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发帖数: 1145 | 1 我现在在做些ex vivo的实验，就是把mouse的主动脉分离出来后，放在培养基里养三天
，同时加药。三天后收集样品提rna,然后profiling下各基因的表达，看是否和in
vitro的结果一致。
如果分离主动脉后立刻提rna,结果一直很好。但现在ex vivo养了几天后，碰到了些问
题。
1,培养几天后，能提出来的rna量急剧减少，感觉养几天后组织不是很健康的原因。少
归少，但还是够做rt之类的后续。
2,我通常用18S和gapdh做realtime pcr的内参。但郁闷的是，在加药处理的样品里，这
两个基因的表达也呼呼的往上升，甚至比要检测的其他基因升得都要高。以至于
normalize后，根本看不到变化，甚至是相反的变化。ps，在做rt的时候，每个样品我
都加了相同量的rna，按经验来说，内参应该非常接近，曲线几乎都重合在一起才对。
现求问怎么破？
我感觉技术上没什么问题，最简单的就是换一个比较stable的内参（尤其是心血管系统
内的）。
求有经验的推荐！一经验证work的话，双黄包奉上！ |
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