s*****u
发帖数: 407 | 1 要了一个PROMOTER的质粒，发现promoter的５＇和３＇是反着的。就是５＇变成了３＇
，３＇变成了５＇（有测序的证据）。而且这个错的质粒发了好多文章了。有鼻子有眼
的，怎么办？ |
I*****y
发帖数: 6402 | 2 人家可能故意没给你正确的plasmid，逗你玩
【在 s*****u 的大作中提到】
: 要了一个PROMOTER的质粒，发现promoter的５＇和３＇是反着的。就是５＇变成了３＇
: ，３＇变成了５＇（有测序的证据）。而且这个错的质粒发了好多文章了。有鼻子有眼
: 的，怎么办？
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s*****u
发帖数: 407 | 3 ３＇变成５＇怎么装的啊，实在是想不明白。 如果可以的话，我想把它反过来。
另外查了一篇很早的JBC也是在这个lab要的这个promoter。用的酶切就是反向的，就是
在这个promoter的基础上设计的片段deletion。
这个是mouse的promoter，不知道能不能用rat的取代
【在 I*****y 的大作中提到】
: 人家可能故意没给你正确的plasmid，逗你玩
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s*****u
发帖数: 407 | 4 怎么会克隆的时候把质粒的5‘和3’倒过来，请教牛牛们解惑，为了这个好几天没有睡
好觉了，thx！ |
H*******i
发帖数: 196 | 5 你问题问得也很模糊，怎么回答
至少你发两个有注释的序列看看 |
b******n
发帖数: 4225 | 6 看看启动子下游的报告基因序列的位置和方向
【在 s*****u 的大作中提到】
: 怎么会克隆的时候把质粒的5‘和3’倒过来，请教牛牛们解惑，为了这个好几天没有睡
: 好觉了，thx！
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m******5
发帖数: 1383 | 7 楼主看一下下游report基因的方向，是否和报告基因同向
另外，楼主用的是什么测序引物？
【在 b******n 的大作中提到】
: 看看启动子下游的报告基因序列的位置和方向
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s******s
发帖数: 13035 | 8 你看看表达情况吧。
其实多数promoter是双向的...
可能做错了，但是因为能用，所以就将就了？
【在 s*****u 的大作中提到】
: 要了一个PROMOTER的质粒，发现promoter的５＇和３＇是反着的。就是５＇变成了３＇
: ，３＇变成了５＇（有测序的证据）。而且这个错的质粒发了好多文章了。有鼻子有眼
: 的，怎么办？
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b****r
发帖数: 17995 | 9 据说质粒有时候会和人染色体一样倒位，不知道这么小的片段是不是也可能这样
如果不是core promoter，顺序很多也不重要 |
j***x
发帖数: 1469 | 10 这两个是完全不同的序列,但却是互为镜像的.
原文章是什么,可否给出文献? |
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s*****u
发帖数: 407 | 11 这个是有一段intron的，也是一块反的
【在 m******5 的大作中提到】
: 楼主看一下下游report基因的方向，是否和报告基因同向
: 另外，楼主用的是什么测序引物？
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s*****u
发帖数: 407 | 12 是用的３＇－５＇也就是第二种，设计的primer测的序
用NCBI的正确序列的primer不work
【在 m******5 的大作中提到】
: 楼主看一下下游report基因的方向，是否和报告基因同向
: 另外，楼主用的是什么测序引物？
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b******n
发帖数: 4225 | 13 感觉你在用英语的结构和汉字来描述问题
非常让人困惑，难以理解你的问题
【在 s*****u 的大作中提到】
: 是用的３＇－５＇也就是第二种，设计的primer测的序
: 用NCBI的正确序列的primer不work
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H****N
发帖数: 997 | 14 第一个市反着的是什么意思？从你的表述看，我不觉得你要的plasmid有问题。你有些
概念不清。
【在 s*****u 的大作中提到】
: 是用的３＇－５＇也就是第二种，设计的primer测的序
: 用NCBI的正确序列的primer不work
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H****N
发帖数: 997 | 15 第一个市反着的是什么意思？从你的表述看，我不觉得你要的plasmid有问题。你有些
概念不清。
【在 s*****u 的大作中提到】
: 是用的３＇－５＇也就是第二种，设计的primer测的序
: 用NCBI的正确序列的primer不work
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s*****u
发帖数: 407 | 16 谢谢，第一个的的顺序是不是5＇－CAT－INTRON－PROMOKTER－3＇,而不是５＇
promoter－intron－cat－3＇？
【在 H****N 的大作中提到】
: 第一个市反着的是什么意思？从你的表述看，我不觉得你要的plasmid有问题。你有些
: 概念不清。
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s*****u
发帖数: 407 | 17 update，才发现这个plasmid的序列是reverse complementary的。开始以为reversed，
NCBI blast可以比对reverse complementary的，不能比对reversed。。。
再次感谢大家! |
h**********r
发帖数: 671 | 18 http://www.mitbbs.com/article_t0/Biology/31775607.html
真核生物的启动子有严格的方向性吧？
我就找着了三对完全反相互补的六个promoter,五个活性都挺高的。 |
s******s
发帖数: 13035 | 19 不用找了。人基因组里11%的基因自带双向启动子。就是两个基因反向，
中间share一个启动子可以双向作用。比较普遍的现象
【在 h**********r 的大作中提到】
: http://www.mitbbs.com/article_t0/Biology/31775607.html
: 真核生物的启动子有严格的方向性吧？
: 我就找着了三对完全反相互补的六个promoter,五个活性都挺高的。
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m******5
发帖数: 1383 | 20 这么说人给你的质粒没错
你基本概念有问题
【在 s*****u 的大作中提到】
: 这个是有一段intron的，也是一块反的
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s*****u
发帖数: 407 | 21 质粒的lab给的序列说是reversed，没有说是reverse and complementary，然后联系他
们的人，一直都是没有解释这个问题，所以困惑了好一段。
祝大家research都顺顺利利！ |
l******a
发帖数: 3339 | 22 。。。。。。
sounds like common sense...
【在 s*****u 的大作中提到】
: 质粒的lab给的序列说是reversed，没有说是reverse and complementary，然后联系他
: 们的人，一直都是没有解释这个问题，所以困惑了好一段。
: 祝大家research都顺顺利利！
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