t*****z
发帖数: 1598 | 1 各位打扰了！在下最近想要抽提一批质粒，去打果蝇胚胎。以前我们都是用Qiagen
Maxiprep Kit抽提的（QIAfilter，有针筒的那种），照着manual来做，溶解于
nuclease-free water，转化效率不错。而最近这一批质粒也是用同样办法抽提的，转
化效率却很低。我觉得并不是我做错了，而是还可以做得更好，以弥补这批质粒本身的
缺陷。（质粒的设计或许有缺陷，但是老板拍板决定不更改设计，而是再打一轮果蝇，
所以就只能在DNA的质量上下工夫了。）
请教各位有经验的前辈，抽提转基因用的DNA有什么讲究和诀窍吗？manual上的叙述在
下已经了然于胸，但是想到真正有用的经验教训或许不著于文字，却能论坛求得，因此
求教各位。在下先谢过了！ |
t*****z
发帖数: 1598 | 2 PS: 我的质粒抽提之前是保存在top10菌株里的，而以前用的都是DH5a，该不会是这个
问题吧？ |
d*******s
发帖数: 61 | 3 我觉得maxi提出来的质粒有时候转染效率很低，可是ratio 260/280在正常范围内。或
许是什么没检测出的东西污染。 所以现在一直用mini提出来的质粒做转染，结果不同
质粒的表达水平——那叫一个均一啊！ 就像actin 一样的 |
s******s
发帖数: 13035 | 4 自己打的还是公司打的？
【在 t*****z 的大作中提到】
: 各位打扰了！在下最近想要抽提一批质粒，去打果蝇胚胎。以前我们都是用Qiagen
: Maxiprep Kit抽提的（QIAfilter，有针筒的那种），照着manual来做，溶解于
: nuclease-free water，转化效率不错。而最近这一批质粒也是用同样办法抽提的，转
: 化效率却很低。我觉得并不是我做错了，而是还可以做得更好，以弥补这批质粒本身的
: 缺陷。（质粒的设计或许有缺陷，但是老板拍板决定不更改设计，而是再打一轮果蝇，
: 所以就只能在DNA的质量上下工夫了。）
: 请教各位有经验的前辈，抽提转基因用的DNA有什么讲究和诀窍吗？manual上的叙述在
: 下已经了然于胸，但是想到真正有用的经验教训或许不著于文字，却能论坛求得，因此
: 求教各位。在下先谢过了！
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t*****z
发帖数: 1598 | 5 是让公司打的，Genetic Services Inc，以前打出来效率都还可以的。
【在 s******s 的大作中提到】
: 自己打的还是公司打的？
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t*****z
发帖数: 1598 | 6 多谢dynabeads ，我也改用mini的试试吧 |
S******e
发帖数: 393 | 7 难道是因为换了菌株？
DH5a更好些？
也是一个可能的原因(不确定)。 |
