k******y
发帖数: 236 | 1 在贴壁细胞中siRNA了某基因，之后就有大量的碎片漂浮在medium里，镜下看就是小圆
泡，diameter < 10um，而细胞即使trypsin消化下来之后也并不是规则的圆形，这些碎
片并不能uptake trypan blue，计数活细胞(trypan blue-, diameter > 10um) 的数量
有明显减少, 但以trypan blue+ 的％算，并不比对照组减少很多，大概从95％减少到
90％
用FITC-Annexin V和PI double staining，做flow没有看到明显Annexin V+细胞群，
AnnexinV+ PI+细胞群会增加但也不会增加太多(本身％也小于10％)
用50uM Z-VAD-FMK caspase inhibitor 与siRNA共同处理细胞, 这些碎片就不会产生，
计数活细胞的数量也不会减少, 和对照细胞没有差别
请问这是否说明细胞有死亡？能否看出是何种死亡方式？谢谢大家! | l***y
发帖数: 4671 | 2 能想到的最可能的解释就是 selective necrosis。
建议做个 mtt 看看。
trypan blue 和 facs 都 assume canonical apoptosis，可能不适用于你的 case。
【在 k******y 的大作中提到】
: 在贴壁细胞中siRNA了某基因，之后就有大量的碎片漂浮在medium里，镜下看就是小圆
: 泡，diameter < 10um，而细胞即使trypsin消化下来之后也并不是规则的圆形，这些碎
: 片并不能uptake trypan blue，计数活细胞(trypan blue-, diameter > 10um) 的数量
: 有明显减少, 但以trypan blue+ 的％算，并不比对照组减少很多，大概从95％减少到
: 90％
: 用FITC-Annexin V和PI double staining，做flow没有看到明显Annexin V+细胞群，
: AnnexinV+ PI+细胞群会增加但也不会增加太多(本身％也小于10％)
: 用50uM Z-VAD-FMK caspase inhibitor 与siRNA共同处理细胞, 这些碎片就不会产生，
: 计数活细胞的数量也不会减少, 和对照细胞没有差别
: 请问这是否说明细胞有死亡？能否看出是何种死亡方式？谢谢大家!
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