s****y
发帖数: 89 | 1 我的实验需要拿一些植物提取液来处理细胞，然后用western看一些
target protein的变化，我想问一般情况下，植物提取液或者其他一些
chemical 处理细胞后，actin是不是都不会受到影响？也就是说一般
都是拿actin 作为loading control 的？假设cell viability不受这些
chemical的影响的前提下。 谢谢 |
n***w
发帖数: 2405 | 2 看你这个chemical啥作用。actin在某些情况下会变，不适合用来做loading control。 |
s****y
发帖数: 89 | 3
我也有这种顾虑，谢谢
【在 n***w 的大作中提到】
: 看你这个chemical啥作用。actin在某些情况下会变，不适合用来做loading control。
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n***w
发帖数: 2405 | |
h*******o
发帖数: 4884 | 5 一开始做western blot的时候
转完膜把胶也染上
这样可以基本上看出loading是不是均匀
然后在和actin band比较一下就行了
个人经验 actin在大部分情况下还是最好的normalizer
GAPDH经常不太靠谱 |
s****y
发帖数: 89 | 6
恩，染一下胶和actin对比一下是个好主意，没想到，呵呵。
谢了
【在 h*******o 的大作中提到】
: 一开始做western blot的时候
: 转完膜把胶也染上
: 这样可以基本上看出loading是不是均匀
: 然后在和actin band比较一下就行了
: 个人经验 actin在大部分情况下还是最好的normalizer
: GAPDH经常不太靠谱
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s******y
发帖数: 28562 | 7 同意。actin 半衰期长，所以一般短时间的处理对此影响不大
【在 h*******o 的大作中提到】
: 一开始做western blot的时候
: 转完膜把胶也染上
: 这样可以基本上看出loading是不是均匀
: 然后在和actin band比较一下就行了
: 个人经验 actin在大部分情况下还是最好的normalizer
: GAPDH经常不太靠谱
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s****y
发帖数: 89 | 8
艳阳天前辈出现了啊，嘿嘿。以前也经常帮我回答一些实验问题，
谢谢谢谢
【在 s******y 的大作中提到】
: 同意。actin 半衰期长，所以一般短时间的处理对此影响不大
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i*********0
发帖数: 915 | 9 我最近也是觉得很奇怪，用的是fetal liver的sample，用beta－tublin作loading和预
期的结果80％作一致，用actin和预期的结果100％一致。 |
