g*********5
发帖数: 2533 | 1 除了fraction，immunofluorescence外，还有其他的法子吗？ |
a***e
发帖数: 1010 | 2 it is theoretically impossible to demonstrate something is NOT doing
something. |
l**********1
发帖数: 5204 | 3 Firstly stable isotope 15N label of that protein then inert cell,
after 72 hrs
add synthetic macromolecules to mimic the crowded cytoplasm
next extract nuclei protein
the residue is cytoplasm protein
next do mass spectrometry individually
References:
1,
//www.isotope.com/uploads/file/prot_brochure_lysineupdatelores.pdf
2,
PLoS One. 4:e7560. |(2009)
Isolation of cell nuclei using inert macromolecules to mimic the crowded
cytoplasm.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19851505
【在 g*********5 的大作中提到】
: 除了fraction，immunofluorescence外，还有其他的法子吗？
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y***y
发帖数: 709 | 4 构建一个目标蛋白的GFP融合表达载体
转细胞，只有细胞核区域有荧光说明是核蛋白
【在 g*********5 的大作中提到】
: 除了fraction，immunofluorescence外，还有其他的法子吗？
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s******s
发帖数: 13035 | 5 GFP不能这么用的。这种实验首先要先用immunofluorescence验证你
的GFP融合蛋白确实定位正确，这个不能做直接证据的
【在 y***y 的大作中提到】
: 构建一个目标蛋白的GFP融合表达载体
: 转细胞，只有细胞核区域有荧光说明是核蛋白
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