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Biology版 - 再问个multiple color IF staining的问题
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话题: ab话题: signal话题: 647话题: dapi话题: staining
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z****u
发帖数: 1007
1
在尝试Invitrogen Alexa 430, 405的secondary Ab. 可是咋个都看不到想要的signal.
primary Ab很好,没问题。无论是拿我们的荧光显微镜还是confocal. 有谁有过这俩
二抗的使用经验没?
B******o
发帖数: 496
2
有positive control不?是不是用正确的excitation和emission波长?
我只用过Alex 488, 568和647的。都很好(包括抗mouse,抗goat和抗rabbit)

signal.

【在 z****u 的大作中提到】
: 在尝试Invitrogen Alexa 430, 405的secondary Ab. 可是咋个都看不到想要的signal.
: primary Ab很好,没问题。无论是拿我们的荧光显微镜还是confocal. 有谁有过这俩
: 二抗的使用经验没?

z****u
发帖数: 1007
3
同样的一抗拿488,568都没有问题。
就是对excitation wavelength很迷惑。
我们的fluorescent microscope上面3个filter 对应DAPI, FITC 和 TRITC。能否用
DAPI filter用于405,423? 照理该看到蓝色或者蓝绿色的signal啊。
另外对于647,是不是肉眼无法直接看到?

【在 B******o 的大作中提到】
: 有positive control不?是不是用正确的excitation和emission波长?
: 我只用过Alex 488, 568和647的。都很好(包括抗mouse,抗goat和抗rabbit)
:
: signal.

c******g
发帖数: 49
4
DAPI filter一般是400LP,只有emission波长超过400才能通过,看看你的显微镜能不
能激发Alexa405.
647 人眼可见。
b******s
发帖数: 5365
5
647不是far red吗?人眼应该是看不到的

【在 c******g 的大作中提到】
: DAPI filter一般是400LP,只有emission波长超过400才能通过,看看你的显微镜能不
: 能激发Alexa405.
: 647 人眼可见。

z****u
发帖数: 1007
6
在尝试Invitrogen Alexa 430, 405的secondary Ab. 可是咋个都看不到想要的signal.
primary Ab很好,没问题。无论是拿我们的荧光显微镜还是confocal. 有谁有过这俩
二抗的使用经验没?
B******o
发帖数: 496
7
有positive control不?是不是用正确的excitation和emission波长?
我只用过Alex 488, 568和647的。都很好(包括抗mouse,抗goat和抗rabbit)

signal.

【在 z****u 的大作中提到】
: 在尝试Invitrogen Alexa 430, 405的secondary Ab. 可是咋个都看不到想要的signal.
: primary Ab很好,没问题。无论是拿我们的荧光显微镜还是confocal. 有谁有过这俩
: 二抗的使用经验没?

z****u
发帖数: 1007
8
同样的一抗拿488,568都没有问题。
就是对excitation wavelength很迷惑。
我们的fluorescent microscope上面3个filter 对应DAPI, FITC 和 TRITC。能否用
DAPI filter用于405,423? 照理该看到蓝色或者蓝绿色的signal啊。
另外对于647,是不是肉眼无法直接看到?

【在 B******o 的大作中提到】
: 有positive control不?是不是用正确的excitation和emission波长?
: 我只用过Alex 488, 568和647的。都很好(包括抗mouse,抗goat和抗rabbit)
:
: signal.

c******g
发帖数: 49
9
DAPI filter一般是400LP,只有emission波长超过400才能通过,看看你的显微镜能不
能激发Alexa405.
647 人眼可见。
b******s
发帖数: 5365
10
647不是far red吗?人眼应该是看不到的

【在 c******g 的大作中提到】
: DAPI filter一般是400LP,只有emission波长超过400才能通过,看看你的显微镜能不
: 能激发Alexa405.
: 647 人眼可见。

L*******e
发帖数: 2153
11
try jackson immunoresearch's dylight 2nd abs.
http://www.jacksonimmuno.com/home.asp
they are awesome!!!

signal.

【在 z****u 的大作中提到】
: 在尝试Invitrogen Alexa 430, 405的secondary Ab. 可是咋个都看不到想要的signal.
: primary Ab很好,没问题。无论是拿我们的荧光显微镜还是confocal. 有谁有过这俩
: 二抗的使用经验没?

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