s**********e
发帖数: 2888 | 1 我遇到的问题就是最后一步counting cells计算结果：
直接显微镜counting，我觉得透过膜的细胞的分布不是很均匀的，所以我总觉得选几个
区域数细胞不是很靠谱，虽然很多人都是这也做的，而且我到最后数细胞的时候，染料
残留和细胞经常难以分辨。
我最近开始试着用Calcein AM + cell dissociation solution,比如Trevigen的cell
dissociation solution，很多的commercial kit似乎都是这个办法。但是我总觉得，
会不会细胞不会完全的脱离下来，会不会有细胞死掉，或者膜上面的细胞会穿透膜掉下
来。
谢谢了 |
s******y
发帖数: 28562 | 2
我也经常有这个麻烦，后来我就采用DAPI 染核来数，就准确多了。
另外，细胞分布的确不是很均匀，但是只要你重复足够多次，最后的数据还是
可以用的
这个，关于细胞脱离不重复的事情，还是老话，要重复足够多次，
至于膜上面的细胞？这个不太可能穿过膜掉下来的，太难了
如果你不放心的话，做一个control, 把细胞放在没有gradient 的情况下adhere 1个小
时，然后用cell dissociation kit
【在 s**********e 的大作中提到】
: 我遇到的问题就是最后一步counting cells计算结果：
: 直接显微镜counting，我觉得透过膜的细胞的分布不是很均匀的，所以我总觉得选几个
: 区域数细胞不是很靠谱，虽然很多人都是这也做的，而且我到最后数细胞的时候，染料
: 残留和细胞经常难以分辨。
: 我最近开始试着用Calcein AM + cell dissociation solution,比如Trevigen的cell
: dissociation solution，很多的commercial kit似乎都是这个办法。但是我总觉得，
: 会不会细胞不会完全的脱离下来，会不会有细胞死掉，或者膜上面的细胞会穿透膜掉下
: 来。
: 谢谢了
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s**********e
发帖数: 2888 | 3 谢谢了，你用ＤＡＰＩ是说染色后银光显微镜拍照片，然后在用照片来分析吗？
谢谢
【在 s******y 的大作中提到】
:
: 我也经常有这个麻烦，后来我就采用DAPI 染核来数，就准确多了。
: 另外，细胞分布的确不是很均匀，但是只要你重复足够多次，最后的数据还是
: 可以用的
: 这个，关于细胞脱离不重复的事情，还是老话，要重复足够多次，
: 至于膜上面的细胞？这个不太可能穿过膜掉下来的，太难了
: 如果你不放心的话，做一个control, 把细胞放在没有gradient 的情况下adhere 1个小
: 时，然后用cell dissociation kit
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s******y
发帖数: 28562 | 4 是啊，因为DAPI 是染细胞核DNA的，背景很低，而且细胞核圆圆的，
一眼就看出来了。
可以先照照片也可以直接数。
【在 s**********e 的大作中提到】
: 谢谢了，你用ＤＡＰＩ是说染色后银光显微镜拍照片，然后在用照片来分析吗？
: 谢谢
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s**********e
发帖数: 2888 | 5 非常感谢，
祝你找工作好运
【在 s******y 的大作中提到】
: 是啊，因为DAPI 是染细胞核DNA的，背景很低，而且细胞核圆圆的，
: 一眼就看出来了。
: 可以先照照片也可以直接数。
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s**********e
发帖数: 2888 | 6 谢谢了，用了你的方法。合作实验室有一台比较高级的显微镜，可以扫描整个dapi
stained membrane，然后用软件计算膜上面的细胞数，效果非常的好。
觉得现在的仪器真的是先进啊，呵呵，显微镜扫描出上百招照片，每张照片大概10%
overlap，然后软件把这些照片拼成一张大照片，拿到一张完整的membrane的荧光照片。
【在 s******y 的大作中提到】
: 是啊，因为DAPI 是染细胞核DNA的，背景很低，而且细胞核圆圆的，
: 一眼就看出来了。
: 可以先照照片也可以直接数。
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