t****g
发帖数: 120 | 1 请问大家做IP最后elution一步都用什么条件？ 我们实验室的protocol是用将最后一步
wash的buffer remove掉几乎没有，然后加15-20ul 5x SDS loading buffer在沸水里放
10分钟。 这时间是不是太长了？ 温度是不是太高了？
好奇问一句，有不用高温加热的吗？ 听做proteomics的说，加热会产生抗体的片断，
干扰做mass spec。 如果想elute出protein(s）做MS，该用什么elution 条件呢？ |
c********r
发帖数: 189 | 2 1） crosslink your antibody with the beads
2) elute with 0.1M glycine(pH 2.5) |
K******S
发帖数: 10109 | 3 depends on what do you want to do with MS, just ID the proteins or PTM
analysis.
【在 t****g 的大作中提到】
: 请问大家做IP最后elution一步都用什么条件？ 我们实验室的protocol是用将最后一步
: wash的buffer remove掉几乎没有，然后加15-20ul 5x SDS loading buffer在沸水里放
: 10分钟。 这时间是不是太长了？ 温度是不是太高了？
: 好奇问一句，有不用高温加热的吗？ 听做proteomics的说，加热会产生抗体的片断，
: 干扰做mass spec。 如果想elute出protein(s）做MS，该用什么elution 条件呢？
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f*c
发帖数: 2726 | 4 做MS也没问题啊。就是可能loading buffer最好不要加DTT，用beta mercaptoethanol
【在 t****g 的大作中提到】
: 请问大家做IP最后elution一步都用什么条件？ 我们实验室的protocol是用将最后一步
: wash的buffer remove掉几乎没有，然后加15-20ul 5x SDS loading buffer在沸水里放
: 10分钟。 这时间是不是太长了？ 温度是不是太高了？
: 好奇问一句，有不用高温加热的吗？ 听做proteomics的说，加热会产生抗体的片断，
: 干扰做mass spec。 如果想elute出protein(s）做MS，该用什么elution 条件呢？
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f*c
发帖数: 2726 | 5 如果是PTM，有什么特别讲究吗
【在 K******S 的大作中提到】
: depends on what do you want to do with MS, just ID the proteins or PTM
: analysis.
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g*********5
发帖数: 2533 | 6 for me, boiling 3min is enough for the western.
if you want to MS, elute should be better.
【在 t****g 的大作中提到】
: 请问大家做IP最后elution一步都用什么条件？ 我们实验室的protocol是用将最后一步
: wash的buffer remove掉几乎没有，然后加15-20ul 5x SDS loading buffer在沸水里放
: 10分钟。 这时间是不是太长了？ 温度是不是太高了？
: 好奇问一句，有不用高温加热的吗？ 听做proteomics的说，加热会产生抗体的片断，
: 干扰做mass spec。 如果想elute出protein(s）做MS，该用什么elution 条件呢？
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