g*********5 发帖数: 2533 | |
l******a 发帖数: 3339 | 2 建议你先读读stem cell的basic,如果你们lab没有经验,不建议handle stem cells。
【在 g*********5 的大作中提到】 : 能向293一样增殖吗?
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z*t 发帖数: 863 | 3 不能养。。。
【在 g*********5 的大作中提到】 : 能向293一样增殖吗?
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g*********5 发帖数: 2533 | 4 thanks, we don't have stem cell experience. |
g*********5 发帖数: 2533 | 5 看到公司有卖的,100,000 各细胞。
reviewer要求我做原代细胞,要求在原代细胞中敲出一个基因。
准备买些shRNA PARTICLE直接作。感染几天就行。
不过,100,000个细胞也太少了. 细胞培养的经验不少,但是原代的就两眼一摸黑,啥
子也不知道 |
z*t 发帖数: 863 | 6 你要是看phenotype的话可以把细胞培养在semi-solid 的methylcelluose medium里,
CD34+ progenitors会在mixed的cytokine作用下分化成不同的终末分化细胞,长成不同
的colony.要是你的gene影响self-renewal或者differentiation可以在CFU上看出差别
来。 link在这里
http://www.stemcell.com/en/Products/Cell-type/Hematopoietic-ste
要是KD后拿DNA,RNA确实蛮痛苦的...跑几个RT-PCR没问题,要是做NGS就惨了
【在 g*********5 的大作中提到】 : 看到公司有卖的,100,000 各细胞。 : reviewer要求我做原代细胞,要求在原代细胞中敲出一个基因。 : 准备买些shRNA PARTICLE直接作。感染几天就行。 : 不过,100,000个细胞也太少了. 细胞培养的经验不少,但是原代的就两眼一摸黑,啥 : 子也不知道
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g*********5 发帖数: 2533 | 7 谢谢,如果做western呢?
不知道这些细胞增殖如何,看到公司说的可以增值到75-300倍
这些HSC能分裂多少代,还可以冻起来下次再用吗?
【在 z*t 的大作中提到】 : 你要是看phenotype的话可以把细胞培养在semi-solid 的methylcelluose medium里, : CD34+ progenitors会在mixed的cytokine作用下分化成不同的终末分化细胞,长成不同 : 的colony.要是你的gene影响self-renewal或者differentiation可以在CFU上看出差别 : 来。 link在这里 : http://www.stemcell.com/en/Products/Cell-type/Hematopoietic-ste : 要是KD后拿DNA,RNA确实蛮痛苦的...跑几个RT-PCR没问题,要是做NGS就惨了
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s*******d 发帖数: 370 | 8 CD34+主要从cord blood或bone marrow分离得到, cord blood增殖快,分化也快,也
就是说CD34阳性细胞会迅速转化成阴性细胞,用标准培养体系培养一周后可以从90%降
到10-20%。 Bone marrow 稍微慢一点,买这个细胞一般很贵,自己分离的话其实也不
难,但是没有经验自己摸索可能得费些时间。 |
z*t 发帖数: 863 | 9 HSC体外培养就分化了...冻起来是别想了...不过如楼上所说大概在一周之内还会有一
定数目的progenitor的,transduce之后sort cell不知道能拿多少细胞,我们lab有人
做过 1X105 HSC的western
【在 g*********5 的大作中提到】 : 谢谢,如果做western呢? : 不知道这些细胞增殖如何,看到公司说的可以增值到75-300倍 : 这些HSC能分裂多少代,还可以冻起来下次再用吗?
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l******a 发帖数: 3339 | 10 不是我打击你,我2楼之所以那么说是因为看你问的就知道你不是做细胞的,估计是材
料化学或者药化,那个stem cell很快就分化了,想看表型不容易。如果有人带着你或
者合作好一点,不然要suffer一阵子,而且很费钱。
【在 g*********5 的大作中提到】 : 能向293一样增殖吗?
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l*******i 发帖数: 153 | 11 确实,目前普通的培养体系不能支持CD34+细胞 self-renewal很长时间。我自己摸索优
化过培养体系,可以维持CD34+细胞两周左右的时间,然后纯度就会从刚分离的90%以上
降到80%左右。
【在 s*******d 的大作中提到】 : CD34+主要从cord blood或bone marrow分离得到, cord blood增殖快,分化也快,也 : 就是说CD34阳性细胞会迅速转化成阴性细胞,用标准培养体系培养一周后可以从90%降 : 到10-20%。 Bone marrow 稍微慢一点,买这个细胞一般很贵,自己分离的话其实也不 : 难,但是没有经验自己摸索可能得费些时间。
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