v***a
发帖数: 1242 | 1 我在研究某个蛋白在其overexpress情况下对某个器官的作用。想给老鼠注射含有这个
蛋白insert的plasmid DNA，第一次做，不知道有些什么需要注意的？是不是可以用PBS
作为等价于in vitro中溶解DNA的buffer/media？我在in vitro中overexpress的时候，
用的transfection reagent是QIAGEN的effectene，不知道给老鼠注射的话也仍旧可以
用这个吗？或者大家有推荐的吗？
非常感谢！ |
w***a
发帖数: 4361 | 2 这种实验一般都是用virus做的吧，直接iv injection可能转化效率很低，当然如果器官
是liver的话，可能好一点。
PBS
【在 v***a 的大作中提到】
: 我在研究某个蛋白在其overexpress情况下对某个器官的作用。想给老鼠注射含有这个
: 蛋白insert的plasmid DNA，第一次做，不知道有些什么需要注意的？是不是可以用PBS
: 作为等价于in vitro中溶解DNA的buffer/media？我在in vitro中overexpress的时候，
: 用的transfection reagent是QIAGEN的effectene，不知道给老鼠注射的话也仍旧可以
: 用这个吗？或者大家有推荐的吗？
: 非常感谢！
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v***a
发帖数: 1242 | 3 不是liver。。。老板确实提了一句用virus。。我再想想。多谢了！
器官
【在 w***a 的大作中提到】
: 这种实验一般都是用virus做的吧，直接iv injection可能转化效率很低，当然如果器官
: 是liver的话，可能好一点。
:
: PBS
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m*********7
发帖数: 5207 | 4 不需要用lipid based transfection reagent。 |
v***a
发帖数: 1242 | 5 你的意思是直接注射DNA就可以了？
【在 m*********7 的大作中提到】
: 不需要用lipid based transfection reagent。
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a****d
发帖数: 1919 | 6 virus or electroporation |
D***a
发帖数: 516 | 7 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
【在 a****d 的大作中提到】
: virus or electroporation
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w***a
发帖数: 4361 | 8 弄个电椅？
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
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a****d
发帖数: 1919 | 9 depends on where you wanna over express or knock down, not sure if you can
do electroporation in liver though... u can google the protocol
virus maybe the best way to go for your experiments
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
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o********r
发帖数: 775 | 10 十年前记得有直接大剂量肌肉注射的，就是效率有点低 |
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o**i
发帖数: 1165 | 11 duh!
`
器官
【在 v***a 的大作中提到】
: 不是liver。。。老板确实提了一句用virus。。我再想想。多谢了！
:
: 器官
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o*****a
发帖数: 2335 | 12 至少七八年前就开始流行了，protocols能搜出不少吧，比如这个
http://www.natureprotocols.com/2007/12/13/using_in_utero_electroporation.php
电压，持续时间，脉冲次数要自己试，做好大批动物被烧烤的思想准备...
【在 D***a 的大作中提到】
: 怎么给动物做electroporation？ 求protocol。
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R*****w
发帖数: 447 | 13 直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
in vivo 用transfection reagent 效果不明显 |
v***a
发帖数: 1242 | 14 谢谢啦！
【在 R*****w 的大作中提到】
: 直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
: 机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
: in vivo 用transfection reagent 效果不明显
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s******s
发帖数: 13035 | 15 直接金粒吸附用基因枪打吧
【在 R*****w 的大作中提到】
: 直接注射是可以的，只是转化效率很低。至少肌肉注射ＤＮＡ可以表达目的基因、刺激
: 机体产生抗体，但要多次大量注射才行（50ug/20gmouse/dose,３－４次）
: in vivo 用transfection reagent 效果不明显
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c*****0
发帖数: 109 | 16
这都行？又不是烟草叶子，能穿过皮嘛
【在 s******s 的大作中提到】
: 直接金粒吸附用基因枪打吧
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t******y
发帖数: 716 | 17 这种实验压根就不该做，因为无论你怎么做，实验结果都无法解释。因为转染效率低是
一个问题，转染的专一性又是一个问题，因为临近组织，循环系统的影响等等，一大堆
的器官将牵涉进去。最后的无论出现什么结果，都会是一团浆糊。
如果可能还是直接在果蝇或其他容易的模式动物里，做组织特异性转基因。 |
s******s
发帖数: 13035 | 18 基因枪打蛋白疫苗、DNA疫苗啥的十几年历史都有了，
能够造成免疫应答的，细胞里面表达应该是小case了
【在 c*****0 的大作中提到】
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: 这都行？又不是烟草叶子，能穿过皮嘛
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