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Biology版 - Cell signaling的抗体很难work啊
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关于 节省 primary antibodyLicor Odessey是不是灵敏度差一点?
SOS! immunoprecipitation的negative control?help needed - antibody recommendation
ECL plus显影的western膜的strip buffer 成分求助问一个抗体储存的问题哈
western战斗的个人心得兼谢各位指点Santa Cruz的抗体好用吗?
说licor背景强是一种误解各位大神 incubate 磷酸化的抗体一定要用BSA吗?
生物学男的一个梦(转自开心) (转载)如何快速鉴别一篇文章造假与否?
相关话题的讨论汇总
话题: 抗体话题: work话题: cell话题: tbst话题: signaling
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1 (共1页)
M*******C
发帖数: 183
1
不知道在大家手上work的怎么样?买过好几种抗体。
在我手里,trouble很多啊,要么一堆杂带,没有特异带;要么背景很脏很黑,也看不
到特异带;要么带是白色的,并且结果也不是想要的。而类似的问题,我handle其他公
司的,失败率没这么高。测同一个蛋白,abcam的很好用,clean,结果正确。cell sig
的乱七八糟。trouble呢,公司都宣称在他们手里好用。
他们的western protocol是这样的,很不一般,大家觉得合理吗
Block: 5% Milk TBST (他们说不能用BSA)
一抗: 5% BSA TBST 稀释
二抗: 5% Milk TBST
平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block, 一抗直接在TBST. 二抗从来只
是TBST. work的抗体总是work了。
而cell sig 的, 有的抗体,即使完全按照他们的说法,甚至他们寄来 positive ctrl
, 也不work, 而他们的positive ctrl, 我用 abcam的抗体轻易检测出。 abcam 的
问题是现在卖的太贵。而cell sig的花了钱不work很不爽。
还有,每次troubleshooting他们几乎都是要颠覆别人所有的东西,我们用PVDF,他们说
要用nitrocellulose; 我们用AP二抗,他们说要用 HRP;我们用ECF,他们说用ECL. 而
事实上我们多年一直用PVDF AP ECF , 无数抗体都是work的。 糟糕的是, 即使你改
用 HRP,ECL,并不解决问题。
他们的抗体完全不像我曾经印象中的那么权威。 他们的的技术服务总是当别人不会做
western的样子,并且要颠覆别人work多年的方法,全部照他们的。浪费很多时间
trouble shooting。 而santa cruz我们一说不work,经常二话不说寄另外一个来。
e****s
发帖数: 1125
2
我最近也有两个从Cell signaling抗体不好.
我一直蛮喜欢Cell signaling抗体的,总体非常Reliable.
不知道怎么,最近买了两个,一个Phospho抗体对Phosphorylated over un-
phosphorylated sample的选择性几乎没有。另一个,就是没有检测到我的蛋白。

sig

【在 M*******C 的大作中提到】
: 不知道在大家手上work的怎么样?买过好几种抗体。
: 在我手里,trouble很多啊,要么一堆杂带,没有特异带;要么背景很脏很黑,也看不
: 到特异带;要么带是白色的,并且结果也不是想要的。而类似的问题,我handle其他公
: 司的,失败率没这么高。测同一个蛋白,abcam的很好用,clean,结果正确。cell sig
: 的乱七八糟。trouble呢,公司都宣称在他们手里好用。
: 他们的western protocol是这样的,很不一般,大家觉得合理吗
: Block: 5% Milk TBST (他们说不能用BSA)
: 一抗: 5% BSA TBST 稀释
: 二抗: 5% Milk TBST
: 平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block, 一抗直接在TBST. 二抗从来只

M*******C
发帖数: 183
3
我这几年用他们的磷酸化抗体,有时work,有时不work,浪费了很多时间

【在 e****s 的大作中提到】
: 我最近也有两个从Cell signaling抗体不好.
: 我一直蛮喜欢Cell signaling抗体的,总体非常Reliable.
: 不知道怎么,最近买了两个,一个Phospho抗体对Phosphorylated over un-
: phosphorylated sample的选择性几乎没有。另一个,就是没有检测到我的蛋白。
:
: sig

M*******C
发帖数: 183
4
#9520 P-smad3, 这几年买过好多次,偶尔work,多数时候不work。
对了,他们的技术服务,总是叫你回答各种细节问题,完全无视别人用别的公司抗体可
以做出来,完全无视别人长期做各种抗体的western。
连cell lysate等方法。。。, 已经告诉他们,同样的sample,用abcam做出来了,他
们不管,还叫你sonication lysate之类。。

【在 e****s 的大作中提到】
: 我最近也有两个从Cell signaling抗体不好.
: 我一直蛮喜欢Cell signaling抗体的,总体非常Reliable.
: 不知道怎么,最近买了两个,一个Phospho抗体对Phosphorylated over un-
: phosphorylated sample的选择性几乎没有。另一个,就是没有检测到我的蛋白。
:
: sig

s***o
发帖数: 326
5
我用的感觉也不好,买了一个抗体,非特异性条带紧挨着目的条带,然后我又订了他们
该蛋白另外一个货号的抗体,结果给的是分子量差不多大的非特异条带。

sig

【在 M*******C 的大作中提到】
: 不知道在大家手上work的怎么样?买过好几种抗体。
: 在我手里,trouble很多啊,要么一堆杂带,没有特异带;要么背景很脏很黑,也看不
: 到特异带;要么带是白色的,并且结果也不是想要的。而类似的问题,我handle其他公
: 司的,失败率没这么高。测同一个蛋白,abcam的很好用,clean,结果正确。cell sig
: 的乱七八糟。trouble呢,公司都宣称在他们手里好用。
: 他们的western protocol是这样的,很不一般,大家觉得合理吗
: Block: 5% Milk TBST (他们说不能用BSA)
: 一抗: 5% BSA TBST 稀释
: 二抗: 5% Milk TBST
: 平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block, 一抗直接在TBST. 二抗从来只

s******y
发帖数: 28562
6
我比较喜欢Santa Cruz, 虽然他们的产品质量很差,但是你只要吱一声说某某批产品不
好使,他们立刻会光速的给你送另外一批过来。根本就不会这么折腾你。
Cell Signaling 以及Sigma 都有这个坏毛病,就是你如果说东西不好用,他们不折磨
你个一两个月,是不会给你退换的。有一次我买了一个Sigma 的试剂,不好使就和他们
抱怨。然后他们源源不断的让我送各种证据,各种照片,各种Western blot, 我忍了两
个多星期,在第四次和他们通话的时候他们又要我做更多的对照试验,我终于忍不住就
失控了,骂他们说,这个实验我做了十几年了,试剂到底好不好使我是知道的,我买了
你们公司那么多产品,你看光是上个月我就买了3,4千的东西,我如果是想骗你们的钱
的话用得着等这么久么?骂了一通之后我说,你再不给我换的话我要和你们上司说。于
是他们就软了。

【在 M*******C 的大作中提到】
: #9520 P-smad3, 这几年买过好多次,偶尔work,多数时候不work。
: 对了,他们的技术服务,总是叫你回答各种细节问题,完全无视别人用别的公司抗体可
: 以做出来,完全无视别人长期做各种抗体的western。
: 连cell lysate等方法。。。, 已经告诉他们,同样的sample,用abcam做出来了,他
: 们不管,还叫你sonication lysate之类。。

h********y
发帖数: 79
7
cell signaling的抗体大部分还是不错滴,重复性比较好。
Santa Cruz质量实在不敢恭维,您可多花钱也不远多费时间,不过实在找不到抗体,就
会试他们家的,种类还是多,换货的确很麻利。
j******1
发帖数: 1315
8
直接说那些抗体在什么样品上不work比抒情半天更有意义吧?
r******k
发帖数: 446
9
没错 经常出毛病 而且只是在一些细胞里面work。 而且要不就只work在human细胞。。
1 (共1页)
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话题: 抗体话题: work话题: cell话题: tbst话题: signaling