n***w
发帖数: 2405 | 1 还是大家不喜欢用kit直接自个儿pcr来做？
谢谢。。。 |
r******y
发帖数: 21907 | 2 invotrogen的
【在 n***w 的大作中提到】
: 还是大家不喜欢用kit直接自个儿pcr来做？
: 谢谢。。。
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T**********t
发帖数: 1604 | 3 Stratagene的QuikChange Kit，我所有的mutants都是用这个kit做的。
Stratagene现在改名叫Agilent Genomics了。
自己PCR也行啊，用kit主要是方便，所有需要的东西都给你配好了，多省事。要不然你
不是还得另外买限制酶和感受态细胞么。 |
m**z
发帖数: 787 | 4 这个kit是好，不过他家的competent cell还是很贵的。。。不过用自己做得也还好
【在 T**********t 的大作中提到】
: Stratagene的QuikChange Kit，我所有的mutants都是用这个kit做的。
: Stratagene现在改名叫Agilent Genomics了。
: 自己PCR也行啊，用kit主要是方便，所有需要的东西都给你配好了，多省事。要不然你
: 不是还得另外买限制酶和感受态细胞么。
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T**********t
发帖数: 1604 | 5 还好吧，他家的XL1-Blue和BL21一盒也就一百多刀，我一盒可以用很久了。我每个
transformation最多用20ul的感受态细胞，反正最后只需要一个单菌落。。。
自己做感受态细胞太麻烦了，做少了划不来，做多了又觉得浪费，用不了放-80吧，放
久了自己也不放心用，万一转化不成功也不知道是哪里出的问题，还是用新制备的或者
新买的放心。
【在 m**z 的大作中提到】
: 这个kit是好，不过他家的competent cell还是很贵的。。。不过用自己做得也还好
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p********o
发帖数: 29 | 6 NEB的Phusion系统，保证你用了就不想用其他的系统了 |
s*********s
发帖数: 110 | 7 我送你一个，屡试不爽的~
1.Computer-Aid Primer design
http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi
2.Mutagenesis(20uL) :
5XBuffer: 5uL
dNTP(5mM):0.5uL
oligo(F):0.5uL
oligo(R):0.5
template:100ng
DMSO:1.25uL
Phusion:0.3uL
Add water to 20uL
PCR setup
98 C, 30'
98 C, 10' --
65 C, 30' -- (X 23 cycle)
72 C, 4min --
72 C, 10min
4 C, forever
3.Dpn I digestion( 1uL and at least 3 hours)
4.transformation(5uL) |
n***w
发帖数: 2405 | 8 Thank you!
【在 s*********s 的大作中提到】
: 我送你一个，屡试不爽的~
: 1.Computer-Aid Primer design
: http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi
: 2.Mutagenesis(20uL) :
: 5XBuffer: 5uL
: dNTP(5mM):0.5uL
: oligo(F):0.5uL
: oligo(R):0.5
: template:100ng
: DMSO:1.25uL
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H****S
发帖数: 40 | 9 强烈推荐这个kit，我所有的mutants也是用这个做的，competent cell用的是
Invitrogen的DH10B.
【在 T**********t 的大作中提到】
: Stratagene的QuikChange Kit，我所有的mutants都是用这个kit做的。
: Stratagene现在改名叫Agilent Genomics了。
: 自己PCR也行啊，用kit主要是方便，所有需要的东西都给你配好了，多省事。要不然你
: 不是还得另外买限制酶和感受态细胞么。
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