v***a
发帖数: 1242 | 1 本来有一个antibody，做immunoblotting的时候当一抗band都挺好的，突然有一天就不
行了，我再重新配一抗，出来结果还是一样，整个blot在expose以后，脏得不行，band
都难以分辨，有同行碰到过类似的问题吗？不知道可不可以解决？
谢谢～ |
z*******a
发帖数: 175 | 2 happened to me once. shifted to another source. |
b******k
发帖数: 1874 | 3 我觉得你需要有对照。transfer、wash，block，都要可能。。。
band
【在 v***a 的大作中提到】
: 本来有一个antibody，做immunoblotting的时候当一抗band都挺好的，突然有一天就不
: 行了，我再重新配一抗，出来结果还是一样，整个blot在expose以后，脏得不行，band
: 都难以分辨，有同行碰到过类似的问题吗？不知道可不可以解决？
: 谢谢～
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G******O
发帖数: 189 | 4 有可能是抗体不行了。抗体长期保存最好是在-20以下，避免反复冻融。常用的可以加
一倍甘油放-20度。不常用的分装后放-80度。你是怎么保存的？
band
【在 v***a 的大作中提到】
: 本来有一个antibody，做immunoblotting的时候当一抗band都挺好的，突然有一天就不
: 行了，我再重新配一抗，出来结果还是一样，整个blot在expose以后，脏得不行，band
: 都难以分辨，有同行碰到过类似的问题吗？不知道可不可以解决？
: 谢谢～
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v***a
发帖数: 1242 | 5 我买的是Santa Cruz的
重新配时的Antibody是新从公司买的
买来一看也是同一个lot#
配了就还是老样子
是按它说明存放在4度的
【在 G******O 的大作中提到】
: 有可能是抗体不行了。抗体长期保存最好是在-20以下，避免反复冻融。常用的可以加
: 一倍甘油放-20度。不常用的分装后放-80度。你是怎么保存的？
:
: band
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v***a
发帖数: 1242 | 6 我也尝试了一下其它的
但是就用这个Antibody时我可以得到很好的如预期一般的结果
所以就不敢轻易换了
真苦恼啊
【在 z*******a 的大作中提到】
: happened to me once. shifted to another source.
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G******O
发帖数: 189 | 7 如果你确认二抗条件没变过的话，试试5%牛奶中一抗4度过夜。如果还很脏，试试用5%
BSA代替牛奶。
【在 v***a 的大作中提到】
: 我也尝试了一下其它的
: 但是就用这个Antibody时我可以得到很好的如预期一般的结果
: 所以就不敢轻易换了
: 真苦恼啊
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p******i
发帖数: 1092 | 8 4 degree... could be fungus contamination ?
it happened to me before...
【在 v***a 的大作中提到】
: 我买的是Santa Cruz的
: 重新配时的Antibody是新从公司买的
: 买来一看也是同一个lot#
: 配了就还是老样子
: 是按它说明存放在4度的
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h*****o
发帖数: 342 | 9 很多搞体在4度里放一年两年都没问题。
你有没有一些对照的实验，overexpression, knock-out, rnai，先看看是抗体的问题
还是样本的问题
【在 v***a 的大作中提到】
: 我买的是Santa Cruz的
: 重新配时的Antibody是新从公司买的
: 买来一看也是同一个lot#
: 配了就还是老样子
: 是按它说明存放在4度的
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p*****m
发帖数: 7030 | 10 hoho 想到某人说过句名言 the most important function of knock out mouse is to
test out antibodies...
【在 h*****o 的大作中提到】
: 很多搞体在4度里放一年两年都没问题。
: 你有没有一些对照的实验，overexpression, knock-out, rnai，先看看是抗体的问题
: 还是样本的问题
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h*****o
发帖数: 342 | 11 有道理啊，我现在做的一个蛋白就是在周围找不到knock-out的老鼠，每次做
presentation人家都要围着我的抗体问半天，呵呵
to
【在 p*****m 的大作中提到】
: hoho 想到某人说过句名言 the most important function of knock out mouse is to
: test out antibodies...
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