m****m
发帖数: 395 | 1 Ni柱，最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什
么讲究吗？还有Tris溶液要从头到尾都加吗？这些盐对提纯蛋白有何影响？（PS.我
NaCl浓度试过500mM，300mM，100mM） |
k********u
发帖数: 2209 | 2 NaCl在纯化过程中主要的作用是维持离子强度，离子强度太低了，有些蛋白
会沉淀的。是做膜蛋白吗？如果是的话，还可以试试看cobalt的柱子，
和Ni差不多的东西，很多做功能的人更喜欢cobalt。
【在 m****m 的大作中提到】
: Ni柱，最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什
: 么讲究吗？还有Tris溶液要从头到尾都加吗？这些盐对提纯蛋白有何影响？（PS.我
: NaCl浓度试过500mM，300mM，100mM）
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W*********e
发帖数: 247 | 3 会影响蛋白的稳定性或者能否形成复合物
Tris是buffer, 不同的pH也会影响蛋白的稳定性和溶解度
【在 m****m 的大作中提到】
: Ni柱，最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什
: 么讲究吗？还有Tris溶液要从头到尾都加吗？这些盐对提纯蛋白有何影响？（PS.我
: NaCl浓度试过500mM，300mM，100mM）
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l*******1
发帖数: 128 | 4 NaCl在Ni柱纯化中是用来避免杂蛋白非特异性地以离子交换方式吸附到介质上。
如果没有记错，至少0.3M是必须的。0.5M很多人用。0.1M太低了。
【在 m****m 的大作中提到】
: Ni柱，最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什
: 么讲究吗？还有Tris溶液要从头到尾都加吗？这些盐对提纯蛋白有何影响？（PS.我
: NaCl浓度试过500mM，300mM，100mM）
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m****m
发帖数: 395 | 5 谢谢。就是膜蛋白，不过我做结构，暂时不做功能。。
【在 k********u 的大作中提到】
: NaCl在纯化过程中主要的作用是维持离子强度，离子强度太低了，有些蛋白
: 会沉淀的。是做膜蛋白吗？如果是的话，还可以试试看cobalt的柱子，
: 和Ni差不多的东西，很多做功能的人更喜欢cobalt。
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m****m
发帖数: 395 | 6 有没有情况用0.5M太浓啊？太浓的话会怎么样？是不是从头到尾NaCl都要加呢？
【在 l*******1 的大作中提到】
: NaCl在Ni柱纯化中是用来避免杂蛋白非特异性地以离子交换方式吸附到介质上。
: 如果没有记错，至少0.3M是必须的。0.5M很多人用。0.1M太低了。
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l*******1
发帖数: 128 | 7 看看Ni-NTA的manual就全有了。
【在 m****m 的大作中提到】
: 有没有情况用0.5M太浓啊？太浓的话会怎么样？是不是从头到尾NaCl都要加呢？
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