w******e
发帖数: 1187 | 1 比如RGD peptide derivative能coat到ELISA plate上做capturing agent吗？
多谢！ |
a*****a
发帖数: 640 | 2 没保障，如果你要测针对这个蛋白的抗体IgG，2a，E基本上peptide上表位很有限
为什么不用全蛋白？
如果你要测针对这段肽的，那就要用这个肽而不是全蛋白
【在 w******e 的大作中提到】
: 比如RGD peptide derivative能coat到ELISA plate上做capturing agent吗？
: 多谢！
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w******e
发帖数: 1187 | 3
sorry, 没看懂-_-
我的目的是测一个蛋白，想用该蛋白的一个interacting peptide做capturing agent，
用aptamer做detection agent，用peptide instead of Ab做capturing agent的
原因是1. 担心aptamer跟ab有steric hindrance；2. 不想用ab呵呵
【在 a*****a 的大作中提到】
: 没保障，如果你要测针对这个蛋白的抗体IgG，2a，E基本上peptide上表位很有限
: 为什么不用全蛋白？
: 如果你要测针对这段肽的，那就要用这个肽而不是全蛋白
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a*****a
发帖数: 640 | 4 我做ELISA很多，没做过你这种，heihei
【在 w******e 的大作中提到】
:
: sorry, 没看懂-_-
: 我的目的是测一个蛋白，想用该蛋白的一个interacting peptide做capturing agent，
: 用aptamer做detection agent，用peptide instead of Ab做capturing agent的
: 原因是1. 担心aptamer跟ab有steric hindrance；2. 不想用ab呵呵
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w******e
发帖数: 1187 | 5 that's kinda my selling point, heihei^_^
【在 a*****a 的大作中提到】
: 我做ELISA很多，没做过你这种，heihei
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a*****a
发帖数: 640 | 6 那你就试一下好了，做好阳性对照，不过你有阳性对照吗？^_^
【在 w******e 的大作中提到】
: that's kinda my selling point, heihei^_^
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w******e
发帖数: 1187 | 7 my aptamer works for detection for sure. I just don't know whether my
peptide would stick or whether after stuck whether it still binds the
protein. anyway, it's just an intermediate idea not worth much time
【在 a*****a 的大作中提到】
: 那你就试一下好了，做好阳性对照，不过你有阳性对照吗？^_^
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a*****a
发帖数: 640 | 8 我刚才第一反应是你要测抗体
刚才google一下
The technique used to determine the coupling efficiency of peptide to BSA
depends on how the peptide was conjugated. The common method of coupling
through terminal cysteines makes coupling efficiancy determination simple.
Just
do an Ellman's assay (dtnb).
Coating a peptide on an ELISA plate has a few inherent problems. To begin
with,
the interaction between plain polystyrene plates and small peptides can
often
cause degradation of the peptide. You may want to try a different aproach
such
as biotinylating the peptide and immobilizing it on a Neutravidin coated
ELISA
plate. This has the added benefit of inserting a speacer arm between the
plate
and the peptide, htereby increasing antibody recognition.
你应该自己可以找到更多回答的
如果你是想验证aptamer是不是有优势，那要看已经商业化的kit性价比和你这个怎么样
【在 w******e 的大作中提到】
: my aptamer works for detection for sure. I just don't know whether my
: peptide would stick or whether after stuck whether it still binds the
: protein. anyway, it's just an intermediate idea not worth much time
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a*****a
发帖数: 640 | 9 http://catalog.takara-bio.co.jp/en/product/basic_info.asp?unitid=U100005431
【在 w******e 的大作中提到】
: my aptamer works for detection for sure. I just don't know whether my
: peptide would stick or whether after stuck whether it still binds the
: protein. anyway, it's just an intermediate idea not worth much time
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w******e
发帖数: 1187 | 10 多谢啦。aptamer在价格方面肯定有竞争里，performance嘛，现在跟
commercial kit比不太现实，我也就是做点proof of concept，证明
aptamer在各种ELISA scheme下都work呵呵
【在 a*****a 的大作中提到】
: 我刚才第一反应是你要测抗体
: 刚才google一下
: The technique used to determine the coupling efficiency of peptide to BSA
: depends on how the peptide was conjugated. The common method of coupling
: through terminal cysteines makes coupling efficiancy determination simple.
: Just
: do an Ellman's assay (dtnb).
: Coating a peptide on an ELISA plate has a few inherent problems. To begin
: with,
: the interaction between plain polystyrene plates and small peptides can
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o****e
发帖数: 1011 | 11
把这个interacting peptide的一端延长出去接个biotin；（尽量选择“不影响该
peptide和你要测的蛋白之间的相互作用”的一端）
选择使用Streptavidin （或NeutrAvidin） Coated的Plate，你的biotinylated
peptide应该能接到其表面上。
【在 w******e 的大作中提到】
: 多谢啦。aptamer在价格方面肯定有竞争里，performance嘛，现在跟
: commercial kit比不太现实，我也就是做点proof of concept，证明
: aptamer在各种ELISA scheme下都work呵呵
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w******e
发帖数: 1187 | 12 thx a lot! EDC chemistry somehow works poorly in my hand... I'll
probably drop this part and diretly go for aptamer pair hehe
【在 a*****a 的大作中提到】
: http://catalog.takara-bio.co.jp/en/product/basic_info.asp?unitid=U100005431
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w******e
发帖数: 1187 | 13 too bad my aptamer is also biotinylated...
【在 o****e 的大作中提到】
:
: 把这个interacting peptide的一端延长出去接个biotin；（尽量选择“不影响该
: peptide和你要测的蛋白之间的相互作用”的一端）
: 选择使用Streptavidin （或NeutrAvidin） Coated的Plate，你的biotinylated
: peptide应该能接到其表面上。
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o****e
发帖数: 1011 | 14 EDC chemistry本身没什么，尤其人家把kit/protocol都弄好了话。
主要问题是比如你的interacting peptide上的那些COOH和该plate上的那些NH2（脱水）反
应后，其和你要测的蛋白之间的相互作用恐怕就已经和“原始的interacting peptide和
你要测的蛋白之间的相互作用”有很大差别了。。。
【在 w******e 的大作中提到】
: thx a lot! EDC chemistry somehow works poorly in my hand... I'll
: probably drop this part and diretly go for aptamer pair hehe
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w******e
发帖数: 1187 | 15 en, covalent modification of peptides would be too messy, considering
that there is no controling which NH2 would be linked.
I might try that w/ aptamer w/ terminal NH2 some time later hehe
【在 o****e 的大作中提到】
: EDC chemistry本身没什么，尤其人家把kit/protocol都弄好了话。
: 主要问题是比如你的interacting peptide上的那些COOH和该plate上的那些NH2（脱水）反
: 应后，其和你要测的蛋白之间的相互作用恐怕就已经和“原始的interacting peptide和
: 你要测的蛋白之间的相互作用”有很大差别了。。。
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