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Biology版 - 求解:含SDS的蛋白lysate大家怎么定量?
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M*******C
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1
当我用含1-2% SDS 的lysis buffer收的蛋白,就没法用平时的那种Biorad的棕色那个
来定量了,因为有SDS的lysate加进去就变绿了。 想重新根据波长制作曲线,但失败了
,就是说在试不同的蛋白梯度做曲线时,蛋白量太大呢,有时甚至变成深蓝。。 反正
乱七八糟的。
多谢!
s******s
发帖数: 13035
2
蛋白沉淀下来再测就行了。biorad RC-DC

【在 M*******C 的大作中提到】
: 当我用含1-2% SDS 的lysis buffer收的蛋白,就没法用平时的那种Biorad的棕色那个
: 来定量了,因为有SDS的lysate加进去就变绿了。 想重新根据波长制作曲线,但失败了
: ,就是说在试不同的蛋白梯度做曲线时,蛋白量太大呢,有时甚至变成深蓝。。 反正
: 乱七八糟的。
: 多谢!

s*********t
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3
凯氏定氮法吧

【在 M*******C 的大作中提到】
: 当我用含1-2% SDS 的lysis buffer收的蛋白,就没法用平时的那种Biorad的棕色那个
: 来定量了,因为有SDS的lysate加进去就变绿了。 想重新根据波长制作曲线,但失败了
: ,就是说在试不同的蛋白梯度做曲线时,蛋白量太大呢,有时甚至变成深蓝。。 反正
: 乱七八糟的。
: 多谢!

M*******C
发帖数: 183
4
我看了一下网站,兼容的试剂名单里没有SDS,你用它来做SDS的样品好用吗?
你说的蛋白沉淀下来再测是什么意思?就是裂解-离心-取上清?
比如我的细胞,我加了含SDS的去裂解,为了核蛋白,这样lysate很粘,我就去超声,
等离心后经常看不见沉淀,直接就拿去用了。
The RC DC protein assay is compatible with the following reagents and
buffers in addition to those compatible with the DC protein assay:
CHAPS 2% ReadyPrep sequential extraction reagents 2 and 3
DTT, 350 mM Sodium hydroxide, 2.5 M
EDTA, 0.1 M TBP, 2 mM
Imidazole, 0.5 M Tris, pH 8.4, 0.5 M
Laemmli buffer with 5% β-mercaptoethanol Triton X-100, 2%
β-Mercaptoethanol, 10% Tween 20, 2%

【在 s******s 的大作中提到】
: 蛋白沉淀下来再测就行了。biorad RC-DC
J******r
发帖数: 2806
5
BCA assay
J******r
发帖数: 2806
6
http://www.piercenet.com/products/browse.cfm?fldID=02020101
BCA assay
it tolerates as high as 5% SDS
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