m**********1
发帖数: 2 | 1 大家好,
我最近面试一家公司, Phone interview 时问了两个关于HPLC 的问题, 我回答的不好.
现在要On site interview, 想寻求大家的帮助，看如何回答教好．
１． HPLC 的回收率很低,浪费了很多样品,问我该如何解决?
是反相C-18 柱,ELSD 检测. 我真是经常遇到该问题,但没想该如何解决. 只是简单说可
能溶解性不好.但对方马上说溶解性很好.我无语,只能说我再查阅下文献.
2. 一些化合物很快出峰,没有达到分离效果该如何分离?
我认为是化合物极性太大,建议换正相柱.但对方认为正相溶剂太贵,成本太高不可取.
我又无语.
很快就要面试了,恳请各位HPLC高手帮助,非常感谢!! | B********e
发帖数: 397 | 2 我不是专业人士也不是高手, 只是根据多年前的书本知识和 chromatography的基本原
理帮你分析一下, 希望对你有所启发:
关于第一问题,我不知道你是指制备性还是分析性HPLC. 但是在RUN HPLC 前要进行必要
的柱子清洗, 如甲醇, CHCN洗涤柱子去除杂质.
关于第二个问题, 我个人认为可以通过优化移动相的组分比例来调节极性, 进而调节化
合物的出峰时间.
好.
【在 m**********1 的大作中提到】
: 大家好,
: 我最近面试一家公司, Phone interview 时问了两个关于HPLC 的问题, 我回答的不好.
: 现在要On site interview, 想寻求大家的帮助，看如何回答教好．
: １． HPLC 的回收率很低,浪费了很多样品,问我该如何解决?
: 是反相C-18 柱,ELSD 检测. 我真是经常遇到该问题,但没想该如何解决. 只是简单说可
: 能溶解性不好.但对方马上说溶解性很好.我无语,只能说我再查阅下文献.
: 2. 一些化合物很快出峰,没有达到分离效果该如何分离?
: 我认为是化合物极性太大,建议换正相柱.但对方认为正相溶剂太贵,成本太高不可取.
: 我又无语.
: 很快就要面试了,恳请各位HPLC高手帮助,非常感谢!!
| m**********1
发帖数: 2 | 3 谢谢BiomedHope的回复,
1. 是半制备柱,柱子一定是清洗过的,没有问题, 因为是自动进样,可能有些损失,因为
化合物多是含氮类药物,是不是吸附教严重?如果是,可以改变PH来解决吗?柱子是ODS C-
18 反相柱.
2.已经用接近纯水来洗脱了,仍然很快出峰. | f******k
发帖数: 5329 | 4 要回答第一个问题,请楼主说得具体一点可以么?如果谈到回收率的话,那我想应该是制备柱了,分析柱很少用来回收的.而且如果回收的话,肯定不能用ELSD检测了,因为ELSD是destructive detector,所有经过ELSD的东东都烧光光,变成气体了.所以我觉得有不清晰的地方,楼主如果能讲具体一点,我可以帮你分析一下.
第二个问题楼主的回答是错误的.极性大造成分离不好是没错,但极性大的化合物是不能
用正相的,因为根本就无法溶于流动相当中,正相是用来分析低极性的化合物,比如石油
工业当中就经常用正相.
分离不好,首先考虑改变流动相,增加流动相极性,如果极性已经没有提高的余地了,就考虑在流动相中加入ion pairing reagents.如果有后面还有其他峰的话,要考虑梯度洗脱.还是不行的话,考虑用离子交换柱.
楼主可以透露一下是什么公司,什么职位么?
好.
【在 m**********1 的大作中提到】
: 大家好,
: 我最近面试一家公司, Phone interview 时问了两个关于HPLC 的问题, 我回答的不好.
: 现在要On site interview, 想寻求大家的帮助，看如何回答教好．
: １． HPLC 的回收率很低,浪费了很多样品,问我该如何解决?
: 是反相C-18 柱,ELSD 检测. 我真是经常遇到该问题,但没想该如何解决. 只是简单说可
: 能溶解性不好.但对方马上说溶解性很好.我无语,只能说我再查阅下文献.
: 2. 一些化合物很快出峰,没有达到分离效果该如何分离?
: 我认为是化合物极性太大,建议换正相柱.但对方认为正相溶剂太贵,成本太高不可取.
: 我又无语.
: 很快就要面试了,恳请各位HPLC高手帮助,非常感谢!!
| B********e
发帖数: 397 | 5 这是比较专业的回答.我感觉楼主申请的职位不适合你这位化学相关专业的人士.
【在 f******k 的大作中提到】
: 要回答第一个问题,请楼主说得具体一点可以么?如果谈到回收率的话,那我想应该是制备柱了,分析柱很少用来回收的.而且如果回收的话,肯定不能用ELSD检测了,因为ELSD是destructive detector,所有经过ELSD的东东都烧光光,变成气体了.所以我觉得有不清晰的地方,楼主如果能讲具体一点,我可以帮你分析一下.
: 第二个问题楼主的回答是错误的.极性大造成分离不好是没错,但极性大的化合物是不能
: 用正相的,因为根本就无法溶于流动相当中,正相是用来分析低极性的化合物,比如石油
: 工业当中就经常用正相.
: 分离不好,首先考虑改变流动相,增加流动相极性,如果极性已经没有提高的余地了,就考虑在流动相中加入ion pairing reagents.如果有后面还有其他峰的话,要考虑梯度洗脱.还是不行的话,考虑用离子交换柱.
: 楼主可以透露一下是什么公司,什么职位么?
:
: 好.
| f******k
发帖数: 5329 | 6 楼主的职位应该和我现在的很相近,但是我当初面试的时候,都没有被问到这么具体的问
题,所以好奇楼主面试的是什么公司.
【在 B********e 的大作中提到】
: 这是比较专业的回答.我感觉楼主申请的职位不适合你这位化学相关专业的人士.
| c*******n
发帖数: 1214 | |
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