d*******w
发帖数: 45 | 1 上次大家在讨论抗体的时候（具体忘了哪个帖子），有提到过某个大学的抗体中心会卖
一些常见的抗体相当便宜，谁能帮忙给个连接？ 或者有哪些公司会卖比较少量的像
40ug这中大小的？
另外想问一个关于c-myc抗体的问题，我用的是Cell Signaling 的抗兔抗体。做WB的时
候后用1：1000，但是从来没出现过。我的cell lysates 是直接将SDS上样buffer加到
细胞里，煮10分钟后，离心，上样。不知道有没有人和我出现同样的问题？或者我有哪
里做的不对？谢谢指教 |
w***a
发帖数: 4361 | 2 http://dshb.biology.uiowa.edu/Antibody-list
【在 d*******w 的大作中提到】
: 上次大家在讨论抗体的时候（具体忘了哪个帖子），有提到过某个大学的抗体中心会卖
: 一些常见的抗体相当便宜，谁能帮忙给个连接？ 或者有哪些公司会卖比较少量的像
: 40ug这中大小的？
: 另外想问一个关于c-myc抗体的问题，我用的是Cell Signaling 的抗兔抗体。做WB的时
: 候后用1：1000，但是从来没出现过。我的cell lysates 是直接将SDS上样buffer加到
: 细胞里，煮10分钟后，离心，上样。不知道有没有人和我出现同样的问题？或者我有哪
: 里做的不对？谢谢指教
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w***a
发帖数: 4361 | 3 lysate buffer得专门配吧，至少得有proteinase inhibitor那些
你的蛋白搞不好degrade了。
【在 d*******w 的大作中提到】
: 上次大家在讨论抗体的时候（具体忘了哪个帖子），有提到过某个大学的抗体中心会卖
: 一些常见的抗体相当便宜，谁能帮忙给个连接？ 或者有哪些公司会卖比较少量的像
: 40ug这中大小的？
: 另外想问一个关于c-myc抗体的问题，我用的是Cell Signaling 的抗兔抗体。做WB的时
: 候后用1：1000，但是从来没出现过。我的cell lysates 是直接将SDS上样buffer加到
: 细胞里，煮10分钟后，离心，上样。不知道有没有人和我出现同样的问题？或者我有哪
: 里做的不对？谢谢指教
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v***a
发帖数: 1242 | 4 我买过GeneScript的40ug的
他们的客服也还好
【在 d*******w 的大作中提到】
: 上次大家在讨论抗体的时候（具体忘了哪个帖子），有提到过某个大学的抗体中心会卖
: 一些常见的抗体相当便宜，谁能帮忙给个连接？ 或者有哪些公司会卖比较少量的像
: 40ug这中大小的？
: 另外想问一个关于c-myc抗体的问题，我用的是Cell Signaling 的抗兔抗体。做WB的时
: 候后用1：1000，但是从来没出现过。我的cell lysates 是直接将SDS上样buffer加到
: 细胞里，煮10分钟后，离心，上样。不知道有没有人和我出现同样的问题？或者我有哪
: 里做的不对？谢谢指教
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Z******5
发帖数: 435 | 5 我也在用c-MYC的抗体，用了两家公司的，杂带都很多。 abcam的还勉强可以用。
【在 d*******w 的大作中提到】
: 上次大家在讨论抗体的时候（具体忘了哪个帖子），有提到过某个大学的抗体中心会卖
: 一些常见的抗体相当便宜，谁能帮忙给个连接？ 或者有哪些公司会卖比较少量的像
: 40ug这中大小的？
: 另外想问一个关于c-myc抗体的问题，我用的是Cell Signaling 的抗兔抗体。做WB的时
: 候后用1：1000，但是从来没出现过。我的cell lysates 是直接将SDS上样buffer加到
: 细胞里，煮10分钟后，离心，上样。不知道有没有人和我出现同样的问题？或者我有哪
: 里做的不对？谢谢指教
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Z******5
发帖数: 435 | 6 c-Myc内源性的很难检测，信号很弱，HepG2，A549的都是这样。检测knockdown的效果
感觉就是在YY。 不过转入pcDNA3.1过表达的，信号非常非常非常（n个非常）强。
【在 d*******w 的大作中提到】
: 上次大家在讨论抗体的时候（具体忘了哪个帖子），有提到过某个大学的抗体中心会卖
: 一些常见的抗体相当便宜，谁能帮忙给个连接？ 或者有哪些公司会卖比较少量的像
: 40ug这中大小的？
: 另外想问一个关于c-myc抗体的问题，我用的是Cell Signaling 的抗兔抗体。做WB的时
: 候后用1：1000，但是从来没出现过。我的cell lysates 是直接将SDS上样buffer加到
: 细胞里，煮10分钟后，离心，上样。不知道有没有人和我出现同样的问题？或者我有哪
: 里做的不对？谢谢指教
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d*******w
发帖数: 45 | |
d*******w
发帖数: 45 | 8 SDS上样buffer里面有beta-ME，那个不是可以抑制蛋白酶吗？我就没有另外配了。
【在 w***a 的大作中提到】
: lysate buffer得专门配吧，至少得有proteinase inhibitor那些
: 你的蛋白搞不好degrade了。
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d*******w
发帖数: 45 | 9 你的意思是样品上样量有可能不够？
【在 Z******5 的大作中提到】
: c-Myc内源性的很难检测，信号很弱，HepG2，A549的都是这样。检测knockdown的效果
: 感觉就是在YY。 不过转入pcDNA3.1过表达的，信号非常非常非常（n个非常）强。
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Z******5
发帖数: 435 | 10 应该不是上样量的问题，我striping后（或者跑的久一点，从45kD处剪开），用beta-
actin杂交，内参的信号已经非常强了，而内源性的c-myc还是很弱。
我用过的两家c-myc的抗体都能杂处很多条带，其中在48-65kD之间有三条条带，转入质
粒过表达显示最上面的条带才是c-myc的（有抗体公司说是表观分子量68kD，有文章说
是64kD，不过所指的是同一条带）。你可以参考这篇文章Nucleolar localization of
hepatic c-Myc: a potential mechanism for c-Myc regulation
关于内源性c-myc杂交很弱的问题，我查过很多文章，多数都是杂带很多，64kD处很弱
。有个别条带很专一，信号很强的，我很怀疑，因为我知道有人拿其它抗体，比如
actin抗体做了个figure，然后说是c-myc杂交的，还发了不错的文章。
【在 d*******w 的大作中提到】
: 你的意思是样品上样量有可能不够？
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r***e
发帖数: 2539 | 11 Myc蛋白，不是Myc-tag，据说很容易降解，所以很难看到信号。
【在 d*******w 的大作中提到】
: 上次大家在讨论抗体的时候（具体忘了哪个帖子），有提到过某个大学的抗体中心会卖
: 一些常见的抗体相当便宜，谁能帮忙给个连接？ 或者有哪些公司会卖比较少量的像
: 40ug这中大小的？
: 另外想问一个关于c-myc抗体的问题，我用的是Cell Signaling 的抗兔抗体。做WB的时
: 候后用1：1000，但是从来没出现过。我的cell lysates 是直接将SDS上样buffer加到
: 细胞里，煮10分钟后，离心，上样。不知道有没有人和我出现同样的问题？或者我有哪
: 里做的不对？谢谢指教
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c******r
发帖数: 3778 | 12 你load了多少蛋白？有定量不？
【在 d*******w 的大作中提到】
: 上次大家在讨论抗体的时候（具体忘了哪个帖子），有提到过某个大学的抗体中心会卖
: 一些常见的抗体相当便宜，谁能帮忙给个连接？ 或者有哪些公司会卖比较少量的像
: 40ug这中大小的？
: 另外想问一个关于c-myc抗体的问题，我用的是Cell Signaling 的抗兔抗体。做WB的时
: 候后用1：1000，但是从来没出现过。我的cell lysates 是直接将SDS上样buffer加到
: 细胞里，煮10分钟后，离心，上样。不知道有没有人和我出现同样的问题？或者我有哪
: 里做的不对？谢谢指教
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