l****p
发帖数: 27354 | 1 1. 把细菌的promoter及其原配的细菌基因一起转到真核细胞中.
2. 只把细菌的promoter转到真核细胞中，代替真核细胞本身的promoter. |
m*****u
发帖数: 15526 | |
g***j
发帖数: 40861 | |
l****p
发帖数: 27354 | 4 没发错，据说菌斑人才多，其实我就想知道promoter的特异性怎么样。 |
x********e
发帖数: 35261 | 5 这种简单问题自己狗一下啊
【在 l****p 的大作中提到】
: 没发错，据说菌斑人才多，其实我就想知道promoter的特异性怎么样。
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l****p
发帖数: 27354 | 6 我也以为简单，但目前还没有找到答案。
【在 x********e 的大作中提到】
: 这种简单问题自己狗一下啊
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x********e
发帖数: 35261 | 7 靠 本科生水平
【在 l****p 的大作中提到】
: 我也以为简单，但目前还没有找到答案。
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l****p
发帖数: 27354 | 8 不见得，我遗传学的不好，不代表其他不好。我初步的发现是，原核的promoter到了真
核细胞就哑火了，但真核的基因弄到原核里可以大量转录翻译，比如E Coli经常被人们
当牛做马，做合成蛋白质的苦力。
【在 x********e 的大作中提到】
: 靠 本科生水平
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s********a
发帖数: 1529 | 9 这个基本不行，密码子不同通用
转录因子也不用一样
【在 l****p 的大作中提到】
: 1. 把细菌的promoter及其原配的细菌基因一起转到真核细胞中.
: 2. 只把细菌的promoter转到真核细胞中，代替真核细胞本身的promoter.
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x********e
发帖数: 35261 | 10 靠 你先去addgene学习一下plasmid的选择
【在 l****p 的大作中提到】
: 不见得，我遗传学的不好，不代表其他不好。我初步的发现是，原核的promoter到了真
: 核细胞就哑火了，但真核的基因弄到原核里可以大量转录翻译，比如E Coli经常被人们
: 当牛做马，做合成蛋白质的苦力。
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l****p
发帖数: 27354 | 11 谢谢，我对质粒了解也少，只知道它含有细菌DNA，进入真核细胞后可以复制。
【在 x********e 的大作中提到】
: 靠 你先去addgene学习一下plasmid的选择
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l*******1
发帖数: 16217 | 12 这个好像因为质粒这个东西就来自于细菌吧，真核的蛋白质在原核里表达很多三四级构
型都发生变化，折叠不对，
【在 l****p 的大作中提到】
: 不见得，我遗传学的不好，不代表其他不好。我初步的发现是，原核的promoter到了真
: 核细胞就哑火了，但真核的基因弄到原核里可以大量转录翻译，比如E Coli经常被人们
: 当牛做马，做合成蛋白质的苦力。
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g***j
发帖数: 40861 | 13 我记得原来关注转基因的时候好像是黄金大米的转入的一个基因就在细菌的promoter上
记不太清了 我的查查 |
m*****u
发帖数: 15526 | |
l*******1
发帖数: 16217 | 15 质粒这个东西在真核细胞里效率不高，最多也就是用来研究一下细胞信号通路，
【在 l****p 的大作中提到】
: 谢谢，我对质粒了解也少，只知道它含有细菌DNA，进入真核细胞后可以复制。
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x********e
发帖数: 35261 | 16 好好读一下addgene的分子克隆101。质粒转真核细胞内很快就丢了，哪里可以复制？学
习一下质粒的结构就明白这些了
【在 l****p 的大作中提到】
: 谢谢，我对质粒了解也少，只知道它含有细菌DNA，进入真核细胞后可以复制。
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l*******1
发帖数: 16217 | 17 细菌对抗生素的耐药性就是用过质粒来传播的，质粒是细菌自然进化的一个重要工具， |
h*****G
发帖数: 113 | 18 崇拜！什么都懂！
【在 x********e 的大作中提到】
: 好好读一下addgene的分子克隆101。质粒转真核细胞内很快就丢了，哪里可以复制？学
: 习一下质粒的结构就明白这些了
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m**********e
发帖数: 12525 | 19 这么多年，终于在菌版看见杀老鼠的讨论学术问题了
妈的，以前只有我们物理学家和民间物理学家讨论学术问题的 |
h**********c
发帖数: 4120 | 20 叔也带来了焦作矿院孤本《采煤工业概论》
【在 m**********e 的大作中提到】
: 这么多年，终于在菌版看见杀老鼠的讨论学术问题了
: 妈的，以前只有我们物理学家和民间物理学家讨论学术问题的
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h**********c
发帖数: 4120 | 21 先敬仰一哈，很多新鲜的词汇，再问，是闭卷，纯人类智能，不是男票抢答的？
【在 x********e 的大作中提到】
: 靠 你先去addgene学习一下plasmid的选择
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g***j
发帖数: 40861 | 22 查了一下 确实记错了 promoter是大米的
【在 g***j 的大作中提到】
: 我记得原来关注转基因的时候好像是黄金大米的转入的一个基因就在细菌的promoter上
: 记不太清了 我的查查
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h**********c
发帖数: 4120 | 23 我们是不是可以打个这样的比方，在微观上就相当中国的高铁开到了蒙古的俄制铁轨上
。 |
g***j
发帖数: 40861 | 24 不对
promoter 比喻成火车头还稍微好点
【在 h**********c 的大作中提到】
: 我们是不是可以打个这样的比方，在微观上就相当中国的高铁开到了蒙古的俄制铁轨上
: 。
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t*d
发帖数: 1760 | |
l****p
发帖数: 27354 | 26 杀老鼠我不熟练练练练
: 楼主教我杀老鼠
【在 t*d 的大作中提到】
: 楼主教我杀老鼠
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s********a
发帖数: 1529 | 27 不能这么害人吧
什么叫稳定转染？细胞传代都没问题，当然能复制，前提是整合到细胞核基因组
【在 x********e 的大作中提到】
: 好好读一下addgene的分子克隆101。质粒转真核细胞内很快就丢了，哪里可以复制？学
: 习一下质粒的结构就明白这些了
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x********e
发帖数: 35261 | 28 你加了个前提还一样吗？为啥要插到真核基因组里才能复制？因为原核真核的
replication origin和complex都不同。
【在 s********a 的大作中提到】
: 不能这么害人吧
: 什么叫稳定转染？细胞传代都没问题，当然能复制，前提是整合到细胞核基因组
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d****o
发帖数: 32610 | 29 你真是学生物的吗
我高中水平也知道真核拿到原核里转录的是编码序列
promoter是质粒自带的
【在 l****p 的大作中提到】
: 不见得，我遗传学的不好，不代表其他不好。我初步的发现是，原核的promoter到了真
: 核细胞就哑火了，但真核的基因弄到原核里可以大量转录翻译，比如E Coli经常被人们
: 当牛做马，做合成蛋白质的苦力。
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x********e
发帖数: 35261 | 30 你瞬时转染能传几代那是因为copy number多。
【在 s********a 的大作中提到】
: 不能这么害人吧
: 什么叫稳定转染？细胞传代都没问题，当然能复制，前提是整合到细胞核基因组
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s********a
发帖数: 1529 | 31 这不是我加的前提，你别告诉我你没听说过
稳定转染就是这么回事
当年搞了好多这种细胞系，就是个筛沙子的工序
【在 x********e 的大作中提到】
: 你加了个前提还一样吗？为啥要插到真核基因组里才能复制？因为原核真核的
: replication origin和complex都不同。
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g***j
发帖数: 40861 | |
x********e
发帖数: 35261 | 33 不就是用G418强迫质粒插到基因组里嘛。你肯定不是钱老。
【在 s********a 的大作中提到】
: 这不是我加的前提，你别告诉我你没听说过
: 稳定转染就是这么回事
: 当年搞了好多这种细胞系，就是个筛沙子的工序
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s********a
发帖数: 1529 | 34 一点都不强迫，自愿插入的
你别描述的我们的工作那么猥琐
你懂的
【在 x********e 的大作中提到】
: 不就是用G418强迫质粒插到基因组里嘛。你肯定不是钱老。
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l******t
发帖数: 55733 | |
l*******p
发帖数: 5212 | 36 老夏是真千老，md，小蒙沽是假的。
【在 l******t 的大作中提到】
: 我月老鼠杀的又快又好
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l****p
发帖数: 27354 | 37 下老师帮我看看生物版的一个回帖吧。
【在 x********e 的大作中提到】
: 不就是用G418强迫质粒插到基因组里嘛。你肯定不是钱老。
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l****p
发帖数: 27354 | 38 我问的问题其实因为有例外，是个高级问题。
【在 d****o 的大作中提到】
: 你真是学生物的吗
: 我高中水平也知道真核拿到原核里转录的是编码序列
: promoter是质粒自带的
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x********e
发帖数: 35261 | 39 我用玩具矿车打比方给你解释一下吧。转录就是小车(RNA Pol)在轨道(DNA template)
上滑行。你远远地站着往起始位置（promoter）上扔车，如果运气好车掉到轨道上了，
会有一个初始推力让小车沿轨道开始滑行。这就是转录起始。
原核生物转录起始比较简单粗暴。只要有promoter就能稳定转录。真核生物转录的要求
比较高。你扔小车的频率和小车掉到promoter上的概率都比原核中小。所以真核基因用
enhancer作为辅助recruit RNA Pol。1的情况就是不含enhancer的转录：可以转录，但
是水平很低。2.我觉得不是不行，毕竟原核也是用TATA BOX，只是位置比较固定。我猜
hsp之类的promoter如果位置合适可以一试。
【在 l****p 的大作中提到】
: 下老师帮我看看生物版的一个回帖吧。
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h*****G
发帖数: 113 | 40 完全崇拜！
【在 x********e 的大作中提到】
: 我用玩具矿车打比方给你解释一下吧。转录就是小车(RNA Pol)在轨道(DNA template)
: 上滑行。你远远地站着往起始位置（promoter）上扔车，如果运气好车掉到轨道上了，
: 会有一个初始推力让小车沿轨道开始滑行。这就是转录起始。
: 原核生物转录起始比较简单粗暴。只要有promoter就能稳定转录。真核生物转录的要求
: 比较高。你扔小车的频率和小车掉到promoter上的概率都比原核中小。所以真核基因用
: enhancer作为辅助recruit RNA Pol。1的情况就是不含enhancer的转录：可以转录，但
: 是水平很低。2.我觉得不是不行，毕竟原核也是用TATA BOX，只是位置比较固定。我猜
: hsp之类的promoter如果位置合适可以一试。
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f**********n
发帖数: 29853 | 41 最能稳定转录的还是松下的专业转录机，一盘带子几分钟就转录好了。 |
a*****i
发帖数: 2108 | 42 你是搞采煤的？我老爹也是采煤届的。
【在 h**********c 的大作中提到】
: 叔也带来了焦作矿院孤本《采煤工业概论》
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a*****i
发帖数: 2108 | 43 细菌promoter在真菌中不能用，细菌基因在真菌中用真菌自己的promoter表达以后可能
可以用，也可能不可以用。不可以用的优化一下碱基说不定可以用了，但也可能还是不
能用。蛋白的功能受细胞内环境影响很大的。
【在 l****p 的大作中提到】
: 1. 把细菌的promoter及其原配的细菌基因一起转到真核细胞中.
: 2. 只把细菌的promoter转到真核细胞中，代替真核细胞本身的promoter.
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l****p
发帖数: 27354 | 44 谢谢！我看了你推荐的 plasmid 101,里面一个帖子在promoter specifity中提到，原
核promoter在真核中不行，看来是一般规律，而非绝对规律。
我用玩具矿车打比方给你解释一下吧。转录就是小车(RNA Pol)在轨道(DNA template)
【在 x********e 的大作中提到】
: 我用玩具矿车打比方给你解释一下吧。转录就是小车(RNA Pol)在轨道(DNA template)
: 上滑行。你远远地站着往起始位置（promoter）上扔车，如果运气好车掉到轨道上了，
: 会有一个初始推力让小车沿轨道开始滑行。这就是转录起始。
: 原核生物转录起始比较简单粗暴。只要有promoter就能稳定转录。真核生物转录的要求
: 比较高。你扔小车的频率和小车掉到promoter上的概率都比原核中小。所以真核基因用
: enhancer作为辅助recruit RNA Pol。1的情况就是不含enhancer的转录：可以转录，但
: 是水平很低。2.我觉得不是不行，毕竟原核也是用TATA BOX，只是位置比较固定。我猜
: hsp之类的promoter如果位置合适可以一试。
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l****p
发帖数: 27354 | 45 谢谢！生物版有个ID回帖，说有些情况下可以表达，但表达量极低
【在 a*****i 的大作中提到】
: 细菌promoter在真菌中不能用，细菌基因在真菌中用真菌自己的promoter表达以后可能
: 可以用，也可能不可以用。不可以用的优化一下碱基说不定可以用了，但也可能还是不
: 能用。蛋白的功能受细胞内环境影响很大的。
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p***n
发帖数: 17190 | 46 不行
要進細胞核得有人帶路
你得連配對的帶路基因一起放進去
【在 l****p 的大作中提到】
: 1. 把细菌的promoter及其原配的细菌基因一起转到真核细胞中.
: 2. 只把细菌的promoter转到真核细胞中，代替真核细胞本身的promoter.
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l****p
发帖数: 27354 | 47 谢谢，原来你也是生物学专业
【在 p***n 的大作中提到】
: 不行
: 要進細胞核得有人帶路
: 你得連配對的帶路基因一起放進去
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p***n
发帖数: 17190 | 48 唉 別提了,愧對我專業的老師,
要是我懂那堆超玄(弦)數學也不碰生物
central dogma
promoter 在真核中要真有被做出來 那是在細胞核外頭
promoter 要有作用,得回到細胞核里頭找對頭的DNA 序列,
要想回細胞核,
promoter 自己要有個標籤
然後細胞核膜上頭要有個認得這個標籤的帶路的.
原核的不用,所以原核的promoter
在真核里頭回不去細胞核內,見不著對應的DNA效果就很差.
想讓做出來的promoter 見到細胞核內的對應的DNA
要麼在 promoter 上頭也接個真核原有帶路的標籤
要麼在核膜上放個認得promoter 的帶路的
前者容易些.
做出來的話通知一聲,上面是我猜的.
【在 l****p 的大作中提到】
: 谢谢，原来你也是生物学专业
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x********e
发帖数: 35261 | 49 质粒里不行。基因组里可能可以。
【在 l****p 的大作中提到】
: 谢谢！我看了你推荐的 plasmid 101,里面一个帖子在promoter specifity中提到，原
: 核promoter在真核中不行，看来是一般规律，而非绝对规律。
:
: 我用玩具矿车打比方给你解释一下吧。转录就是小车(RNA Pol)在轨道(DNA template)
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x********e
发帖数: 35261 | 50 靠你说的什么鬼啊，不要误导别人
【在 p***n 的大作中提到】
: 唉 別提了,愧對我專業的老師,
: 要是我懂那堆超玄(弦)數學也不碰生物
: central dogma
: promoter 在真核中要真有被做出來 那是在細胞核外頭
: promoter 要有作用,得回到細胞核里頭找對頭的DNA 序列,
: 要想回細胞核,
: promoter 自己要有個標籤
: 然後細胞核膜上頭要有個認得這個標籤的帶路的.
: 原核的不用,所以原核的promoter
: 在真核里頭回不去細胞核內,見不著對應的DNA效果就很差.
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p***n
发帖数: 17190 | 51 說不定真能做出來
如果做的人有主角光環的話
【在 x********e 的大作中提到】
: 靠你说的什么鬼啊，不要误导别人
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