r******k
发帖数: 446 | 1 大神们
1。 你们co ip precleaning多长时间？ 我们实验室要3hr 在4度 rotate 是不是太长
了？
2. 加了IP lysis buffer 以后你们会用sonicator超声一下吗？ 还是就是直接放冰上
放个30-40min？
多谢呀！！！！ |
h*j
发帖数: 77 | 2 1。 你们co ip precleaning多长时间？ 我们实验室要3hr 在4度 rotate 是不是太长
了？
1小时足够了。
2. 加了IP lysis buffer 以后你们会用sonicator超声一下吗？ 还是就是直接放冰上
放个30-40min？
两种方法都可。如果真是associated, sonication不会有影响。直接放冰上放个30-
40min常常裂解不完全。我用1ML的胰岛素注射针抽吸10次也可。 |
r******k
发帖数: 446 | 3 非常感谢呀！ 但是sonication是不是需要用比较弱的功率比较好？
【在 h*j 的大作中提到】
: 1。 你们co ip precleaning多长时间？ 我们实验室要3hr 在4度 rotate 是不是太长
: 了？
: 1小时足够了。
: 2. 加了IP lysis buffer 以后你们会用sonicator超声一下吗？ 还是就是直接放冰上
: 放个30-40min？
: 两种方法都可。如果真是associated, sonication不会有影响。直接放冰上放个30-
: 40min常常裂解不完全。我用1ML的胰岛素注射针抽吸10次也可。
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h*j
发帖数: 77 | 4 我还真没看我们的输出功率， 一般打碎细胞的功率就可以了。 |
r******k
发帖数: 446 | 5 好的 非常感谢哈！ 以后我就用针头儿或者sonicator了。
【在 h*j 的大作中提到】
: 我还真没看我们的输出功率， 一般打碎细胞的功率就可以了。
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g*********5
发帖数: 2533 | 6 would you pls tell me the cat# of 1ML的胰岛素注射针? |
h*j
发帖数: 77 | |
h*j
发帖数: 77 | 8 needles BD 27G1/2
syringe 1ml |
e****s
发帖数: 1125 | 9 功率，看你样品的体积。
一般1ml 以下，10%左右，每次sonication时间不要太长。
Co-IP的样品处理和你的目标蛋白的性质关系很大。
【在 r******k 的大作中提到】
: 非常感谢呀！ 但是sonication是不是需要用比较弱的功率比较好？
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g*********5
发帖数: 2533 | 10 thanks
【在 h*j 的大作中提到】
: needles BD 27G1/2
: syringe 1ml
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x****s
发帖数: 29 | 11 用RIPA buffer把细胞重悬后rotate 20-30分，然后离心。sonication似乎增加核蛋白
裂解量时用。 |
