n**********1
发帖数: 251 | 1 问了几个人都说互有优缺点，但是具体的也说的不是很清楚，请有经验的朋友介绍
一下，这个两个转移方法的优缺点，多谢了啊。
还有一个问题，Westernblot的电泳和转移设备出了Bio-Rad的，还有什么更好的推
荐啊？ |
p*****9
发帖数: 32 | 2 Invitrogen Novex precast gel and transfer unit. Works very well. |
n****e
发帖数: 1677 | 3 iblot, 7mins transfer.
【在 n**********1 的大作中提到】
: 问了几个人都说互有优缺点，但是具体的也说的不是很清楚，请有经验的朋友介绍
: 一下，这个两个转移方法的优缺点，多谢了啊。
: 还有一个问题，Westernblot的电泳和转移设备出了Bio-Rad的，还有什么更好的推
: 荐啊？
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h*****9
发帖数: 4028 | 4 不好意思，看成了idiot
【在 n****e 的大作中提到】
: iblot, 7mins transfer.
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f******k
发帖数: 856 | 5 呵呵，我也看成这个了
【在 h*****9 的大作中提到】
: 不好意思，看成了idiot
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f********n
发帖数: 6465 | 6 半干转时间短，但是转得不全的risk大。
湿转我一般overnight,可是转得非常完全。 |
n****e
发帖数: 1677 | 7 ft,现在做western不要太快啊，从走电泳到看结果一个半小时。
【在 f******k 的大作中提到】
: 呵呵，我也看成这个了
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h******y
发帖数: 1374 | 8 一抗不过夜？
【在 n****e 的大作中提到】
: ft,现在做western不要太快啊，从走电泳到看结果一个半小时。
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L******s
发帖数: 2349 | 9 我一般一抗30min－60min
【在 h******y 的大作中提到】
: 一抗不过夜？
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n****e
发帖数: 1677 | |
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f******k
发帖数: 856 | |
f******k
发帖数: 856 | 12 这个跟抗体以及你的目的蛋白有关，对于有的抗体和目的蛋白这个时间绝对够，但是有
的就必须得过
夜，比如检测有的phosphorylated endogenous protein
【在 L******s 的大作中提到】
: 我一般一抗30min－60min
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n**********1
发帖数: 251 | 13 我感觉western的关键就是一抗，如果一抗好，你怎么做都可以，如果一抗不好再怎
么优化都是白搭。 |
n****e
发帖数: 1677 | 14 这些东西都不贵
【在 f******k 的大作中提到】
: 哎，也得老板有钱啊
:
: Services/Applications/Protein-Expression-and-Analysis/Western-
: Blotting/WBlot-misc/Protein-Transfer/iBlot-Dry-Blotting-System.html
: QS=c76003443ff9837de9425a17e8c124d655fc81dd7b5a4fe1&gclid=CImPrPeqxqACFQUM
: DQodDTEvaA
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n**********1
发帖数: 251 | 15 这个半干转是不是一定要用Invitrogen的预制胶啊？如果是这样的话，那长期跑还是
蛮贵的啊。 |
n****e
发帖数: 1677 | 16 30分钟western和overnight western有本质区别。做科学的总抱着“if it's not
broken, don't fix it“的态度怎么可以。
Blotting |
s******s
发帖数: 13035 | 17 完全同意.
【在 n**********1 的大作中提到】
: 这个半干转是不是一定要用Invitrogen的预制胶啊？如果是这样的话，那长期跑还是
: 蛮贵的啊。
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C****o
发帖数: 994 | 18 做了一年多phospho-p38 的western，用自己配的gel和transfer buffer一直出不来。
可最近用biorad的胶p38就很容易出了band.
我猜是自制gel的问题，transfer的时候不完全。
这个可能性大不大？ |
s******y
发帖数: 28562 | 19 你转膜转多久？用什么浓度的胶？
这种被修饰的蛋白，我们一般都要用比较低浓度的胶，而且要转过夜的，
【在 C****o 的大作中提到】
: 做了一年多phospho-p38 的western，用自己配的gel和transfer buffer一直出不来。
: 可最近用biorad的胶p38就很容易出了band.
: 我猜是自制gel的问题，transfer的时候不完全。
: 这个可能性大不大？
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C****o
发帖数: 994 | 20 10% gel
60min 0.24A transfer semi-dry
跑胶的时候biorad成品胶用60min跑完，自制的gel要70分钟，所以我怀疑自制的gel浓
度高于10%，transfer的时候可能也需要更多的时间。
谢谢回帖。
【在 s******y 的大作中提到】
: 你转膜转多久？用什么浓度的胶？
: 这种被修饰的蛋白，我们一般都要用比较低浓度的胶，而且要转过夜的，
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s******y
发帖数: 28562 | 21 我们一直是用 8%， 然后30V 转overnight.只转一个小时肯定不够。
至于跑胶的速度？如果你是指染料跑到胶的前沿所用的时间的话，其实和
胶的浓度关系不大，和胶体本身的导电性关系更大。
【在 C****o 的大作中提到】
: 10% gel
: 60min 0.24A transfer semi-dry
: 跑胶的时候biorad成品胶用60min跑完，自制的gel要70分钟，所以我怀疑自制的gel浓
: 度高于10%，transfer的时候可能也需要更多的时间。
: 谢谢回帖。
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p*f
发帖数: 77 | 22 How much more do we need to spend on those new systems? Much more than our
old
and outdated systems?
【在 n**********1 的大作中提到】
: 这个半干转是不是一定要用Invitrogen的预制胶啊？如果是这样的话，那长期跑还是
: 蛮贵的啊。
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i****n
发帖数: 2703 | |
