h*****t 发帖数: 103 | 1 请教一下高人们:
1. 对于Leukemia stem cell,大家一般用什么细胞系来筛选,能否告知一二,具体的
细胞株名称?
2. 对leukemia/lymphoma cell line,大家觉得哪几个细胞株最容易转染?
由于种种原因,暂无法建小鼠leukemia/lymphoma model;同时也无法使用病毒等进行
感染,只能使用细胞系,同时用最原始的方法操作,望大家不吝赐教。
谢谢! |
s*********t 发帖数: 600 | 2 1 HPC7
2 NB4 U937 HL60 用amaxa的kit转染
【在 h*****t 的大作中提到】 : 请教一下高人们: : 1. 对于Leukemia stem cell,大家一般用什么细胞系来筛选,能否告知一二,具体的 : 细胞株名称? : 2. 对leukemia/lymphoma cell line,大家觉得哪几个细胞株最容易转染? : 由于种种原因,暂无法建小鼠leukemia/lymphoma model;同时也无法使用病毒等进行 : 感染,只能使用细胞系,同时用最原始的方法操作,望大家不吝赐教。 : 谢谢!
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h*****t 发帖数: 103 | |
s*********t 发帖数: 600 | 4 1 还有32D cell. 32D cells can differentiate into granulocytes and in my
opinion it would be better to use than NB4, U937 and other transformed
cells lines, because they are not considered to be transformed.
Differentiation can be blocked by oncogenes etc.
See Figuera et al, 2010 Cancer Cell for details.
【在 h*****t 的大作中提到】 : 谢谢,非常感谢!
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h*****t 发帖数: 103 | 5 谢谢,但是有些迷糊了。
因为ATCC上面这样写的:
Description
lymphoblast, established from long-term bone marrow cultures of C3H/HeJ mice
infected with the Friend murine leukemia virus. Morphology: mostly round
cells growing singly or in small clusters in suspension, some cells are
loosely adherent.
但是,另外一个人的paper却写的该细胞为myeloid:
Shi B, Prisco M, Calin G, Liu CG, Russo G, Giordano A, Baserga R. Expression
profiles of micro RNA in proliferating and differentiating 32D murine
myeloid cells. J Cell Physiology 207: 706-10, 2006.
这个怎么办呢,信谁好一些? |
h*****t 发帖数: 103 | 6 另外,32D来自C3H/HeJ 小鼠,为H-2k,C57/B6老鼠为H-2b,32D打到后者里面是不是应
该会被排斥掉呢? |
s*********t 发帖数: 600 | 7 是myeloid
mice
Expression
【在 h*****t 的大作中提到】 : 谢谢,但是有些迷糊了。 : 因为ATCC上面这样写的: : Description : lymphoblast, established from long-term bone marrow cultures of C3H/HeJ mice : infected with the Friend murine leukemia virus. Morphology: mostly round : cells growing singly or in small clusters in suspension, some cells are : loosely adherent. : 但是,另外一个人的paper却写的该细胞为myeloid: : Shi B, Prisco M, Calin G, Liu CG, Russo G, Giordano A, Baserga R. Expression : profiles of micro RNA in proliferating and differentiating 32D murine
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s*****g 发帖数: 7857 | 8 leukemia/lymphoma cell line只有amaxa的kit电转,或病毒转染.
别的LAB用BIO-RAD电转机器,加PBS电转leukemia(当然死了很多,但也有活的),但省钱啊. |
h*****t 发帖数: 103 | 9 好的,多谢,我再多看点文献。
给形象打分有什么用处呢? |
s*****g 发帖数: 7857 | 10 友情提醒:如果用BIO-RAD上诉廉价方法,是要大量细胞的.
而AMAXA 和病毒转染就不需要大量细胞.
【在 h*****t 的大作中提到】 : 好的,多谢,我再多看点文献。 : 给形象打分有什么用处呢?
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h*****t 发帖数: 103 | 11 现在看来,这些都比较难以实现了,我觉得用neon电转仪可能也是可行的。
但是这些实验室都不具备的,包括病毒。
能考虑到的就是直接转,如果没有办法,只好放弃啦。
谢谢大家! |
h******u 发帖数: 602 | 12 借贵贴问个问题哈。我无意中发现一个很重要的调控铁代谢的基因在K562中表达相当
高。之前大家一直认为此基因只在肝脏表达。我想做一个实验看一下此基因是否在血液
细胞的分化中起作用。
我想找一个比较原始的hematopoietic cell line, 此细胞株能够在不同条件下分化成
leukocyte, lymphcyte, and red cells。完了检测此基因在不同阶段的表达,如果结果感兴趣的话,可以knock down此基因看它的功能。
那种细胞株合适呢?
【在 h*****t 的大作中提到】 : 请教一下高人们: : 1. 对于Leukemia stem cell,大家一般用什么细胞系来筛选,能否告知一二,具体的 : 细胞株名称? : 2. 对leukemia/lymphoma cell line,大家觉得哪几个细胞株最容易转染? : 由于种种原因,暂无法建小鼠leukemia/lymphoma model;同时也无法使用病毒等进行 : 感染,只能使用细胞系,同时用最原始的方法操作,望大家不吝赐教。 : 谢谢!
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z********8 发帖数: 818 | |
h**********8 发帖数: 650 | 14 貌似32d?
但是只看到诱导这个往neutropil方向分化的文章,
如果想往lymphocyte 方向分化,可能要找更早的祖细胞
呵呵,干脆分离造血干得了,不过你还要分化干啥,直接找几个细胞系得了
k562是red cell 来源的,高表达这个控铁的,不奇怪,也容易往red cell 方向做
还不如直接比较leukemia, monocyte, lymphoma, k562
估计只有k562高表达
结果感兴趣的话,可以knock down此基因看它的功能。
【在 h******u 的大作中提到】 : 借贵贴问个问题哈。我无意中发现一个很重要的调控铁代谢的基因在K562中表达相当 : 高。之前大家一直认为此基因只在肝脏表达。我想做一个实验看一下此基因是否在血液 : 细胞的分化中起作用。 : 我想找一个比较原始的hematopoietic cell line, 此细胞株能够在不同条件下分化成 : leukocyte, lymphcyte, and red cells。完了检测此基因在不同阶段的表达,如果结果感兴趣的话,可以knock down此基因看它的功能。 : 那种细胞株合适呢?
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h**********8 发帖数: 650 | 15 没有一个好转的
amaxa巨贵,不同细胞还得买不同的盒子
我比较过,invitrogen 的neon是最好的
【在 h*****t 的大作中提到】 : 请教一下高人们: : 1. 对于Leukemia stem cell,大家一般用什么细胞系来筛选,能否告知一二,具体的 : 细胞株名称? : 2. 对leukemia/lymphoma cell line,大家觉得哪几个细胞株最容易转染? : 由于种种原因,暂无法建小鼠leukemia/lymphoma model;同时也无法使用病毒等进行 : 感染,只能使用细胞系,同时用最原始的方法操作,望大家不吝赐教。 : 谢谢!
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h*****t 发帖数: 103 | |
h******u 发帖数: 602 | 17 你说的分离造血干细胞,具体如何做?分离后可以用不同的生长因子诱导成下级细胞?
有没有这方面经典的文章让俺拜读一下?对这领域实在是不熟悉。现在在医院工作,
白血病的病人很多,CD34阳性的细胞很容易找到。
如直接比较leukemia, monocyte, lymphoma细胞株的话,可否推荐一下细胞株?
【在 h**********8 的大作中提到】 : 貌似32d? : 但是只看到诱导这个往neutropil方向分化的文章, : 如果想往lymphocyte 方向分化,可能要找更早的祖细胞 : 呵呵,干脆分离造血干得了,不过你还要分化干啥,直接找几个细胞系得了 : k562是red cell 来源的,高表达这个控铁的,不奇怪,也容易往red cell 方向做 : 还不如直接比较leukemia, monocyte, lymphoma, k562 : 估计只有k562高表达 : : 结果感兴趣的话,可以knock down此基因看它的功能。
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h**********8 发帖数: 650 | 18 造血干我没有分离过,不好意思,帮不了你。貌似有一种磁珠挂了cd34抗体,可以直接
把细胞拉出来。版上有没有高手?现身说一说吧。
造血干的分化不是像文献里说的那么容易,如果你可以把造血干高效分化成这几种细胞
,就可以直接发表了。
leukemia 细胞系比如hl-60
mono-leukemia u937
lymphoma 比如raji,
此外的还有plb, kg1, thp1, nb4也都用的很多
【在 h******u 的大作中提到】 : 你说的分离造血干细胞,具体如何做?分离后可以用不同的生长因子诱导成下级细胞? : 有没有这方面经典的文章让俺拜读一下?对这领域实在是不熟悉。现在在医院工作, : 白血病的病人很多,CD34阳性的细胞很容易找到。 : 如直接比较leukemia, monocyte, lymphoma细胞株的话,可否推荐一下细胞株?
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s*****g 发帖数: 7857 | 19 不一定要病毒.
我就用质粒直接电转的.
电转仪去其他实验室借用一下就可以啊.主要是自己买KIT。
网上查查就大致知道该用什么KIT了。Amaxa都有的。买了kit 还会有个免
费盘,盘上有他们机器使用的细胞系和程序几试剂(kit).
我们用L较多。
如果没有,可以根据相关类似细胞系选kit和程序号就行。转完再筛选啊。筛选要比其他细胞系(神经/肾的要长时间些。要有耐心。)别的可能转天就上抗生素了。我往往多等些时间。因为死细胞多。活的就缓的慢。
另外还可以用GFP Flow cytometry选啊。
【在 h*****t 的大作中提到】 : 现在看来,这些都比较难以实现了,我觉得用neon电转仪可能也是可行的。 : 但是这些实验室都不具备的,包括病毒。 : 能考虑到的就是直接转,如果没有办法,只好放弃啦。 : 谢谢大家!
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h*****t 发帖数: 103 | |
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h******u 发帖数: 602 | 21 Thanks!!!
【在 h**********8 的大作中提到】 : 造血干我没有分离过,不好意思,帮不了你。貌似有一种磁珠挂了cd34抗体,可以直接 : 把细胞拉出来。版上有没有高手?现身说一说吧。 : 造血干的分化不是像文献里说的那么容易,如果你可以把造血干高效分化成这几种细胞 : ,就可以直接发表了。 : leukemia 细胞系比如hl-60 : mono-leukemia u937 : lymphoma 比如raji, : 此外的还有plb, kg1, thp1, nb4也都用的很多
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g*********5 发帖数: 2533 | 22 TfR2 or hepcidin?
结果感兴趣的话,可以knock down此基因看它的功能。
【在 h******u 的大作中提到】 : 借贵贴问个问题哈。我无意中发现一个很重要的调控铁代谢的基因在K562中表达相当 : 高。之前大家一直认为此基因只在肝脏表达。我想做一个实验看一下此基因是否在血液 : 细胞的分化中起作用。 : 我想找一个比较原始的hematopoietic cell line, 此细胞株能够在不同条件下分化成 : leukocyte, lymphcyte, and red cells。完了检测此基因在不同阶段的表达,如果结果感兴趣的话,可以knock down此基因看它的功能。 : 那种细胞株合适呢?
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h**********8 发帖数: 650 | 23 hehe, I am 山东人 too
【在 h******u 的大作中提到】 : Thanks!!!
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f*******e 发帖数: 354 | 24 amaxa buffer自己配好了 也就买个杯子的钱 反正是建系 能有活的就OK了
【在 h**********8 的大作中提到】 : 没有一个好转的 : amaxa巨贵,不同细胞还得买不同的盒子 : 我比较过,invitrogen 的neon是最好的
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g*********5 发帖数: 2533 | 25
【在 h**********8 的大作中提到】 : 没有一个好转的 : amaxa巨贵,不同细胞还得买不同的盒子 : 我比较过,invitrogen 的neon是最好的
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