f*******e 发帖数: 354 | 1 买了个signosis的single cell real time PCR kit, 但是你面的东东实在太少了,做一
次预实验就消耗了不少,不知道大家有没有用另外的DNA polymerase, 不至于有CDNA但
是没有聚合酶做PCR啊
看了takara的 LA taq, EX taq,都是用来扩增长片段的,没有提到可以用于扩增非常
少的cDNA。
谁做过的推荐下,非常感谢! |
s*********s 发帖数: 110 | 2 phusion@finnzyme
15-30 s/kb
超级牛b,很好用
现在NEB也有卖
http://www.finnzymes.fi/pcr/phusion_products.html
做一
【在 f*******e 的大作中提到】 : 买了个signosis的single cell real time PCR kit, 但是你面的东东实在太少了,做一 : 次预实验就消耗了不少,不知道大家有没有用另外的DNA polymerase, 不至于有CDNA但 : 是没有聚合酶做PCR啊 : 看了takara的 LA taq, EX taq,都是用来扩增长片段的,没有提到可以用于扩增非常 : 少的cDNA。 : 谁做过的推荐下,非常感谢!
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f*******e 发帖数: 354 | 3 只是提到快和fidelity啊,不知道是不是同样可以理解为效率高 比如极少量的模板也能
高效扩增
【在 s*********s 的大作中提到】 : phusion@finnzyme : 15-30 s/kb : 超级牛b,很好用 : 现在NEB也有卖 : http://www.finnzymes.fi/pcr/phusion_products.html : : 做一
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a****d 发帖数: 1919 | 4 LZ要扩多大的片段,能不能直接合成?
做一
【在 f*******e 的大作中提到】 : 买了个signosis的single cell real time PCR kit, 但是你面的东东实在太少了,做一 : 次预实验就消耗了不少,不知道大家有没有用另外的DNA polymerase, 不至于有CDNA但 : 是没有聚合酶做PCR啊 : 看了takara的 LA taq, EX taq,都是用来扩增长片段的,没有提到可以用于扩增非常 : 少的cDNA。 : 谁做过的推荐下,非常感谢!
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f*******e 发帖数: 354 | 5 我不是要扩增长片段 我只是要做single cell或极少量RNA RT来的PCR,就是常规的RTp
cr 但是模板量极少。kit里都有带的DNA polymerase 但是都非常少 很快就用完了 但是
还剩下很多的cDNA和RNA 用自己的普通taq酶好像不怎么灵 所以请教大家有没有用过什
么NB的酶 很多公司的牛酶都是宣称长片段 高保真 但是没有说高效率(灵敏)的
【在 a****d 的大作中提到】 : LZ要扩多大的片段,能不能直接合成? : : 做一
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L******s 发帖数: 2349 | 6 和别的没比过,但相对于Taq、Vent之类,Phusion的效率绝对高的多。我从cDNA libra
ry里扩增某些gene的cDNA,taq做不出来的,换Phusion就全做出来了,而且cDNA libra
ry的用量可以减到用taq时的1/10,可能再低也行,不过没有去试。
RTp
但是
【在 f*******e 的大作中提到】 : 我不是要扩增长片段 我只是要做single cell或极少量RNA RT来的PCR,就是常规的RTp : cr 但是模板量极少。kit里都有带的DNA polymerase 但是都非常少 很快就用完了 但是 : 还剩下很多的cDNA和RNA 用自己的普通taq酶好像不怎么灵 所以请教大家有没有用过什 : 么NB的酶 很多公司的牛酶都是宣称长片段 高保真 但是没有说高效率(灵敏)的
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c**********6 发帖数: 1173 | 7 Herculase 和phusion比怎么样?
我做的Herculase的产量是最高的。当然啦,我的PCR的底物浓度很高的那种。
【在 s*********s 的大作中提到】 : phusion@finnzyme : 15-30 s/kb : 超级牛b,很好用 : 现在NEB也有卖 : http://www.finnzymes.fi/pcr/phusion_products.html : : 做一
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