c****5
发帖数: 77 | 1 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
环保处理。长期一来，溴化乙淀就是各个生物实验室不得不用却叫人头痛的试剂！
最近发现2家美国生物公司出品了溴化乙淀的替代物：
1. EZ Vision是一种无毒无害的溴化乙淀替代物，敏感度高，能够辩别0.25ng浓度的 |
i***a
发帖数: 11095 | 2 实验室里用过一段时间，但是价格昂贵不说，消耗量巨大
两个月之后又换回来了
所以，只能说你们把还没完全成熟的产品推向了市场，而不是大家不想用更安全的东西 |
p****n
发帖数: 9263 | 3 EZ Vision是一种无毒无害的溴化乙淀替代物，敏感度高，能够辩别0.25ug浓度的
DNA含量
这种句子写出来，哪个还敢买啊 |
c****5
发帖数: 77 | 4 0.25ng，：））
【在 p****n 的大作中提到】
: EZ Vision是一种无毒无害的溴化乙淀替代物，敏感度高，能够辩别0.25ug浓度的
: DNA含量
: 这种句子写出来，哪个还敢买啊
|
c****5
发帖数: 77 | 5 Gel Red is better， I wish every lab is switch to gel red. |
L******s
发帖数: 2349 | 6 EZ Vision没用过，biotium上买的gel red又贵又不好用。0.5ml管$100，10000X的，按
标准的来100ml的gel只能配50块，我减半加的，也只能配100块，最讨厌是每次DNA mar
ker 800bp以下的都会跑的乱七八糟，我当时都以为我的DNA marker坏掉了，结果同一管
里的DNA marker，load到加EB的同样浓度的gel里就跑的好好的，不知道怎么回事。
【在 c****5 的大作中提到】
: 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
: 域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
: Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
: 数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
: 成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
: 聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
: 但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
: 功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
: 来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
: 收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
|
s******y
发帖数: 28562 | 7 咦？不会呀？我们实验室一直是gel-red 和EB都用的。都挺好用的呀！
而且在某些场合下gel-red dye因为不会逆着电场跑，其实效果更好。
是不是你们跑的电压太高了？
我能注意到的唯一的区别就是有些特别小的条带如果用gel-red的话分辨率不是那么好
我一般都是如果只是看看带的话就用EB, 要切带的话就用gel-red
mar
一管
【在 L******s 的大作中提到】
: EZ Vision没用过，biotium上买的gel red又贵又不好用。0.5ml管$100，10000X的，按
: 标准的来100ml的gel只能配50块，我减半加的，也只能配100块，最讨厌是每次DNA mar
: ker 800bp以下的都会跑的乱七八糟，我当时都以为我的DNA marker坏掉了，结果同一管
: 里的DNA marker，load到加EB的同样浓度的gel里就跑的好好的，不知道怎么回事。
|
y***e
发帖数: 6082 | 8 两年前还用EB。。。。现在改用GR了，的确好多了
尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
环保处理。长期一来，溴化乙淀就是各个生物实验室不得不用却叫人头痛的试剂！
最近发现2家美国生物公司出品了溴化乙淀的替代物：
1. EZ Vision是一种无毒无害的溴
【在 c****5 的大作中提到】
: 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
: 域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
: Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
: 数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
: 成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
: 聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
: 但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
: 功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
: 来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
: 收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
|
A**********0
发帖数: 6942 | 9 这个应该在发考题版也发，多发几遍，呵呵。
【在 c****5 的大作中提到】
: 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
: 域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
: Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
: 数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
: 成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
: 聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
: 但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
: 功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
: 来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
: 收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
|
a****g
发帖数: 17 | 10 这个没什么吧？在国内的时候不管用了什么试剂，都是冲到下水道里面，国外有时候就
是有些小题大做地说。 |
|
|
w***o
发帖数: 2969 | 11 你在做个 乙烯酰胺，P32, I125 等等等 的替代物吧 |
D*******A
发帖数: 60 | 12 Since we used Gel-Red, the marker is messy. We all thought that the marker
did not work. One day, the GR was used up, we used EB again and the marker
is wonderful. Could anybody tell why? |
D*******A
发帖数: 60 | 13 Since we used Gel-Red, the marker is messy. We all thought that the marker
did not work. One day, the GR was used up, we used EB again and the marker
is wonderful. Could anybody tell why? |
H****H
发帖数: 11039 | 14 所谓的安全替代品都是公司的推销策略，其实照样不安全．
况且ＥＢ毒性被夸大了，有个牛人的ｂｌｏｇ讨论过这个问题，放狗搜索一下吧。 |
y******8
发帖数: 1764 | 15 一直不太明白，既然能嵌入DNA，怎么会没毒。如果能不用照UV，倒可以省些麻烦 |
F******p
发帖数: 2099 | 16 Gel red能整合进双链，为什么不致癌？能说说吗？
【在 c****5 的大作中提到】
: 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
: 域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
: Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
: 数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
: 成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
: 聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
: 但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
: 功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
: 来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
: 收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
|
p****e
发帖数: 105 | 17 FYI
EB was a drug for cattle for many years, it was used in multi gram scale.
http://bitesizebio.com/2007/09/26/ethidium-bromide-a-reality-check/ |
E*******g
发帖数: 37 | 18 老板考虑到安全的因素，让我从比较新的产品中找一个EB的替代品。从产品公司的广告
和许多同事的推荐中选了几个作了一下比较。
生物学的实验最基本的就是认真仔细。不做不知道，自己一上手就明白是怎么回事了。
上个月刚给本组的同事做了报告，各种产品的优劣都阐述了一下。最后大家一致的结论
是EB最好，目前基本没有可全面可替代的产品。
两个要点，EB的致癌性并没有被证明，只有毒性要小心一些，可毒性作用的最低浓度要
远高于我们一般使用的浓度。而其他产品的毒副作用目前也无法证明。
至于Bio-RED， 大家可以在一个胶上RUN ＤＮＡ MARKER 梯度，从100 ~ 2000 NG，
同时加上两个酶切样品（同样的DNA，一个0.2ug， 另一个2ug）， 结果很明显。不过
如果你不在乎ＤＮＡ大小的准确性那另当别论了。 |
L*****s
发帖数: 24744 | 19 既然选择了生&化专业,就注定是杯具结束..为了所谓的真理和知识,还有奖学金,那贱命
算个啥撒.. |
h********n
发帖数: 4079 | 20 SYBR safe挺好的啊, 我用了好几年了. |
|
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j****1
发帖数: 15497 | 21 哇，这个帽子扣的~
销售人员这样是不会出好成绩的
【在 c****5 的大作中提到】
: Gel Red is better， I wish every lab is switch to gel red.
|
s**e
发帖数: 1523 | 22 老美很多常常空手拿EB胶盒子， 把我shock到不行。 |
E****A
发帖数: 184 | 23 orz
【在 s**e 的大作中提到】
: 老美很多常常空手拿EB胶盒子， 把我shock到不行。
|
h**e
发帖数: 29 | 24 我们实验室就用Envsion，非常好用，也不贵。而且真的省了很多麻烦。
应该推广EB的替代品！
【在 c****5 的大作中提到】
: 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
: 域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
: Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
: 数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
: 成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
: 聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
: 但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
: 功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
: 来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
: 收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
|
m****M
发帖数: 360 | 25 靠，哪里有那么小心呀。我都是直接到电泳液里去裸手捞胶，完了之后直接用水冲一下
就行了，那里有什么毒呀，到现在都活的好好的。 |
b******n
发帖数: 4225 | 26 拜一下活人……
【在 m****M 的大作中提到】
: 靠，哪里有那么小心呀。我都是直接到电泳液里去裸手捞胶，完了之后直接用水冲一下
: 就行了，那里有什么毒呀，到现在都活的好好的。
|
E****A
发帖数: 184 | 27 我以前的老板说他也是直接用裸手的，然后天天跟我们说没那么可怕，可是学生们一个
个小心得该死。。
【在 m****M 的大作中提到】
: 靠，哪里有那么小心呀。我都是直接到电泳液里去裸手捞胶，完了之后直接用水冲一下
: 就行了，那里有什么毒呀，到现在都活的好好的。
|
c****5
发帖数: 77 | 28 国内的实验室这样出理EB不行吧，国内人口密度那么大，EB废液就这样倒掉水槽中，真是可恨也...
【在 a****g 的大作中提到】
: 这个没什么吧？在国内的时候不管用了什么试剂，都是冲到下水道里面，国外有时候就
: 是有些小题大做地说。
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c****5
发帖数: 77 | 29 EB是化学品，莹光素食生物制剂，对DNA的作用就不一样了，就像小分子化学药品对人
体的毒性大，而单克隆抗体药物的毒性则小一样。
【在 y******8 的大作中提到】
: 一直不太明白，既然能嵌入DNA，怎么会没毒。如果能不用照UV，倒可以省些麻烦
|
m****M
发帖数: 360 | 30 有点常识好不好，等浓度低于一定的值不会有什么毒害的。再说，这只是怀疑有毒性，
但是到现在还没有谁证实因为EB而有病的。你说的那两个新东西，都是厂家为了买他们
的东西而使劲鼓吹EB有多毒多毒，别相信这个。
真是可恨也...
【在 c****5 的大作中提到】
: 国内的实验室这样出理EB不行吧，国内人口密度那么大，EB废液就这样倒掉水槽中，真是可恨也...
|
|
|
k*******i
发帖数: 5067 | 31 我们只用Syber green。
楼主我们都知道你是好心， 但是用还是不用， 不是大家自己说了算的啊。 所以你应
该到新闻上面去讲， 上电视讲， 到每一个大学实验室去讲。 不行到白宫讲。。。。
。。 |
J**n
发帖数: 1224 | 32 EB 是个盐，不容易通过细胞膜，而且对DNA的亲和性低，你用FLOW CYTOMETRY有人用EB
么？CELL CYCLE 的图差得一蹋糊涂，因为亲和性低。所以不太可能致癌率很高。
能和DNA结合的理论上剂量高都能致癌吧，那些新东西不知道怎么能不致癌。如果是在
动物上比较致癌率的，要是人和那个动物有SPECIES DIFFERENCE，弄不好还弄巧成拙。
【在 c****5 的大作中提到】
: 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
: 域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
: Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
: 数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
: 成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
: 聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
: 但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
: 功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
: 来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
: 收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
|
s**e
发帖数: 1523 | 33 它是致癌不是有毒。。。两者还是有差别的呢。不过EB是水溶的，用水冲过应该可以去
掉绝大部分了。
你是男生吧。女生都会比较小心点，致癌、制畸变的东西对将来要怀孕的女生是很可怕
的。。。
【在 m****M 的大作中提到】
: 靠，哪里有那么小心呀。我都是直接到电泳液里去裸手捞胶，完了之后直接用水冲一下
: 就行了，那里有什么毒呀，到现在都活的好好的。
|
h****0
发帖数: 37 | 34 我原来实验室有韩国人直接用手捞胶的，用来捞胶的铲子洗洗后在野餐时候盛饭。。我
是觉得EB的毒性被夸大了。对男生不会有太大影响。女孩子就不好说了。
Gel-Red：我现在的实验室也试过，为了这个实验室浪费了一个月时间去研究为什么突
然所有的胶带都一塌糊涂。它好像特意bind小片段DNA，搞的PCR后剩余引物的条带很亮
，影响对实验结果的判断。更本不能用作定量分析。marker也跑不好了。我们TBE,TAE
都试过了，一样的结果。现在还是继续用EB.
有高人能告诉我为什么？有没有办法解决？
这种没有verified的产品为什么会上市？ |
D********s
发帖数: 757 | 35 Gel-red 不好用啊～
TA带学生实验，用的是这个～
什么啊～乱七八糟的看不清楚～ |
m******e
发帖数: 7 | 36 我虽然不认为EB 有多可怕，用的时候手套还是要戴的。实验室一个老美也是直接用手
捞。废液应该可以冲到下水道。记得
以前OSHA的人来培训，讲到处理EB，就是说用水稀释后倒进下下水道，听的大家都惊讶
不已，一老中PI 还专门举手又问
了一遍。到目前还没有人被确认因EB而得癌症的，倒是western blot的废液很多老中处
理时很随意。methanol 可是被确
定致癌的。以前有一个同胞，戴手套用实验室所有的仪器和电脑，老板说了很多次都不
改。
gel red 有时候确实会造成maker 不准，曾见过差了2个kb的例子。和maker本身也有关
系， 比如NEB的2-log就很容易
mess up。 个人的办法：用1－2ul gel red配50ml gel. 2ul 2-log marker 加到5ul
2x loading buffer里后再加样。
run 的时候低电压先跑10min，再升高电压。优点就是象sunnyday 说的，不用在电泳槽
另一头加eb了。 |
p****n
发帖数: 9263 | 37 哪个部门确定methanol致癌了？
【在 m******e 的大作中提到】
: 我虽然不认为EB 有多可怕，用的时候手套还是要戴的。实验室一个老美也是直接用手
: 捞。废液应该可以冲到下水道。记得
: 以前OSHA的人来培训，讲到处理EB，就是说用水稀释后倒进下下水道，听的大家都惊讶
: 不已，一老中PI 还专门举手又问
: 了一遍。到目前还没有人被确认因EB而得癌症的，倒是western blot的废液很多老中处
: 理时很随意。methanol 可是被确
: 定致癌的。以前有一个同胞，戴手套用实验室所有的仪器和电脑，老板说了很多次都不
: 改。
: gel red 有时候确实会造成maker 不准，曾见过差了2个kb的例子。和maker本身也有关
: 系， 比如NEB的2-log就很容易
|
s******y
发帖数: 28562 | 38 How did you guys use the gel-red?
Did you put it in the boiled agarose gel directly (the right way)
or did you put it in the running buffer (wrong way)?
The other way to do it, is to add the gel-red directly into the
loading buffer (1:50) and mix with the DNA sample. In such manner,
we only use very very few gel-red and the result is spectacular.
TAE
【在 h****0 的大作中提到】
: 我原来实验室有韩国人直接用手捞胶的，用来捞胶的铲子洗洗后在野餐时候盛饭。。我
: 是觉得EB的毒性被夸大了。对男生不会有太大影响。女孩子就不好说了。
: Gel-Red：我现在的实验室也试过，为了这个实验室浪费了一个月时间去研究为什么突
: 然所有的胶带都一塌糊涂。它好像特意bind小片段DNA，搞的PCR后剩余引物的条带很亮
: ，影响对实验结果的判断。更本不能用作定量分析。marker也跑不好了。我们TBE,TAE
: 都试过了，一样的结果。现在还是继续用EB.
: 有高人能告诉我为什么？有没有办法解决？
: 这种没有verified的产品为什么会上市？
|
m********2
发帖数: 974 | 39 They are expensive, our lab could not afford them. |
c********b
发帖数: 363 | 40 http://www.scorecard.org/chemical-profiles/html/methanol.html
Cancer: No information is available on the carcinogenic effects of methanol
in humans or animals. The
International Agency for Research on Cancer and the U.S. EPA have not
classified methanol for carcinogenicity
(IARC, 1987a; U.S. EPA, 1994a).
【在 m******e 的大作中提到】
: 我虽然不认为EB 有多可怕，用的时候手套还是要戴的。实验室一个老美也是直接用手
: 捞。废液应该可以冲到下水道。记得
: 以前OSHA的人来培训，讲到处理EB，就是说用水稀释后倒进下下水道，听的大家都惊讶
: 不已，一老中PI 还专门举手又问
: 了一遍。到目前还没有人被确认因EB而得癌症的，倒是western blot的废液很多老中处
: 理时很随意。methanol 可是被确
: 定致癌的。以前有一个同胞，戴手套用实验室所有的仪器和电脑，老板说了很多次都不
: 改。
: gel red 有时候确实会造成maker 不准，曾见过差了2个kb的例子。和maker本身也有关
: 系， 比如NEB的2-log就很容易
|
|
|
p****y
发帖数: 95 | 41 GR直接加到Loading buffer里(不要用来做胶)，用量非常少，正解,period |
m*********7
发帖数: 5207 | 42 Re this. It is cheaper than gel red too.
【在 h********n 的大作中提到】
: SYBR safe挺好的啊, 我用了好几年了.
|
n******d
发帖数: 1055 | |
j*******8
发帖数: 94 | 44 ding, I used SYBR safe too! |
d****0
发帖数: 335 | 45 guys, quit the dirty bio jobs and get a life! |
b**********t
发帖数: 353 | 46 啊，我还以为美国的实验室都不用EB了呢，我们实验室用的是lonza的precast的
cassette,也不用电泳槽和电泳液啥的，直接就把cassette插上电，就跑就行了，三两
分钟就跑完了，而且跑的时候直接肉眼就能看到条带，也用不着UV啥的..... |
a**y
发帖数: 414 | 47 外国同事说,口香糖里就有EB,拿胶时他们有时都不戴手套。。。当然另一些外国同事就
很紧张，还订特殊的手套。不过大家都活得好好的。所以EB的毒性并没有被证实毒到什
么程度。
期间也买过替代品，但是放在那很久都没人愿意用。也可能不愿意用自己的样品冒险吧。 |
x*******o
发帖数: 2581 | 48 EB也叫有毒？那生化试剂就都有毒了。DTT强还原剂，大家不照样用？ |
k*********2
发帖数: 4 | 49 是啊，我们实验室就用的SYBR safe，具体牌子没注意
非常方便啊，就是有些贵，好像一盒胶就十几二十个要快100欧元，明天去实验室看看
牌子和价格。
有一个小机器相当于电泳槽，胶是预制的一块块塑料板，各种浓度都有。
每次用的时候打开包装，把塑料胶板卡在小机器的槽上（不加buffer），去掉梳子直接
加DNA样品（不用加蓝），就可以跑了。跑的时候可以用它的uv背光直接看，跑得差不
多会自动终止（没有跑丢的危险，我喜欢）。拿板子直接照相，不会有水滴的到处都是
~~~~
最方便的是如果要回收DNA时不用胶回收试剂盒。有一种有两排上样孔的胶版，上面加
样下面加水，DNA快跑到下面那个孔时，用背光看着，当DNA跑进去的时候吸出来，真的
超方便，不小心跑过的话还能往反方向跑，哈哈
我们实验室是这个系统和传统的胶都用，这个虽然贵很多，但如果大家经常要胶回收的
话，用这个就省了回收试剂盒了。
【在 h********n 的大作中提到】
: SYBR safe挺好的啊, 我用了好几年了.
|
O******e
发帖数: 4845 | 50 很多美国的实验室很山寨的。山寨呢是不好，但省钱，^_^。
【在 b**********t 的大作中提到】
: 啊，我还以为美国的实验室都不用EB了呢，我们实验室用的是lonza的precast的
: cassette,也不用电泳槽和电泳液啥的，直接就把cassette插上电，就跑就行了，三两
: 分钟就跑完了，而且跑的时候直接肉眼就能看到条带，也用不着UV啥的.....
|
|
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f***1
发帖数: 84 | 51 天啊，完全没逻辑。
【在 c****5 的大作中提到】
: EB是化学品，莹光素食生物制剂，对DNA的作用就不一样了，就像小分子化学药品对人
: 体的毒性大，而单克隆抗体药物的毒性则小一样。
|
p******i
发帖数: 1092 | 52 我觀察到的是：
用EB配的膠，放四度幾天后還能照；
但是如果用EZ-VISION配的SAMPLE跑的膠，第二天就沒有信號了……
【在 y******8 的大作中提到】
: 一直不太明白，既然能嵌入DNA，怎么会没毒。如果能不用照UV，倒可以省些麻烦
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h****0
发帖数: 37 | 53 赞有钱的实验室。。这个效率真是高。。
【在 k*********2 的大作中提到】
: 是啊，我们实验室就用的SYBR safe，具体牌子没注意
: 非常方便啊，就是有些贵，好像一盒胶就十几二十个要快100欧元，明天去实验室看看
: 牌子和价格。
: 有一个小机器相当于电泳槽，胶是预制的一块块塑料板，各种浓度都有。
: 每次用的时候打开包装，把塑料胶板卡在小机器的槽上（不加buffer），去掉梳子直接
: 加DNA样品（不用加蓝），就可以跑了。跑的时候可以用它的uv背光直接看，跑得差不
: 多会自动终止（没有跑丢的危险，我喜欢）。拿板子直接照相，不会有水滴的到处都是
: ~~~~
: 最方便的是如果要回收DNA时不用胶回收试剂盒。有一种有两排上样孔的胶版，上面加
: 样下面加水，DNA快跑到下面那个孔时，用背光看着，当DNA跑进去的时候吸出来，真的
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h****0
发帖数: 37 | 54 谢谢你的指点。
这是一年多前了，很多细节记不清楚了。但是可以肯定我们照着说明书做的，有做过直
接加到胶里的。
不可能是加到电泳液里面。倒是试过跑完电泳后和EB一样染色的，呵呵，也不行。
这个加到加样液的办法倒是听起来不错，我赶明看看实验室有没有剩下的，我来试试。
【在 s******y 的大作中提到】
: How did you guys use the gel-red?
: Did you put it in the boiled agarose gel directly (the right way)
: or did you put it in the running buffer (wrong way)?
: The other way to do it, is to add the gel-red directly into the
: loading buffer (1:50) and mix with the DNA sample. In such manner,
: we only use very very few gel-red and the result is spectacular.
:
: TAE
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j**********a
发帖数: 372 | 55 希望给一些具体的信息,这一套东西包括胶的牌子，谢谢！我们不是传统的生物实验室
，需要跑的胶很少,所以希望能用简单省事的方式，价格不是大问题.
【在 k*********2 的大作中提到】
: 是啊，我们实验室就用的SYBR safe，具体牌子没注意
: 非常方便啊，就是有些贵，好像一盒胶就十几二十个要快100欧元，明天去实验室看看
: 牌子和价格。
: 有一个小机器相当于电泳槽，胶是预制的一块块塑料板，各种浓度都有。
: 每次用的时候打开包装，把塑料胶板卡在小机器的槽上（不加buffer），去掉梳子直接
: 加DNA样品（不用加蓝），就可以跑了。跑的时候可以用它的uv背光直接看，跑得差不
: 多会自动终止（没有跑丢的危险，我喜欢）。拿板子直接照相，不会有水滴的到处都是
: ~~~~
: 最方便的是如果要回收DNA时不用胶回收试剂盒。有一种有两排上样孔的胶版，上面加
: 样下面加水，DNA快跑到下面那个孔时，用背光看着，当DNA跑进去的时候吸出来，真的
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A******d
发帖数: 571 | 56 precast胶的有钱实验室啊！估计我们连换个gel red也买不起。 |
C*******e
发帖数: 4348 | 57 太有钱了
那个东西我只见到过广告
还没在身边看到有人用的
【在 b**********t 的大作中提到】
: 啊，我还以为美国的实验室都不用EB了呢，我们实验室用的是lonza的precast的
: cassette,也不用电泳槽和电泳液啥的，直接就把cassette插上电，就跑就行了，三两
: 分钟就跑完了，而且跑的时候直接肉眼就能看到条带，也用不着UV啥的.....
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m****M
发帖数: 360 | 58 我靠，怎么跟我一个偶像呀，握握手。发哥是文艺圈里人品最好的，喜欢看他的片子
【在 p****y 的大作中提到】
: GR直接加到Loading buffer里(不要用来做胶)，用量非常少，正解,period
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e*******c
发帖数: 55 | 59 另一种替代剂叫Gel Red，也是一种红色的染料，出自美国Phenix Research公司，
Gel-Red也是无毒无害的红色染料试剂，作用也是能够整合到DNA双链.
整合到DNA双链.....是无毒无害?
这种脑残的文章也能在BBS发表？
【在 c****5 的大作中提到】
: 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
: 域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
: Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
: 数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
: 成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
: 聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
: 但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
: 功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
: 来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
: 收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
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m*********7
发帖数: 606 | 60 终于见识到了生物实验室里的贵族生活了！
顺便给大家讲一个我听过的牛人用胶，做好8块胶，上完样跑完胶后再泡在一个装着TBE
buffer的容器里。7-8天后胶上的DNA就没了。循环使用，每块胶至少能用10遍。据说
这样大大节省了配胶时间。他同屋的日本人见状，也凑过来用他泡的胶。 |
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a********k
发帖数: 2273 | 61 good to know~
TBE
【在 m*********7 的大作中提到】
: 终于见识到了生物实验室里的贵族生活了！
: 顺便给大家讲一个我听过的牛人用胶，做好8块胶，上完样跑完胶后再泡在一个装着TBE
: buffer的容器里。7-8天后胶上的DNA就没了。循环使用，每块胶至少能用10遍。据说
: 这样大大节省了配胶时间。他同屋的日本人见状，也凑过来用他泡的胶。
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m*********7
发帖数: 606 | 62 你不会是个faculty吧？
【在 a********k 的大作中提到】
: good to know~
:
: TBE
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c****5
发帖数: 77 | 63 Gel Red 加在sample里比较好，具体的就是TAE/TBE 1:100 或1：1000倍稀释GelRed，
然后加到要Loading的样本和Ladder/Marker中去（1-2ul 佛人10ul loading samples）
，这样又省又不会干扰你的 Marker。
【在 D*******A 的大作中提到】
: Since we used Gel-Red, the marker is messy. We all thought that the marker
: did not work. One day, the GR was used up, we used EB again and the marker
: is wonderful. Could anybody tell why?
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c****5
发帖数: 77 | 64 关于Ge l Red溴化乙淀（EB)替代品的照片
mar
一管
【在 L******s 的大作中提到】
: EZ Vision没用过，biotium上买的gel red又贵又不好用。0.5ml管$100，10000X的，按
: 标准的来100ml的gel只能配50块，我减半加的，也只能配100块，最讨厌是每次DNA mar
: ker 800bp以下的都会跑的乱七八糟，我当时都以为我的DNA marker坏掉了，结果同一管
: 里的DNA marker，load到加EB的同样浓度的gel里就跑的好好的，不知道怎么回事。
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c****5
发帖数: 77 | 65
这是我的Ge l Red （溴化乙淀（EB)替代品） RT-PCR照片
【在 c****5 的大作中提到】
: 关于Ge l Red溴化乙淀（EB)替代品的照片
:
: mar
: 一管
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s**9
发帖数: 1649 | |
a********k
发帖数: 2273 | 67 靠。。。难道你想说我萎缩的让实验室所有人都用这种方法？！
多虑了，我只是一个懒惰的学生
【在 m*********7 的大作中提到】
: 你不会是个faculty吧？
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m*******s
发帖数: 469 | 68 spt!
【在 c****5 的大作中提到】
: 尽管生命科学的实验设备和平台在21世纪的第一个10年发生了翻天覆地的变化，很多领
: 域都有了革命性的变化，但是现代生物实验室中最常用最有毒性的试剂溴化乙淀（
: Ethidium Bromide）却一直没有改变，从1950年开始用到了今天，想信至今还是绝大多
: 数实验室的必备品。溴化乙淀的主要作用是分析DNA，其分子可插入DNA的碱基之间，形
: 成一种络合物，在302nm紫外光透射仪激发并射出橙红色信号，可以用来显示琼脂糖和
: 聚丙稀酰胺凝胶中的DNA片断。
: 但是溴化乙淀是一种很剧烈的化学致癌剂，能够诱导DNA碱基突变和破坏细胞线粒体的
: 功能，一般实验室使用的剂量虽然很低(0.25-1.0ug/ml), 但是给实验室工作品人员带
: 来了很大的麻烦，使用时必须要戴手套，含有溴化乙淀的琼脂糖和用过的电泳液必须要
: 收集到专用的容器中保存，转运和处理，含有少量溴化乙淀的实验室污水也要确保严格
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K******S
发帖数: 10109 | 69 还是上FACULTY版去推销吧
【在 c****5 的大作中提到】
:
: 这是我的Ge l Red （溴化乙淀（EB)替代品） RT-PCR照片
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D*a
发帖数: 6830 | 70 是阿，前一阵子有人来推销，隔壁实验室用了下子，做老鼠的genotypage，跑出来的带
都不一样齐，晕死了。
【在 E*******g 的大作中提到】
: 老板考虑到安全的因素，让我从比较新的产品中找一个EB的替代品。从产品公司的广告
: 和许多同事的推荐中选了几个作了一下比较。
: 生物学的实验最基本的就是认真仔细。不做不知道，自己一上手就明白是怎么回事了。
: 上个月刚给本组的同事做了报告，各种产品的优劣都阐述了一下。最后大家一致的结论
: 是EB最好，目前基本没有可全面可替代的产品。
: 两个要点，EB的致癌性并没有被证明，只有毒性要小心一些，可毒性作用的最低浓度要
: 远高于我们一般使用的浓度。而其他产品的毒副作用目前也无法证明。
: 至于Bio-RED， 大家可以在一个胶上RUN ＤＮＡ MARKER 梯度，从100 ~ 2000 NG，
: 同时加上两个酶切样品（同样的DNA，一个0.2ug， 另一个2ug）， 结果很明显。不过
: 如果你不在乎ＤＮＡ大小的准确性那另当别论了。
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e*****d
发帖数: 160 | 71 我同学网上看到的：
38岁的刘本春事发前在加大泌尿科工作，去年11月被控在同一实验室工作的中国女同事
曹梅的饮水中下毒，刘本春否认全部控罪。他的辩护律师菲兹奥指出，当事人根本无意
伤害曹梅。刘本春只是用溴化乙锭进行DNA的分析，从未有人死于溴化乙锭。如果想用
这种物质害人，需要喝290亿万杯。带有溴化乙锭的杯子根本不是曹梅的，只是在她的
工作台附近，曹梅误喝了一些因含有化学剂而变蓝的水，但没有对健康造成不良影响 |
p**********l
发帖数: 1160 | 72 你是生 & 化的吗？
【在 L*****s 的大作中提到】
: 既然选择了生&化专业,就注定是杯具结束..为了所谓的真理和知识,还有奖学金,那贱命
: 算个啥撒..
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a******0
发帖数: 1071 | 73 囧。
TBE
【在 m*********7 的大作中提到】
: 终于见识到了生物实验室里的贵族生活了！
: 顺便给大家讲一个我听过的牛人用胶，做好8块胶，上完样跑完胶后再泡在一个装着TBE
: buffer的容器里。7-8天后胶上的DNA就没了。循环使用，每块胶至少能用10遍。据说
: 这样大大节省了配胶时间。他同屋的日本人见状，也凑过来用他泡的胶。
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p****n
发帖数: 9263 | 74 这种狗屁你也信啊？还290亿万杯，喝290杯盐开水你就死翘翘了
【在 e*****d 的大作中提到】
: 我同学网上看到的：
: 38岁的刘本春事发前在加大泌尿科工作，去年11月被控在同一实验室工作的中国女同事
: 曹梅的饮水中下毒，刘本春否认全部控罪。他的辩护律师菲兹奥指出，当事人根本无意
: 伤害曹梅。刘本春只是用溴化乙锭进行DNA的分析，从未有人死于溴化乙锭。如果想用
: 这种物质害人，需要喝290亿万杯。带有溴化乙锭的杯子根本不是曹梅的，只是在她的
: 工作台附近，曹梅误喝了一些因含有化学剂而变蓝的水，但没有对健康造成不良影响
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k****o
发帖数: 589 | |
n***g
发帖数: 5027 | |
s******s
发帖数: 13035 | 77 复旦生科院老一辈做分子生物的一退休纷纷得癌症，据说当年
统统都是裸手抓胶。
【在 k****o 的大作中提到】
: 进来纯膜拜各种裸手操作的英雄事迹。
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g****s
发帖数: 62 | 78 Sunnyday 和其他大虾，
准备换成GelRed. 请问把GelRed 1:50 加到loading buffer里是1X还是6X? In other
words, what is the final concentration in ready-to-load sample?
Thanks a lot!
【在 s******y 的大作中提到】
: How did you guys use the gel-red?
: Did you put it in the boiled agarose gel directly (the right way)
: or did you put it in the running buffer (wrong way)?
: The other way to do it, is to add the gel-red directly into the
: loading buffer (1:50) and mix with the DNA sample. In such manner,
: we only use very very few gel-red and the result is spectacular.
:
: TAE
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J*******6
发帖数: 72 | 79 Can DNA be used for subcloning after use of EB substitutes ?
I once tried a EB substitutes and found the DNA can be be subcloned. It
wasted my 1 week time to found out this problem.
【在 g****s 的大作中提到】
: Sunnyday 和其他大虾，
: 准备换成GelRed. 请问把GelRed 1:50 加到loading buffer里是1X还是6X? In other
: words, what is the final concentration in ready-to-load sample?
: Thanks a lot!
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y***k
发帖数: 60 | 80 还是把名字列出来吧
据我所知复旦生科院老前辈里面得癌症的还真没几个...
【在 s******s 的大作中提到】
: 复旦生科院老一辈做分子生物的一退休纷纷得癌症，据说当年
: 统统都是裸手抓胶。
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b*****l
发帖数: 9499 | 81 Onz
【在 c****5 的大作中提到】
: EB是化学品，莹光素食生物制剂，对DNA的作用就不一样了，就像小分子化学药品对人
: 体的毒性大，而单克隆抗体药物的毒性则小一样。
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s********n
发帖数: 2939 | 82 现在全部都改用SYBR Green和GelRed了，下游的操作和用EB一样，唯一的优点就是切胶
的可以不用紫外，既保护自己也保护DNA，但我都是严格按照EB的防护处理的，毕竟能
够和DNA结合的dyes，估计突变毒性不会小。 |
m*******r
发帖数: 7495 | 83 考古了
lab正好要用到
thanks for the whole Lou!
【在 s******y 的大作中提到】
: How did you guys use the gel-red?
: Did you put it in the boiled agarose gel directly (the right way)
: or did you put it in the running buffer (wrong way)?
: The other way to do it, is to add the gel-red directly into the
: loading buffer (1:50) and mix with the DNA sample. In such manner,
: we only use very very few gel-red and the result is spectacular.
:
: TAE
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c****9
发帖数: 95 | 84 哎呀，上次跑胶时还溅了了几小滴EB到脸上，不会致癌吧。之前实验室的人跟我说过EB
会致癌，但是还没到风声鹤唳的地步吧。我看那个跟我强调EB致癌的人手上整天也是蓝
蓝的一片啊。 |
A********0
发帖数: 3310 | 85 那是国内操作不规范.
不管什么都到下水道,这是对自己对后辈很不负责的做法.
【在 a****g 的大作中提到】
: 这个没什么吧？在国内的时候不管用了什么试剂，都是冲到下水道里面，国外有时候就
: 是有些小题大做地说。
|
A********0
发帖数: 3310 | 86 我们组的也是推广用sybr safe.
就不明白国内来的博士就是怎么都不改,一定要用eb. 真是让人头痛. 搞得组里其他人
很有微辞.
【在 j*******8 的大作中提到】
: ding, I used SYBR safe too!
|
k*****o
发帖数: 1486 | 87 有条件就用别的，没条件就继续用EB，有什么大不了的。感情那些学化学的没法活了阿
，每天碰得化合物除了水和NaCl全是剧毒 |
