l**x
发帖数: 52 | 1 做CO-IP时，Input量对于IP蛋白刚好时，对CO-IP下来的蛋白来说，实在太多了。相反
，对CO-IP蛋白刚好量的Input对IP蛋白来说又太少了。不知道大家怎么控制Input的，
我是转在一张膜上后，按照IP和CO-IP蛋白的分子量大小，剪开膜后各自用相应的抗体
WESTERN的。实验室没有别人做这个实验，自己一个人也不知道怎么样做是对的。先谢
谢大家了。 |
G******O
发帖数: 189 | 2 CO-IP尤其是共转细胞上的CO-IP与其说是做科学不如说是做艺术.
试试调整一抗浓度,曝光时间,最重要的是X光胶片一定要准备充足.
【在 l**x 的大作中提到】
: 做CO-IP时，Input量对于IP蛋白刚好时，对CO-IP下来的蛋白来说，实在太多了。相反
: ，对CO-IP蛋白刚好量的Input对IP蛋白来说又太少了。不知道大家怎么控制Input的，
: 我是转在一张膜上后，按照IP和CO-IP蛋白的分子量大小，剪开膜后各自用相应的抗体
: WESTERN的。实验室没有别人做这个实验，自己一个人也不知道怎么样做是对的。先谢
: 谢大家了。
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w***a
发帖数: 4361 | 3 这个实验不就是定个性嘛，最后western band大小控制曝光就完了嘛。
反正你两个band剪开了又不在一张膜上。
【在 l**x 的大作中提到】
: 做CO-IP时，Input量对于IP蛋白刚好时，对CO-IP下来的蛋白来说，实在太多了。相反
: ，对CO-IP蛋白刚好量的Input对IP蛋白来说又太少了。不知道大家怎么控制Input的，
: 我是转在一张膜上后，按照IP和CO-IP蛋白的分子量大小，剪开膜后各自用相应的抗体
: WESTERN的。实验室没有别人做这个实验，自己一个人也不知道怎么样做是对的。先谢
: 谢大家了。
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l**x
发帖数: 52 | 4 我估计没有讲清楚，假如A和B相互作用，我用CO-IP检测，用A抗体IP，之后我把IP的样
品，对照和一定量的蛋白当作Input一起点到胶后，转膜，把膜切成两部份，一半检测A
，另一半检测B。所以A和B真正的input量是一样的。因为是用A抗体IP的，所以IP样品
的A特别多，需要比较多的input才能让input的A条带和IP样品的A条带看上去差不多。
但这样的input对于IP样品的B来说过多了,就是说input的B条带比IP样品的B条带看上去
浓很多很多。不知道怎么处理这个问题较好。希望这次能讲的明白些。谢谢 |
l**x
发帖数: 52 | 5 但是input和IP的样品是在同一半膜上的。
【在 w***a 的大作中提到】
: 这个实验不就是定个性嘛，最后western band大小控制曝光就完了嘛。
: 反正你两个band剪开了又不在一张膜上。
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w**t
发帖数: 52 | 6 I always run two gels, one for IP and one for co-IP. Usually, the IP samples
will be diluted for 10-fold. |
l**x
发帖数: 52 | 7 Thanks much.
samples
【在 w**t 的大作中提到】
: I always run two gels, one for IP and one for co-IP. Usually, the IP samples
: will be diluted for 10-fold.
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i******k
发帖数: 4625 | 8 为什么一定要“input的A条带和IP样品的A条带看上去差不多”？？？
测A
【在 l**x 的大作中提到】
: 我估计没有讲清楚，假如A和B相互作用，我用CO-IP检测，用A抗体IP，之后我把IP的样
: 品，对照和一定量的蛋白当作Input一起点到胶后，转膜，把膜切成两部份，一半检测A
: ，另一半检测B。所以A和B真正的input量是一样的。因为是用A抗体IP的，所以IP样品
: 的A特别多，需要比较多的input才能让input的A条带和IP样品的A条带看上去差不多。
: 但这样的input对于IP样品的B来说过多了,就是说input的B条带比IP样品的B条带看上去
: 浓很多很多。不知道怎么处理这个问题较好。希望这次能讲的明白些。谢谢
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g*********5
发帖数: 2533 | 9 use licor system, you would say goodby with your film.:) |
