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Biology版 - 请教关于ER介导入核的转基因老鼠的对照设计问题
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话题: er话题: 入核话题: 诱导话题: gene话题: 小鼠
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Z******5
发帖数: 435
1
背景:我们前期发现gene A在肿瘤发生发展过程中会异常定位到细胞核中,但是具体入
核机制现在还没搞清楚。目前重点还在研究gene A入核后的功能及该功能的机制。
现在想做一个乳腺组织特异的gene A诱导入核的小鼠模型。初步设想是用ER融合gene A
, 通过4-OHT诱导入核,然后观察表型。
我们用的是ER的288-599AAs的,其中G525R做了突变,具体参考文献是 A modified
oestrogen receptor ligand-binding domain as an improved switch for the
regulation of heterologous proteins (http://nar.oxfordjournals.org/content/23/10/1686.short)
问题是:1.我们是否要单独做一个不包含gene A,该ER片段的对照小鼠? 虽然该文献
报到ER288-599(G525)是no TAF-2 transactivation activity, 但是毕竟ER是一个和
乳腺癌密切相关的分子,而且我们用了将近整个ER的一半的片段,这个ER片段诱导入核
后是否与乳腺癌表型相关,似乎也不太清楚。但是做这个对照,成本确实太高了。
2. 为了保证在非诱导情况下该基因不入核,我们还需要再改片段上加出核序列(
NES),
加几个NES比较好? 少了怕控制出核效果不好;多了又怕影响诱导入核的效果。
T****u
发帖数: 424
2
太复杂了,不太好控制。
首先你提到的改造如NES什么的,都要cell line先test。到小鼠上就更复杂了。
我的建议就是用TO/A inducible 小鼠,A做成constitutive入核的。
cross with rtTA or tissue specific rtTA.
or 直接KI consitutitive 入核的A mutant,看小鼠表型。

A

【在 Z******5 的大作中提到】
: 背景:我们前期发现gene A在肿瘤发生发展过程中会异常定位到细胞核中,但是具体入
: 核机制现在还没搞清楚。目前重点还在研究gene A入核后的功能及该功能的机制。
: 现在想做一个乳腺组织特异的gene A诱导入核的小鼠模型。初步设想是用ER融合gene A
: , 通过4-OHT诱导入核,然后观察表型。
: 我们用的是ER的288-599AAs的,其中G525R做了突变,具体参考文献是 A modified
: oestrogen receptor ligand-binding domain as an improved switch for the
: regulation of heterologous proteins (http://nar.oxfordjournals.org/content/23/10/1686.short)
: 问题是:1.我们是否要单独做一个不包含gene A,该ER片段的对照小鼠? 虽然该文献
: 报到ER288-599(G525)是no TAF-2 transactivation activity, 但是毕竟ER是一个和
: 乳腺癌密切相关的分子,而且我们用了将近整个ER的一半的片段,这个ER片段诱导入核

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