a******n
发帖数: 392 | 1 老鼠干细胞可以trypsinize后中和，然后直接加20％DMSO。可是人干细胞不能
trypsinize啊？ |
i*********0
发帖数: 915 | 2 为什么人的不可以，你做EB assay的时候或者其他的diff assay的时候，就不要单细胞
悬液了么？我做的是小鼠的胚胎干。但是我觉得你可以用小鼠干细胞冷冻的方法，冻人
的干细胞。不过我我们是用20%的Freezing medium。 其实就是20% DMSO, 20% SERUM,
60% DMEM.
LZ可以小规模试试看，然后告诉大家结果呀。 |
a******n
发帖数: 392 | 3 因为人胚胎干细胞解离成单细胞后会分化或者死亡，所以一般细胞传代时是不用
trypsin的。这时人和鼠干细胞不同的地方。 |
i*********0
发帖数: 915 | 4 我明天问问我们实验室做过人的ips的，看他怎么说。 |
m*****z
发帖数: 1451 | 5 可以单细胞，recover的时候加rock inhibitor就行了。
【在 a******n 的大作中提到】
: 因为人胚胎干细胞解离成单细胞后会分化或者死亡，所以一般细胞传代时是不用
: trypsin的。这时人和鼠干细胞不同的地方。
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s********r
发帖数: 312 | 6 以96孔板为例，吸掉培养基，加200-250ul冻存medium，然后用排枪在孔里搅合搅合，
把克隆刮下来就行了。 |
a******n
发帖数: 392 | 7 多谢热心帮忙，等你的回音。
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【在 i*********0 的大作中提到】
: 我明天问问我们实验室做过人的ips的，看他怎么说。
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a******n
发帖数: 392 | 8 有经验的来了！复活的程序是怎么样的？要离心吗？
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【在 s********r 的大作中提到】
: 以96孔板为例，吸掉培养基，加200-250ul冻存medium，然后用排枪在孔里搅合搅合，
: 把克隆刮下来就行了。
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i*********0
发帖数: 915 | 9 他们都是在48孔做，基本上是dispase去消化一下，然后吹打。
最好不要做单细胞悬液。
可哟考虑用rock inhibitor，但是听说会增加mutation的几率。
【在 a******n 的大作中提到】
: 多谢热心帮忙，等你的回音。
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a******n
发帖数: 392 | 10 dispase之后什么步骤，直接加freezing media吗？不需要洗去或中和dispase?
【在 i*********0 的大作中提到】
: 他们都是在48孔做，基本上是dispase去消化一下，然后吹打。
: 最好不要做单细胞悬液。
: 可哟考虑用rock inhibitor，但是听说会增加mutation的几率。
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