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- 俺来介绍一把Re: what is DNA shaffling?
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话题: 克隆
话题: 突变
话题: 一把
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r****o
发帖数: 105
1
DNA Shuffling 可以归结成一种体外基因重组技术。操作原理其实很简单,比如说如
果
你有一个抗生素分解酶的基因,现在你想引入一些突变使它变得活性更高,但是你并不知
道
应该突变哪些位点以及如何突变,DNA Shuffling 就可以解决这个问题。首先,用"错误
导向
PCR”扩增出这个基因的片断,这个过程中,引入了一定比率的随机突变。然后克隆进载
体,
表达然后用抗生素筛选出有进步的克隆。第二,分离出这些克隆,用DNAse I 随机切成小
片段,
然后退火,进行self-annealing. 这样小片断又重新恢复成一个基因,这里请注意,在这
个
过程中,不同的克隆发生了重组,所以“好”的突变有可能被积累在一个重组克隆里。第
三,
重新引入载体,表达并且筛选,这样往往会拿到更好的克隆,第四重复以上步骤只到找到
最佳
突变体为止。
从以上可知,这种技术实际上是一种靠组合然后筛选逐步找到最优突变体的过程,模
拟了
生物进化的过程,所以又称为“定向进化”(directed evolution).
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克隆了一个基因,serine突变成了Threonine,要紧么
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Is there any way to separate DNA and proteins but keep the protein activity
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