z***h
发帖数: 998 | 1 你这个实验的第一步是希望oilgo只结合到lamda的两个粘性末端的一个
所以首先要避免的是lamda DNA的环装自连,所以lamda DNA首先要5'去磷酸化
然后用摩尔浓度较少的oligo去结合lamda末端,理想的状况是只结合其中一个末端
生物反应都是一个平衡过程,所以不可能出现oligo全部被结合的情况
在做完第一步连接反应之后,需要过分子筛滤去剩余的小分子
可以用这个公司的产品:
http://198.173.130.129/princeton/prinsep.nsf/html/products-centri-spin40
或者干脆做胶回收,只截取一个lamda长度的条带
然后第二部必须先做5'磷酸化,使分子间连接成为可能
然后跑胶拿到2个lamda长度的片段,但其中仍然只有一部分是你所需要的两端不同
标记的DNA,至于怎么鉴别,恕我不知了 |
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