T**********t
发帖数: 1604 | 1 我有几个mutate过的小蛋白，7k左右的分子量。在e.coli里表达的。site directed
mutagenesis之后质粒测序都是对的。表达出来的蛋白用质谱检测分子量，大部分都是
准的，但是有少数几个的测量分子量和计算分子量出现误差，分别差14，74和113。都
是测量分子量比计算分子量低。蛋白纯度很好，SDS-PAGE只有一个条带，质谱上也只有
一个主峰。请问这个误差可能是由于什么造成的呢？ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 2 质谱我不熟，是别人带我做的。应该是MALDI-TOF。我不会做calculation啊，就是在
FlexAnalysis下面打开质谱图，在图上找那个最高的峰定位看分子量。对于质谱我所知
就这么多了。。。汗。
样品preparation什么的都是我做的，蛋白对PBS透析过夜，然后用0.1%的TFA溶液稀释
到10uM左右，再和Matrix（我记得是SA，不过不太确定） 1：1混合。加样上样都很简
单，但是仪器的setting都是别人弄好了现成的，我按按鼠标而已。再汗。。。
样品的分子量计算我是偷懒用在线软件算的，把蛋白序列输进去，计算出理论分子量，
我不知道它用的是average还是monoisotopic mass：
http://www.scripps.edu/~cdputnam/protcalc.html
我总共有14个样品，10个样品的主峰分子量都是对的，基本上是M或者M+1，但是有4个
样品差得比较多，其中两个低了14，一个低了74，另一个低了113。 |
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s****e
发帖数: 2934 | 3 我原来说的意思是，估计用Mn和Mw可能都对，就看你用来干什么了，就是哪个更重要。
Mn靠近聚合物中低分子量的部分，即低分子量部分对Mn影响较大；Mw靠近聚合
物中高分子量的部分，即高分子量部分对Mw影响较大。聚合物的性能如强度、熔体粘度
更多地依赖于样品中较大的分子。你计算出来摩尔比要干啥？ |
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s****e
发帖数: 2934 | 4 GPC能测500到1 million的分子量
测量分子量的方法好不好都是相对的，没有说哪个是最好的吧？要根据你的polymer来
选取测量方法。
比如GPC有band broading，分辨率比较低，也就是说同一个polymer，如果只是PDI不同
，一个是1.01,一个是1.02，GPC上是看不出不同的，但是HPLC就可以分辨。
还有一点就是flexible polymer和rigid polymer他们如果从MALDI看分子量一样，GPC
测的话，rigid polymer的分子量会大很多，因为rigid polymer的Rg大。 |
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s****e
发帖数: 2934 | 5 1．聚电解质的分子尺寸不仅和分子量有关还和大分子中的电荷密度，分子在溶液中形
成的双电层结构、流动相的离子强度有关，分子尺寸不能直接反映分子量及其分布的信息
2．水溶性GPC柱固定相的残余电荷与样品中的电荷基团产生库仑作用，导致非体积排除
效应，不能实现按分子尺寸分离。
3．水溶性GPC柱一般为有机软胶，稳定性差，并且有鱼不同淋洗体系的溶剂化作用不同
，使固定相的空隙结构发生变化，无法实现普适标定
4．聚电解质的溶液性质表征复杂，已知分子量及分子量分布的系列样品少，GPC标定困难
我看这意思就是聚电解质的Rg和普通高分子不一样。
你再等等看有没有人能讲得更清楚一点。 |
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m***s
发帖数: 55 | 6 你在AFM里看到的可能是很少量的东西（即使如此，这么长也很可疑），其他小分子（
分子量小于1000）你在AFM里面是看不到的。样品是从乳液聚合里面出来的，分子量分
布不可能很窄。有可能每个球里有很少的长链，极多的小链，这样分子量可能会被拉下
来。 |
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m***s
发帖数: 55 | 7 看你做的单体是什么啊。如果有的用ATRP不好合成的单体，能有分子量就不错了。经典
单体通常在1.2以下，当然也要看分子量的。低分子量的PDI通常要宽一些，Control没
有那么快就达到。 |
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u*******r
发帖数: 80 | 8 一个父亲的朋友做超高分子量聚乙烯（100w分子量），想问一下如何表征其分子量，支
化度。。。
谢谢了 |
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h******g
发帖数: 600 | 9 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: hawkping (鹰平), 信区: Chemistry
标 题: 请问：低分子量的PEG如何纯化。谢谢了。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue May 13 23:36:47 2014, 美东)
通过EDC coupling合成了一个双功能化的PEG，PEG分子量很低，只有900左右，反应
后用沉淀法纯化，用冷冻乙醚作溶剂，每次沉淀出来的都是油状物，沉淀了五次。打核
磁，还是一堆杂峰。请问这种低分子量的PEG衍生物有什么好的方法纯化吗？谢谢了。 |
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d********6
发帖数: 76 | 10 方法可以选择linear mode，linear后面的数字表示分子量的大小，最好比较接近你
sample得分子量。 |
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l***d
发帖数: 1828 | 11 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: lrpwd (lrpwd), 信区: Biology
标 题: 有什么算peptide分子量的工具
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 19 10:01:38 2012, 美东)
用MALDI测小peptide,MS/MS分析碎片,请问有什么算peptide分子量的工具和网站吗?想
计算碎片,谢谢 |
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h******g
发帖数: 600 | 12 通过EDC coupling合成了一个双功能化的PEG，PEG分子量很低，只有900左右，反应
后用沉淀法纯化，用冷冻乙醚作溶剂，每次沉淀出来的都是油状物，沉淀了五次。打核
磁，还是一堆杂峰。请问这种低分子量的PEG衍生物有什么好的方法纯化吗？谢谢了。 |
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d****n
发帖数: 237 | 13 1：所测得的分子量的数值高度依赖溶解性的好坏，比如说在DMF中以聚苯乙烯标样来测
PHEMA，则结果相差好几倍，主要原因就是PSt在DMF中溶解性不好；
2：无法准确测定非线型聚合物的哪怕相对分子量，如接枝、星型、梳状、超支化、树
枝状高分子等等，原因很简单，现在出售的标样都是线型的；
3：对于聚电解质，情况更复杂，针对聚阳离子、聚阴离子、聚两性电解质等不同情况
，互相之间借鉴意义不大；
4：待补充 |
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s*****7
发帖数: 55 | 14 最近在做缩聚反应，分子量分布很宽，我想把低分子量去掉，采用沉淀法很难改善！哪
位大侠知道有没有别的方法可以分离？谢谢！ |
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y****o
发帖数: 4 | 15 这确实是一个问题，一般的分子量很小的部分通过沉淀（当然选好溶剂或者是复合溶剂
）应该能除掉。但分子量增大后（大于5000（估算的））就很难通过沉淀来纯化了。楼
下的，有什么好办法啊？ |
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C*******b
发帖数: 174 | 16 一般逐步聚合得到的聚合物分子量都在30000以下。有没有什么方法，条件比较温和
，还能得到>50000kDa的分子量？使用A-B单体行吗？或者A-B型预聚物行吗？高手指点
一二，十分感谢了。 |
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j******3
发帖数: 18319 | 17 【 以下文字转载自 Macromolecules 讨论区 】
发信人: kkndhx (kkndhx), 信区: Macromolecules
标 题: 包子求美国可靠测dextran分子量的公司？
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Mar 25 13:34:16 2010, 美东)
一个氧化后的dextran，氧化前是6000，要找个公司测氧化后的分子量。
大家有介绍么？大概多少钱？ |
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n******t
发帖数: 367 | 18 请问哪里有GPC(Gel permeation chromatography)做聚合物分子量测试的？如果坛子里
有做这个的同学，能不能帮我做一些，我付钱。多谢了 |
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b******n
发帖数: 4225 | 19 113的是不是少了一个aa残基啊
aa残基的平均分子量是110 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 20 我想过这个可能性，但是分子量接近的氨基酸就这几个：
Pro: 115.000
Thr: 119.000
Val: 117.000
这些氨基酸在那个蛋白里倒是都有，但不在末端啊，如果是中间打断了，我觉得质谱上
应该是两个fragment的峰吧。
而且这个也解释不通少74和14的那两个mutant。 |
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b******n
发帖数: 4225 | 21 呃，你得加上18才行
在蛋白质中间都是少了一个水分子的
也就是说分子量131左右的aa
比如ILE, Leu,Asn，Asp,
Ala: 89.000
Arg: 174.000
Asn: 132.000
Asp: 133.000
Cys: 121.000
Gln: 146.000
Glu: 147.000
Gly: 75.000
His: 155.000
Ile: 131.000
Leu: 131.000
Lys: 146.000
Met: 149.000
Phe: 165.000
Pro: 115.000
Ser: 105.000
Thr: 119.000
Trp: 204.000
Tyr: 181.000
Val: 117.000
至于14和74我也没什么想法 |
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h*****t
发帖数: 1226 | 22 MALDI-MS监测的平均分子量误差相对比ESI的大一些， 因为adducts的问题。
-14 Da有可能是-17 or -18Da (-NH3, H2O).
-74 和 -113可能是site chain或者terminal 的氨基酸掉了。
如果可能， 你可以把terminal的序列写出来， 大家可以看看。
不过你的分子其实很小， 7k应该误差相对较小。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 23 我用前面那个算mw的在线工具计算，如果把C端的N拿掉，计算出来的分子量和谱图上的
主峰是match的，主峰是M+1峰。你的意思是如果N是被打断的，丢失的应该是132而不是
113了？那也许我的蛋白在表达的时候就少了最后一个N？可我看sequence是全的啊。 |
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s*******7
发帖数: 160 | 24 如题，已排除N-糖基化，因为用了Endo H和PNGase F两个糖基化酶分子量只减少了几个
kD。不知磷酸化一般可增加多少，还有其他什么修饰可增加多一些呢？
谢谢！ |
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J********n
发帖数: 534 | 25 "因为用了Endo H和PNGase F两个糖基化酶分子量只减少了几个kD"
Endo H对糖的种类和修饰敏感，PNGase跟蛋白结构有关。
要看用什么系统表达的，几个N糖基化位点。如果4个位点以上，很轻易就上10kD。 |
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z**h
发帖数: 224 | 26 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: zzwh (微尺度爱情), 信区: Chemistry
标 题: 那里可以买到不同分子量的 cellulose?
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Apr 22 19:46:31 2010, 美东)
thanks. |
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j*****a
发帖数: 92 | 27 拿有我insert DNA的recombinant plasmid(pRSet A)去测序，１００ ％ 符合。（我的
insert有1.０ kb），transform into BL21(DE3)pLysS Competent Cells 用His柱子纯
化蛋白. SDS-PAGE显示分子量20 kDa, 应该是35 kDa. 谢谢高手们回答。 |
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j*****a
发帖数: 92 | 28 谢谢大家的分析。我的insert DNA是N-His tag。 如果是翻译提前终止或降解，有什么
方法补救吗？
背景：拿有我insert DNA的recombinant plasmid(pRSet A)去测序，１００ ％ 符合。
（我的insert有1.０ kb），transform into BL21(DE3)pLysS Competent Cells 用His
柱子纯化蛋白. SDS-PAGE显示分子量20 kDa, 应该是35 kDa. |
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z********i
发帖数: 610 | 29 做了一个蛋白的修饰，发现一个修饰使得蛋白的分子量增加100(tyrosine)，请问这是
什么修饰？有没有遇到过这种情况的。
谢了先。 |
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s******y
发帖数: 220 | 30 我做mouse NFAt c3的IP, 预测的分子量应该是115Kd， 我IP下来大概100Kd有带，
但是input 里面分子量变大了快到150Kd，（略小于100也有浅带，但不是IP那条）
为什么会这样呢？
有人说可能是sumoylation， 可是为啥IP下来这修饰就没了呢？
谢谢。 |
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z********i
发帖数: 610 | 31 首先，网上好好查一下，看跑出来的分子量到底是多大。
其次，确认一下你的抗体有没有问题，是否能做IP.哪怕是公司说能做，如果是第一次
用，最好还是确认一下。
如果这些都没有问题，然后再来看看。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 32 是啊，怎么就不做个质谱确认一下分子量先呢？现在质谱应该挺普及的了吧，一般学校
只要有core facility的都应该有。 |
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l***d
发帖数: 1828 | 33 用MALDI测小peptide,MS/MS分析碎片,请问有什么算peptide分子量的工具和网站吗?想
计算碎片,谢谢 |
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s**********a
发帖数: 92 | 34 一个蛋白，分成几个片段，MYC tag，转染进２９３T，其他片段都能用anti－MYC
antibody 检测到，只有分子量最小的那个 (70 个氨基酸,加上Tag啥的，总共不超过
10KD。)，检测不到。但把这个片段克隆进原核表达
载体能在细菌中表达。
请问这是一种什么情况，大家遇到过么，怎么解决，谢谢！ |
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A********s
发帖数: 179 | 35 多糖主链接枝多肽侧链
梳形聚合物
用GPC测，发现跟柱子不对付，全部一系列产物全是在最后系统峰附近才出来，都是8.9
附近，测量失败。
用MALDI-Tof测，尝试了不同的matrix,不同的mode,最后全都飞不起来，查遍了文献，
只有类似oligomer能飞的文献，polymer没人报道过能飞，也悲剧了。
求问大家，这咋的能测下分子量啊？
谢谢 |
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n******t
发帖数: 367 | 36 请问谁可以做GPC(Gel permeation chromatography)聚合物分子量测试的？如果坛子里
有做这个的同学或者可以帮我捎带做的，请联系我，请告知价格大概多少？多谢了！ |
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j******2
发帖数: 665 | 37 最近老板找人合成了一个化合物，只有名字和结构，居然没有分子量。我老的有机化学
早忘光了！请帮忙算一下。谢谢了！
名称是 NNN-trimethyl-2-4-methyl-2-4-methyl-1H-indol-3-ylthiopentano。
结构见附图。
不胜感谢！！ |
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a********h
发帖数: 89 | 38 分子式 C20H31IN2O2S
分子量 490.442 |
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h******g
发帖数: 600 | 39 这个分子量太低。dialysis实在不好用。谢谢。 |
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h*******n
发帖数: 1328 | 40 说得对，EDC不光是效率低，选择EDC实在不是好的方案。
它自己反应前反应后和产物都是水溶性的，当然你不好纯化了。
不过既然分子量只有900，过根柱子好了 |
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d******e
发帖数: 22 | 41 聚乙烯
粘度法测分子量
用一点法
请教一下
增比粘度和特性粘度的转化关系
//thax |
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b**s
发帖数: 589 | 42 聚乙烯粘度法测分子量,hehe这个我最熟
以前可没让叫十氢赖少熏过
可惜我的论文忘在国内了，不然马上就可以查给你看了
让我找找先 |
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d******e
发帖数: 22 | 43 呵呵 谢了
按照这些公式已经算出出分子量了
虽然比较低的说
安慰师姐 支化度可能比较高 嘻嘻:) |
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b******l
发帖数: 2 | 44 目前在做低分子量的poly(butyl acrylate)
~5K,因为里面还加了高沸点的其他comonomer很难出去。大侠们能否推荐比较好的non-sol
vent??? 好像已经尝试过一点water-methanol，效果好像不佳，不知道是不是比例的问题
？
多谢！ |
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c**********d
发帖数: 12 | 45 如果知道聚苯乙烯的长度, 有什么办法可以估计其分子量吗? 通过计算的方式.
谢谢. |
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c******h
发帖数: 4573 | 46 PS这东西GPC就很好了吧？
不过分子量分布会比较大一点
少. |
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c**********d
发帖数: 12 | 47 从GPC上得到的分子量很小. 不清楚为什么. 不知道是否是表面活性剂的影响.
大体操作是--聚合时是水性溶液, 然后冷冻干燥, 然后溶解在THF大概两天, 然后过滤,
取样做GPC. |
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D********g
发帖数: 533 | 48 你要实在觉得GPC结果可疑，那么再做一个光散射看看分子量多少~ |
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c******h
发帖数: 4573 | 49 我觉得GPC给的值很合理，尤其是PS这种东西
你的产品就是分子量没上去 |
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c**********d
发帖数: 12 | 50 制样是先EXTRACT到有机溶剂，然后SPIN COATING到MICA上。如果不是PS，那就不知道
是什么。感觉没有其它的可能性。
请问楼上的同学怎么估计的是非单链PS？怎么样可以进一步提高分子量？GPC的结果能
说明PS的形成吗？非常小的也。
对POLYMER所知甚少，望不吝赐教！感谢之至！ |
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