w****l 发帖数: 535 | 1 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
厚度10um左右 |
w********r 发帖数: 1431 | 2 玻璃和刀片的位置要调好,
调好了切出来就是平直的,不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它,只能自己慢慢摸索 |
w*********n 发帖数: 439 | 3 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片,不会卷的,
【在 w****l 的大作中提到】 : 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue : 厚度10um左右
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w*********n 发帖数: 439 | 4 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片,不会卷的,
【在 w****l 的大作中提到】 : 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue : 厚度10um左右
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w****l 发帖数: 535 | 5 我用的是0度角,就是会翘起来
【在 w********r 的大作中提到】 : 玻璃和刀片的位置要调好, : 调好了切出来就是平直的,不会卷。 : 下刀的速度也要干脆利索。 : 无它,只能自己慢慢摸索
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w****l 发帖数: 535 | 6 就是载玻片粘的时候特别容易出摺,tissue和oct粘的速度不一致
还有就是tissue从oct里面脱出来,然后翘起来,特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】 : 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致 : 然后用热的玻璃片去粘组织片,不会卷的,
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D*a 发帖数: 6830 | 7 试试放液体里面,IHC or 染色完了再放玻璃里。这样IHC的效果还好。
具体液体不知 |
w****l 发帖数: 535 | 8 这种float染色,小的tissue都没问题,譬如spinal cord,brain不太好处理,太大了
容易破,上完substrate之后干的时候也容易出摺,染色倒是很深,而且sample太多,
float的工作量太大,时间也不好控制,还是粘在片子上容易,
我试过30um的下来放PBS里,然后在干片,倒是不出摺了,就是工作量太大,一次染色
一般做20多只老鼠,每个老鼠都取7-8个section,处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的 |
h******y 发帖数: 351 | 9 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接
冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF
A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好
记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子,
迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
entane的温度要控制好,用小块干冰测试一下(要求没有气泡出来)。
这种方法冻的组织,做全脑的cross section,saggital section,从7-40 um都做过,
效果很好。既能做免疫染色,也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中,让它的温度平衡到和样本一样的温度,这样即使片子有皱褶,你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C,用的时候取出来,在室温下放30-60分钟先,完全干燥后再开始
做实验,片子贴的很牢,不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】 : 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue : 厚度10um左右
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s******r 发帖数: 2876 | 10 有没有用RNAse later之类的溶液灌注老鼠的,
这样的话RNA会不会保存的好一点,in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子,
Isop
【在 h******y 的大作中提到】 : 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接 : 冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的 : 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是 : 预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。 : 我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF : A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop : entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以 : 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好 : 记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子, : 迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
|
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w****l 发帖数: 535 | 11 我用methylbutane其他的和你一样,我试过冷片子放上放tissue,弄好了是没褶,
有时候也弄不好,而且慢啊,室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好,就是有褶
PF
Isop
做好
子,
Isop
【在 h******y 的大作中提到】 : 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接 : 冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的 : 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是 : 预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。 : 我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF : A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop : entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以 : 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好 : 记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子, : 迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
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h******y 发帖数: 351 | 12 Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 w****l 的大作中提到】 : 我用methylbutane其他的和你一样,我试过冷片子放上放tissue,弄好了是没褶, : 有时候也弄不好,而且慢啊,室温的一下就贴上去了 : 我染色的结果也都很好,就是有褶 : : PF : Isop : 做好 : 子, : Isop
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w****l 发帖数: 535 | 13 土了,你这么一说我好像记得那个瓶上也有个iso什么的
【在 h******y 的大作中提到】 : Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
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s******r 发帖数: 2876 | 14 这儿有个网址,希望能有参考,
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】 : 我用methylbutane其他的和你一样,我试过冷片子放上放tissue,弄好了是没褶, : 有时候也弄不好,而且慢啊,室温的一下就贴上去了 : 我染色的结果也都很好,就是有褶 : : PF : Isop : 做好 : 子, : Isop
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h******y 发帖数: 351 | 15 忘了说了,用小刷子把片子展平以后,把你的手指在片子后面放一小会,让片子稍稍化
一点,就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】 : 我用methylbutane其他的和你一样,我试过冷片子放上放tissue,弄好了是没褶, : 有时候也弄不好,而且慢啊,室温的一下就贴上去了 : 我染色的结果也都很好,就是有褶 : : PF : Isop : 做好 : 子, : Isop
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w****l 发帖数: 535 | 16 下回试一下这个trick
【在 h******y 的大作中提到】 : 忘了说了,用小刷子把片子展平以后,把你的手指在片子后面放一小会,让片子稍稍化 : 一点,就粘上了。而且保证没有褶。
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w****l 发帖数: 535 | 17 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 h******y 的大作中提到】 : 忘了说了,用小刷子把片子展平以后,把你的手指在片子后面放一小会,让片子稍稍化 : 一点,就粘上了。而且保证没有褶。
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w****l 发帖数: 535 | 18 还有cryostat上有两个温度
一个是OC,一个CT,我现在一个是-20,一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】 : 忘了说了,用小刷子把片子展平以后,把你的手指在片子后面放一小会,让片子稍稍化 : 一点,就粘上了。而且保证没有褶。
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w****l 发帖数: 535 | 19 我粘片子手法和这个视频里一样的,但还是会出褶
【在 s******r 的大作中提到】 : 这儿有个网址,希望能有参考, : http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm : 也有视频 : www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
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h******y 发帖数: 351 | 20 贴好一个再放下一张。
【在 w****l 的大作中提到】 : 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
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h******y 发帖数: 351 | 21 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 w****l 的大作中提到】 : 还有cryostat上有两个温度 : 一个是OC,一个CT,我现在一个是-20,一个-25 : 那个是你说的温度
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w****l 发帖数: 535 | 22 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 h******y 的大作中提到】 : 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
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w****l 发帖数: 535 | 23 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
为了切方便,我又把它冻到oct了,在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】 : 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
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h******y 发帖数: 351 | 24 没错
【在 w****l 的大作中提到】 : 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
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h******y 发帖数: 351 | 25 我没切过人的组织。
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温,如果你把冻好的组织放在
OCT中,样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程,这个过程中样本中的水
重新结晶,对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】 : 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究 : 为了切方便,我又把它冻到oct了,在tissue没化的时候硬的冻得
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w****l 发帖数: 535 | 26 那像这种情况怎么弄,没有oct的花不太好切啊
【在 h******y 的大作中提到】 : 我没切过人的组织。 : 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温,如果你把冻好的组织放在 : OCT中,样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程,这个过程中样本中的水 : 重新结晶,对组织形态破坏很大。
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h******y 发帖数: 351 | 27 可以用一点OCT把你的样本站在那个Stage上。
【在 w****l 的大作中提到】 : 那像这种情况怎么弄,没有oct的花不太好切啊
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D*a 发帖数: 6830 | 28 我们是泡了蔗糖还要泡加了gelatine的蔗糖,然后包埋是用gelatine和蔗糖包埋,再冻
。有了gelatine之后,-20就软了,-25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子,
Isop
【在 h******y 的大作中提到】 : 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接 : 冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的 : 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是 : 预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。 : 我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF : A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop : entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以 : 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好 : 记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子, : 迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
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l**********1 发帖数: 5204 | 29 Mark.
PF
Isop
做好
子,
Isop
【在 h******y 的大作中提到】 : 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接 : 冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的 : 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是 : 预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。 : 我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF : A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop : entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以 : 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好 : 记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子, : 迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
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w****l 发帖数: 535 | 30 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
厚度10um左右 |
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w********r 发帖数: 1431 | 31 玻璃和刀片的位置要调好,
调好了切出来就是平直的,不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它,只能自己慢慢摸索 |
w*********n 发帖数: 439 | 32 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片,不会卷的,
【在 w****l 的大作中提到】 : 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue : 厚度10um左右
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w*********n 发帖数: 439 | 33 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片,不会卷的,
【在 w****l 的大作中提到】 : 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue : 厚度10um左右
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w****l 发帖数: 535 | 34 我用的是0度角,就是会翘起来
【在 w********r 的大作中提到】 : 玻璃和刀片的位置要调好, : 调好了切出来就是平直的,不会卷。 : 下刀的速度也要干脆利索。 : 无它,只能自己慢慢摸索
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w****l 发帖数: 535 | 35 就是载玻片粘的时候特别容易出摺,tissue和oct粘的速度不一致
还有就是tissue从oct里面脱出来,然后翘起来,特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】 : 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致 : 然后用热的玻璃片去粘组织片,不会卷的,
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D*a 发帖数: 6830 | 36 试试放液体里面,IHC or 染色完了再放玻璃里。这样IHC的效果还好。
具体液体不知 |
w****l 发帖数: 535 | 37 这种float染色,小的tissue都没问题,譬如spinal cord,brain不太好处理,太大了
容易破,上完substrate之后干的时候也容易出摺,染色倒是很深,而且sample太多,
float的工作量太大,时间也不好控制,还是粘在片子上容易,
我试过30um的下来放PBS里,然后在干片,倒是不出摺了,就是工作量太大,一次染色
一般做20多只老鼠,每个老鼠都取7-8个section,处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的 |
h******y 发帖数: 351 | 38 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接
冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF
A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好
记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子,
迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
entane的温度要控制好,用小块干冰测试一下(要求没有气泡出来)。
这种方法冻的组织,做全脑的cross section,saggital section,从7-40 um都做过,
效果很好。既能做免疫染色,也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中,让它的温度平衡到和样本一样的温度,这样即使片子有皱褶,你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C,用的时候取出来,在室温下放30-60分钟先,完全干燥后再开始
做实验,片子贴的很牢,不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】 : 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue : 厚度10um左右
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s******r 发帖数: 2876 | 39 有没有用RNAse later之类的溶液灌注老鼠的,
这样的话RNA会不会保存的好一点,in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子,
Isop
【在 h******y 的大作中提到】 : 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接 : 冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的 : 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是 : 预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。 : 我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF : A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop : entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以 : 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好 : 记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子, : 迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
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w****l 发帖数: 535 | 40 我用methylbutane其他的和你一样,我试过冷片子放上放tissue,弄好了是没褶,
有时候也弄不好,而且慢啊,室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好,就是有褶
PF
Isop
做好
子,
Isop
【在 h******y 的大作中提到】 : 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接 : 冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的 : 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是 : 预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。 : 我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF : A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop : entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以 : 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好 : 记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子, : 迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
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h******y 发帖数: 351 | 41 Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 w****l 的大作中提到】 : 我用methylbutane其他的和你一样,我试过冷片子放上放tissue,弄好了是没褶, : 有时候也弄不好,而且慢啊,室温的一下就贴上去了 : 我染色的结果也都很好,就是有褶 : : PF : Isop : 做好 : 子, : Isop
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w****l 发帖数: 535 | 42 土了,你这么一说我好像记得那个瓶上也有个iso什么的
【在 h******y 的大作中提到】 : Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
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s******r 发帖数: 2876 | 43 这儿有个网址,希望能有参考,
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】 : 我用methylbutane其他的和你一样,我试过冷片子放上放tissue,弄好了是没褶, : 有时候也弄不好,而且慢啊,室温的一下就贴上去了 : 我染色的结果也都很好,就是有褶 : : PF : Isop : 做好 : 子, : Isop
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h******y 发帖数: 351 | 44 忘了说了,用小刷子把片子展平以后,把你的手指在片子后面放一小会,让片子稍稍化
一点,就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】 : 我用methylbutane其他的和你一样,我试过冷片子放上放tissue,弄好了是没褶, : 有时候也弄不好,而且慢啊,室温的一下就贴上去了 : 我染色的结果也都很好,就是有褶 : : PF : Isop : 做好 : 子, : Isop
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w****l 发帖数: 535 | 45 下回试一下这个trick
【在 h******y 的大作中提到】 : 忘了说了,用小刷子把片子展平以后,把你的手指在片子后面放一小会,让片子稍稍化 : 一点,就粘上了。而且保证没有褶。
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w****l 发帖数: 535 | 46 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 h******y 的大作中提到】 : 忘了说了,用小刷子把片子展平以后,把你的手指在片子后面放一小会,让片子稍稍化 : 一点,就粘上了。而且保证没有褶。
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w****l 发帖数: 535 | 47 还有cryostat上有两个温度
一个是OC,一个CT,我现在一个是-20,一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】 : 忘了说了,用小刷子把片子展平以后,把你的手指在片子后面放一小会,让片子稍稍化 : 一点,就粘上了。而且保证没有褶。
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w****l 发帖数: 535 | 48 我粘片子手法和这个视频里一样的,但还是会出褶
【在 s******r 的大作中提到】 : 这儿有个网址,希望能有参考, : http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm : 也有视频 : www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
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h******y 发帖数: 351 | 49 贴好一个再放下一张。
【在 w****l 的大作中提到】 : 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
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h******y 发帖数: 351 | 50 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 w****l 的大作中提到】 : 还有cryostat上有两个温度 : 一个是OC,一个CT,我现在一个是-20,一个-25 : 那个是你说的温度
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w****l 发帖数: 535 | 51 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 h******y 的大作中提到】 : 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
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w****l 发帖数: 535 | 52 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
为了切方便,我又把它冻到oct了,在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】 : 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
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h******y 发帖数: 351 | 53 没错
【在 w****l 的大作中提到】 : 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
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h******y 发帖数: 351 | 54 我没切过人的组织。
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温,如果你把冻好的组织放在
OCT中,样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程,这个过程中样本中的水
重新结晶,对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】 : 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究 : 为了切方便,我又把它冻到oct了,在tissue没化的时候硬的冻得
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w****l 发帖数: 535 | 55 那像这种情况怎么弄,没有oct的花不太好切啊
【在 h******y 的大作中提到】 : 我没切过人的组织。 : 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温,如果你把冻好的组织放在 : OCT中,样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程,这个过程中样本中的水 : 重新结晶,对组织形态破坏很大。
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h******y 发帖数: 351 | 56 可以用一点OCT把你的样本站在那个Stage上。
【在 w****l 的大作中提到】 : 那像这种情况怎么弄,没有oct的花不太好切啊
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D*a 发帖数: 6830 | 57 我们是泡了蔗糖还要泡加了gelatine的蔗糖,然后包埋是用gelatine和蔗糖包埋,再冻
。有了gelatine之后,-20就软了,-25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子,
Isop
【在 h******y 的大作中提到】 : 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接 : 冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的 : 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是 : 预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。 : 我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF : A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop : entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以 : 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好 : 记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子, : 迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
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l**********1 发帖数: 5204 | 58 Mark.
PF
Isop
做好
子,
Isop
【在 h******y 的大作中提到】 : 冰冻组织切片的时候,对环境温度有一定要求。先问你一个问题,你的是新鲜组织直接 : 冷冻,还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本,最适宜的 : 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织,切片最佳温度在-20C到-25C。如果是 : 预先固定并经过蔗糖的标本,切片温度稍高一点,-18C左后最佳。 : 我常用的方法是给老鼠心脏灌注,先用50mL PBS,再用50mL 4%PFA,再开颅取脑,4%PF : A过夜,然后30%蔗糖过夜(等脑子全部沉到底部)。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop : entane,放在干冰上,等温度稳定(丢一小块干冰到isopentane里,没有气泡出来)以 : 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出,擦干,放在模子里,灌满OCT,摆正位置,做好 : 记号(非常重要,因为OCT冻住以后你就看不见组织了)。用镊子拿着装着组织的模子, : 迅速放到冷却好的Isopentane中,两分钟后取出来就行了。如果有多个样本,注意Isop
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