f*c
发帖数: 2726 | 1 荧光标记DNA，用的digoxigenin-dUTP and biotin-dUTP, 背景好强阿，不知道怎样可
以减弱背景，我用的自己的blocking buffer,不知道用roche nucleic acid blocking
reagent会不会好一点？
我看别人 dig or biotin detection 是在37度，可是我平时做细胞IF都在室温，温度
高一点是不是背景反而会更强？
谢谢 | g*****n
发帖数: 250 | 2 没做过Southern blotting吧? 杂交温度42C。如果你不知道为什么？那是你老师的失职
。 | f*c
发帖数: 2726 | 3 我不是做southern,我做immunofluorescence, 放到显微镜下看的，DNA 上有标记（
biotin)，再用streptavidin-FITC去识别biotin, 相当于western
【在 g*****n 的大作中提到】
: 没做过Southern blotting吧? 杂交温度42C。如果你不知道为什么？那是你老师的失职
: 。
| g*****n
发帖数: 250 | 4 看来你的老师真是失职。到现在你还不知道自己在干什么。标记DNA干嘛用？去检测DNA
或RNA。那就是杂交。 | f*c
发帖数: 2726 | 5 不是我不知道我在做什么，而是我没说清楚，所以你不知道我在做什么，我们不用
probe, 并不是probe上有标记，而是genomic dna 上有标记，再把 genomic dna 提出
来拉成 dna spread, 然后就是 antibody based detection, 并不是southern
northern, 我都说了类似与 western, 反正没人用42度，37或室温都有人做
Southern杂交 也不一定是42度 |
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