C*******e
发帖数: 4348 | 1 SbsB structure and lattice reconstruction unveil Ca2+ triggered S-layer
assembly
Nature 2012 doi:10.1038/nature11155
里面提到的这个nanobody就是camelid single chain antibody （heavy chain)
这个方法最初发表于去年
Nanobody stabilization of G protein-coupled receptor conformational states
Current Opinion in Structural Biology
Volume 21, Issue 4, August 2011, Pages 567–572
他们的做法是把目标蛋白打到驼羊身上
从血液里分离淋巴细胞，然后提RNA，做RT，得到antibody mRNA的pool
然后克隆到phage display vector里面
做粗筛
筛出只跟非变性目标蛋白结合的heavy chain antibody
然后跟目标蛋白共表达，做结晶，解结构
我的问题主要有两个
1.single chain antibody为什么能够帮助膜蛋白结晶？
对于非常容易aggregate的蛋白（不一定膜蛋白）是不是也值得一试
2.如果用兔子或者老鼠之类的产生抗体然后得到heavy chain antibody的cDNA library
然后放到phage display vector里面可不可行？
驼羊要贵多了啊，而且要得到实验批准要比兔子老鼠难很多吧 |
c*********7
发帖数: 148 | 2 Nanobody主要是为了锚定 beta adrenoceptor active state吧。对crystal packing
有没有用就不知道了。
SbsB structure and lattice reconstruction unveil Ca2+ triggered S-layer
assembly
这文章我正要看。。。 |
d******1
发帖数: 709 | 3 关键是单链抗体，通常的双链抗体有问题，具体的忘了，有知道的人解释一下？没有驼
羊，找骆驼，或者鲨鱼也行。 |
d******1
发帖数: 709 | 4 其实就和加个lysozyme 一样。抗体容易结晶。
packing
【在 c*********7 的大作中提到】
: Nanobody主要是为了锚定 beta adrenoceptor active state吧。对crystal packing
: 有没有用就不知道了。
: SbsB structure and lattice reconstruction unveil Ca2+ triggered S-layer
: assembly
: 这文章我正要看。。。
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c*********7
发帖数: 148 | 5 nano body只有双链Fab的四分之一，应该是更specific一点，他们用的是heavy chain
，因为抗体对抗原主要是V heavy chain，加个light chain会有可能锚定不同state的
beta AR，至于为什么非要用驼羊就不知道了。
【在 d******1 的大作中提到】
: 关键是单链抗体，通常的双链抗体有问题，具体的忘了，有知道的人解释一下？没有驼
: 羊，找骆驼，或者鲨鱼也行。
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C*******e
发帖数: 4348 | 6 貌似是驼羊本身就会有光是heavy chain的antibody?
我想知道是不是可以用别的动物产生的antibody
只取heavy chain一段来表达
会不会有用
chain
【在 c*********7 的大作中提到】
: nano body只有双链Fab的四分之一，应该是更specific一点，他们用的是heavy chain
: ，因为抗体对抗原主要是V heavy chain，加个light chain会有可能锚定不同state的
: beta AR，至于为什么非要用驼羊就不知道了。
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C*******e
发帖数: 4348 | 7 原来是因为容易结晶啊～
【在 d******1 的大作中提到】
: 其实就和加个lysozyme 一样。抗体容易结晶。
:
: packing
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C*******e
发帖数: 4348 | 8 我就囫囵吞枣了一下
做得跟这个完全不相关
主要是里面的方法我比较感兴趣
packing
【在 c*********7 的大作中提到】
: Nanobody主要是为了锚定 beta adrenoceptor active state吧。对crystal packing
: 有没有用就不知道了。
: SbsB structure and lattice reconstruction unveil Ca2+ triggered S-layer
: assembly
: 这文章我正要看。。。
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c*********7
发帖数: 148 | 9 有木有用试了才知道？不过你一上来就要用antibody是不是工程略显浩大了点。。。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 貌似是驼羊本身就会有光是heavy chain的antibody?
: 我想知道是不是可以用别的动物产生的antibody
: 只取heavy chain一段来表达
: 会不会有用
:
: chain
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C*******e
发帖数: 4348 | 10 不是啊，我就是问问大家这个方法啊
这个方法本来就是一上来就是antibody啊
还是驼羊的
然后又是建库，又是phage display筛选，再共表达
工程就是很浩大啊
所以实在没有办法“有没有用都试一下先”。。。。。
【在 c*********7 的大作中提到】
: 有木有用试了才知道？不过你一上来就要用antibody是不是工程略显浩大了点。。。
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