m*********r
发帖数: 49 | 1 我正在做2个蛋白的纯化（分别纯化），一个约270kda，另一个约90kda。以前一直
在用GE prepacked Superdex 200（bed volumn=2.4ml, loading volumn=50ul) 的一个
小柱子做微量的size exclusion纯化然后用来做生化试验。
最近对所需蛋白量要求变大了，所以正在找合适的大柱子能让我一次的loading
volume到~5ml. 碰巧前几天旧的UV detector的灯泡也坏了，问别人说换新的要700多刀
，还不能保证修好。现在我盘算着能不能干脆整套新的。
我问了下周围的同事，有人给我推荐GE的AKTA pure系统。我看了下觉得功能太多
太花哨（估计也很贵），对我这种只需要单一步骤蛋白纯化的人好像太浪费了。所以上
来问问有没有用过或者熟悉这方面工作的朋友，给我推荐下经济又简单实用的一套
chromotography系统。
顺便问下，如果我买单个组件自己DIY一套能省些钱么？比如pump, column,
detector, computer+software找不同公司买能兼容的。不好意思实验室不怎么有钱，
这算大投资，所以想问清楚再买。
谢谢大家给点建议。 |
f******n
发帖数: 1 | 2 gel filtration(GF)柱子最常用的就是GE的了. 一定要5ml的话必须是Hiload column.
16/60 的最大能上5ml.但是看你用的应该是Superdex 200 GL 5/150. 这个柱子分辨率
比hiload高.你的样品未必在Hiload上也能分开. GL的柱子有 10/300的,24ml bed
volume.能上样0.5ml. 如果溶解度不是问题,浓缩10倍上这个柱子好了. 另外,你真是就
只过一个GF柱子没有其他比如affinity column? 蛮奇怪的.
GF的柱子都是要HPLC级别的pump才能带得动的. 这样的系统不可能便宜的. 要省钱就放
弃那些自动功能,诸如多个inlet,outlet还有多柱切换什么的.AKTA的purifier可能便宜
一点.
DIY就算了吧.这些公司的系统设计都是不考虑兼容其他公司部件的.自己组合太折腾了.
【在 m*********r 的大作中提到】
: 我正在做2个蛋白的纯化（分别纯化），一个约270kda，另一个约90kda。以前一直
: 在用GE prepacked Superdex 200（bed volumn=2.4ml, loading volumn=50ul) 的一个
: 小柱子做微量的size exclusion纯化然后用来做生化试验。
: 最近对所需蛋白量要求变大了，所以正在找合适的大柱子能让我一次的loading
: volume到~5ml. 碰巧前几天旧的UV detector的灯泡也坏了，问别人说换新的要700多刀
: ，还不能保证修好。现在我盘算着能不能干脆整套新的。
: 我问了下周围的同事，有人给我推荐GE的AKTA pure系统。我看了下觉得功能太多
: 太花哨（估计也很贵），对我这种只需要单一步骤蛋白纯化的人好像太浪费了。所以上
: 来问问有没有用过或者熟悉这方面工作的朋友，给我推荐下经济又简单实用的一套
: chromotography系统。
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m*********r
发帖数: 49 | 3
.
了.
谢谢这么详细的回复。这个柱子之前还有个his tag affinity purification的我忘了
提了。我quote了下AKTA pure要35000刀，汗... 我再去和系主任商量下，这次是系里
出钱。
【在 f******n 的大作中提到】
: gel filtration(GF)柱子最常用的就是GE的了. 一定要5ml的话必须是Hiload column.
: 16/60 的最大能上5ml.但是看你用的应该是Superdex 200 GL 5/150. 这个柱子分辨率
: 比hiload高.你的样品未必在Hiload上也能分开. GL的柱子有 10/300的,24ml bed
: volume.能上样0.5ml. 如果溶解度不是问题,浓缩10倍上这个柱子好了. 另外,你真是就
: 只过一个GF柱子没有其他比如affinity column? 蛮奇怪的.
: GF的柱子都是要HPLC级别的pump才能带得动的. 这样的系统不可能便宜的. 要省钱就放
: 弃那些自动功能,诸如多个inlet,outlet还有多柱切换什么的.AKTA的purifier可能便宜
: 一点.
: DIY就算了吧.这些公司的系统设计都是不考虑兼容其他公司部件的.自己组合太折腾了.
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m*b
发帖数: 1421 | 4 用akta的prime更加便宜
不过手工按键操作有点琐碎 |
e****s
发帖数: 1125 | 5 你要是对液相熟悉的话，可以自己在ebay上攒套旧的。
我刚花$800-900在ebay整了套简单的液相系统，配了个蠕动泵。能手动设定程序，能自
动收样。 |
s*********y
发帖数: 292 | 6 高端人士啊……
【在 e****s 的大作中提到】
: 你要是对液相熟悉的话，可以自己在ebay上攒套旧的。
: 我刚花$800-900在ebay整了套简单的液相系统，配了个蠕动泵。能手动设定程序，能自
: 动收样。
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m*********r
发帖数: 49 | 7
赞，看来技术好真能省不少钱
【在 e****s 的大作中提到】
: 你要是对液相熟悉的话，可以自己在ebay上攒套旧的。
: 我刚花$800-900在ebay整了套简单的液相系统，配了个蠕动泵。能手动设定程序，能自
: 动收样。
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