e***o
发帖数: 344 | 1 要做个试验，需要把fluorescence非常快得灭掉.不知道各位大虾能不能推荐几个好的
probe。 有一些photoswitching的probe，但是很多都是reversible的。 谢谢！ |
s*********y
发帖数: 387 | 2 red emission dye intends to be bleached easily.
if possible, try Cy5 or Alexa647, or RFP if using genetic linked marker!
Good luck
【在 e***o 的大作中提到】
: 要做个试验，需要把fluorescence非常快得灭掉.不知道各位大虾能不能推荐几个好的
: probe。 有一些photoswitching的probe，但是很多都是reversible的。 谢谢！
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e***o
发帖数: 344 | 3 thanks a lot for your reply. Cy5 and Alexa647 are indeed very prone to be
bleached. But I am not sure how fast it is? Ideally, I want something
could
go away (let's say 90%) in 1 min. Do you think you can bleach them by
strong
light in 1 min? or is there another way to shut down it, like oxidation?
I know there are some photoswitchable dyes, which could be useful for my
expt. But they are mostly reversible, which might cause problem later on.
Thanks again. |
b******s
发帖数: 1089 | 4 如果要求1min之内bleach，包括GFP在内所有的florescent tag都可以。
FRAP的时候bleachiing一般都在几秒之内。
irreversible photoswitching的tag有很多，EOS,dendra等，但是他们switch的速度不
如photo-bleaching。一般需要10-20s
【在 e***o 的大作中提到】
: 要做个试验，需要把fluorescence非常快得灭掉.不知道各位大虾能不能推荐几个好的
: probe。 有一些photoswitching的probe，但是很多都是reversible的。 谢谢！
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e***o
发帖数: 344 | 5 谢谢回复。 一般的florescent tag是可以被bleach。但不知道能不能达到90%以上.
FRAP的时候，一般都用很强的laser，这个对组织伤害还是有太大了。
我可以试试EOS,dendra，不过要是能有irreversible的on-off dye/tag 就更好了，
这样一次就可以上几个颜色。
【在 b******s 的大作中提到】
: 如果要求1min之内bleach，包括GFP在内所有的florescent tag都可以。
: FRAP的时候bleachiing一般都在几秒之内。
: irreversible photoswitching的tag有很多，EOS,dendra等，但是他们switch的速度不
: 如photo-bleaching。一般需要10-20s
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b******s
发帖数: 1089 | 6 bleach可以达到90%（如果以florescence intensity为标准的话）
但是如你所说，一般bleach都是用接近100%的laser，对细胞有一定程度的伤害。以前
看过文章提到细胞有丝分裂会有一定程度的抑制。这种情况下，可以多做一些control
比较。
PA tag用的laser强度都很小，10%就可以了，但是先有的PA tag基本都是用405nm的
laser，对细胞也是有伤害的。dendra2据最早的报道可以在488nm下convert，但是没有
任何别的组能重复这个结果。
【在 e***o 的大作中提到】
: 谢谢回复。 一般的florescent tag是可以被bleach。但不知道能不能达到90%以上.
: FRAP的时候，一般都用很强的laser，这个对组织伤害还是有太大了。
: 我可以试试EOS,dendra，不过要是能有irreversible的on-off dye/tag 就更好了，
: 这样一次就可以上几个颜色。
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m*******y
发帖数: 16 | 7 不知道KFP1怎么样，据说是绿光转化，但是没有看到后续的引用？
control
【在 b******s 的大作中提到】
: bleach可以达到90%（如果以florescence intensity为标准的话）
: 但是如你所说，一般bleach都是用接近100%的laser，对细胞有一定程度的伤害。以前
: 看过文章提到细胞有丝分裂会有一定程度的抑制。这种情况下，可以多做一些control
: 比较。
: PA tag用的laser强度都很小，10%就可以了，但是先有的PA tag基本都是用405nm的
: laser，对细胞也是有伤害的。dendra2据最早的报道可以在488nm下convert，但是没有
: 任何别的组能重复这个结果。
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