n*m
发帖数: 27 | 1 做了好久的cell migration，就是用那个boyden chamber做的，买的insert下面是有孔
的膜，放在２４well plate中，膜将上下两个well隔开。８um的孔径。偶都做了快半
年了，结果总是变化无常，好无助阿，大牛快出现帮帮忙吧，讲讲你们都是怎么做，怎
么quantification的阿
拜谢了！！！ |
t****p
发帖数: 1504 | 2 如果你的细胞需要trypsinize，我觉得结果肯定变化无常。
【在 n*m 的大作中提到】
: 做了好久的cell migration，就是用那个boyden chamber做的，买的insert下面是有孔
: 的膜，放在２４well plate中，膜将上下两个well隔开。８um的孔径。偶都做了快半
: 年了，结果总是变化无常，好无助阿，大牛快出现帮帮忙吧，讲讲你们都是怎么做，怎
: 么quantification的阿
: 拜谢了！！！
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s**********e
发帖数: 2888 | |
d********m
发帖数: 3662 | 4 我做了一个月，觉得基本无解，就放弃了。当时还觉得放弃的太快了 |
t****p
发帖数: 1504 | 5 生物学中让人头痛的地方就是这种情况，想做定量，但是varyation太大，不知道是否
该相信。
做过一些迁移的实验，多说两句。
1 transwell assay: 细胞状态很重要。你如果是贴壁细胞，trypsinization时间的些
微差别，离心重悬吊强度就有影响。另外我非常怀疑公司的产品是否能够做到不同孔的
膜都做得一样。
2 in vitro wounding assay：就是贴壁细胞划线，然后在特定时间看迁移到细胞所覆
盖的面积。此assay对medium的成分非常灵敏，要严格按照别人的protocol来做。换个
medium结果竟然会相反！你说该信哪个？此assay的定量分析非常耗时。
3 needle assay：就是一个小needle尖头释放chemoattractant，然后用软件实时记录
每个细胞的迁移，运算得到迁移速度和角度。模式生物Dictyostelium做这个assay的时
候需要先polarize才能迁移。很多文章说某个突变体影响力迁移速度。问题是很多突变
体本身它没法被polarized。你说究竟是它的极化能力受到影响还是本身的迁移受到影
响呢？曾经给community群发邮件询问这个问题的答案，竟然没有一个人能回答我的问
题。另外，此assay对细胞状态，温度等也非常敏感，所谓的定量其实只是定性。
4 EZ-TAXIScan chemotaxis assay：据说是日本一公司推出的仪器，巨贵。就是一头加
细胞，另一头加chemoattractant，细胞迁移的时候实时照相，追踪路径并计算速度和
角度。这是我迄今为止看到定量最让我信服的assay。此仪器软件有待改进，就是细胞
不迁移的话不追踪，只计算那些迁移明显的细胞。
【在 n*m 的大作中提到】
: 做了好久的cell migration，就是用那个boyden chamber做的，买的insert下面是有孔
: 的膜，放在２４well plate中，膜将上下两个well隔开。８um的孔径。偶都做了快半
: 年了，结果总是变化无常，好无助阿，大牛快出现帮帮忙吧，讲讲你们都是怎么做，怎
: 么quantification的阿
: 拜谢了！！！
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y***k
发帖数: 60 | 6 楼主做实验的时候，各个well里面是同种细胞么？migration变化比例多大？肉眼能看
出比较明显的差异么？
我不知道“结果总是变化无常”是什么意思，是说migration有时升高有时降低么？如
果是这种情况，只有两种可能，一是楼主的实验技术有问题，二是细胞的migration基
本没有差别
boyden chamber是比较tricky的实验，影响因素很多，主要体现在对细胞状态，细胞数
量和migration时间的把握上，建议楼主用多种排列组合试几次
我也做boyden chamber，感觉对于真正细胞迁移能力有差异的情况，虽然每次chamber
的结果会有些起伏，但是总体趋势肯定是不变的，具体实验里种种tricky的手段只是为
了把表型做的更加明显一点而已 |
n*m
发帖数: 27 | 7 多谢你们的解析，其实我也不知道那个做migration的是transwell还是boyden
chamber，反正就是那种买的insert独立包装的，把它放在２４well plate中。
control就是无serum的培养液，实验组就是正常１０%serum的培养液。结果就是有时候
control里migration的细胞很少（相对１０%的培养液的实验组），有时候很高，与实
验组没区别。migration的时间是４小时。
感觉每次细胞状态变化很大，除去没migration的细胞这个操作变化也很大，不知道大
家都是怎么做的，protocol都是说用cotton swab，感觉这个操作起来变化太大了
大家是怎么操作，怎么染色，定量的？
谢谢！！！
chamber
【在 y***k 的大作中提到】
: 楼主做实验的时候，各个well里面是同种细胞么？migration变化比例多大？肉眼能看
: 出比较明显的差异么？
: 我不知道“结果总是变化无常”是什么意思，是说migration有时升高有时降低么？如
: 果是这种情况，只有两种可能，一是楼主的实验技术有问题，二是细胞的migration基
: 本没有差别
: boyden chamber是比较tricky的实验，影响因素很多，主要体现在对细胞状态，细胞数
: 量和migration时间的把握上，建议楼主用多种排列组合试几次
: 我也做boyden chamber，感觉对于真正细胞迁移能力有差异的情况，虽然每次chamber
: 的结果会有些起伏，但是总体趋势肯定是不变的，具体实验里种种tricky的手段只是为
: 了把表型做的更加明显一点而已
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y****6
发帖数: 196 | 8 Want to try this?
Oris™ Cell Migration Assay |
n*m
发帖数: 27 | 9 Do you have experience with this product? How do you apply chemoattractants
in the system?
Thank you for your information
【在 y****6 的大作中提到】
: Want to try this?
: Oris™ Cell Migration Assay
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s**********e
发帖数: 2888 | 10 这个我用过，效果也一般
【在 y****6 的大作中提到】
: Want to try this?
: Oris™ Cell Migration Assay
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y***k
发帖数: 60 | 11 “control就是无serum的培养液，实验组就是正常１０%serum的培养液”
我没看明白啊，对照组和实验组不应该是细胞么？
我做chamber的时候，细胞重悬在0%或者1%serum的培养液中，铺在upper plate里，
bottom well里面加10%serum培养液，细胞在serum浓度差的影响下会自发从上往下爬，
不知你的实验是如何设计的啊？
btw，我是用伊红染细胞的，拍照计数定量
【在 n*m 的大作中提到】
: 多谢你们的解析，其实我也不知道那个做migration的是transwell还是boyden
: chamber，反正就是那种买的insert独立包装的，把它放在２４well plate中。
: control就是无serum的培养液，实验组就是正常１０%serum的培养液。结果就是有时候
: control里migration的细胞很少（相对１０%的培养液的实验组），有时候很高，与实
: 验组没区别。migration的时间是４小时。
: 感觉每次细胞状态变化很大，除去没migration的细胞这个操作变化也很大，不知道大
: 家都是怎么做的，protocol都是说用cotton swab，感觉这个操作起来变化太大了
: 大家是怎么操作，怎么染色，定量的？
: 谢谢！！！
:
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y****6
发帖数: 196 | 12 I know someone who used. But I have not tried.
chemoattractants
【在 n*m 的大作中提到】
: Do you have experience with this product? How do you apply chemoattractants
: in the system?
: Thank you for your information
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