxifen |
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l******n
发帖数: 298 | 42 看来玩tamoxifen的战友还不少啊。
dua说的对，我也想先看看效率。打了5天，好像没啥效果！想用OHT主要是看richard
lee还有几个大牛发好文章都用OHT,我就想人家也不傻干嘛非用OHT啊。
dua你打OHT一般几天见效果重组？ |
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G********e
发帖数: 528 | 43 麦克马洪2002dev bio的文章应该是最早的，我读了好多遍
不过后来的各路ER出现之后，条件真是千变万化
浓度跨越20倍
最搞笑的莫过于myh启动子的Cre+2Mer
各路神仙发了一堆文章之后发现这个老鼠没有flox的情况之下
他摸细分是会诱导急性心肌病
然后就有如何调控剂量的文章，或者采用raloxifen替代tamoxifen
死活就没人做tam的药代动力学和cre的关系
我认为低剂量长期给应该是一个比较好的办法
土土的想的，没试过 |
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t******k
发帖数: 599 | 44 一般是只灭菌oil然后加tamoxifen粉末，还是一起加好再高压灭菌呢？ |
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n*******l
发帖数: 190 | 45 我从来不灭tamoxifen,我也想知道有人灭菌吗？ |
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b*******0
发帖数: 48 | 46 一年前从jax lab买的tamoxifen inducible Cre. 用他们设计的primer,做genotyping
一直都好好的，只有一条100 size band.一个月前 同样的试剂， 突然就不work 了，
出现了多条band,而且每个sample 都有band, 连negative control.好像恰好是
expected size. 我几乎试了所有的可能，都不行。 难道有重新设计引物么，可是为什
么原来jax lab的引物就突然不work了呢？
这个cre strain一直好头疼？
求大牛们看看怎么办？ |
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S******9
发帖数: 2837 | 47 Jax lab的tamoxifen inducible Cre老鼠我们都是300和100bp 2个条带，有100的是阳
性的。
这个老鼠我们用了4年了，genotype一直很稳定。 |
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K**R
发帖数: 193 | 48 最近开始做一个基因敲出对fetal stage 影响。 比如我拿到怀孕母鼠，开始注射。我
现在不知道从那个时间点注射，是开始怀孕第0天就注射母鼠，还是我研究的组织开始
发育时候注射？
还有个问题题 我看tamoxifen大家注射一般都是连续5天，如果我从组织开始发育注射
是不是会造成敲出不明显缺点？ |
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s*****d
发帖数: 2451 | 49 这个得小心，弄不好tamoxifen剂量大了就会造成流产，小了又不管用，得多试。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 50 怕打死就灌胃吧。看了一篇paper说他们的cre灌胃效果比注射好，不知道是不是tam代
谢更好一点
1. Park EJ, Sun X, Nichol P, Saijoh Y, Martin JF, et al. (2008) System for
tamoxifen-inducible expression of cre-recombinase from the Foxa2 locus in
mice. Dev Dyn 237: 447–453. doi:10.1002/dvdy.21415. |
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