K********g
发帖数: 58 | 1 为什么张峰实验室的293细胞never reach over 75 % confluence
有什么说法吗？谢谢 |
K********g
发帖数: 58 | 2 还有，构建了几个gRNA质粒，U6 Promoter 第一个不是G，要重新构建吗？THANKS |
C*********h
发帖数: 83 | 3 转录不了。
【在 K********g 的大作中提到】
: 还有，构建了几个gRNA质粒，U6 Promoter 第一个不是G，要重新构建吗？THANKS
|
s******s
发帖数: 13035 | 4 不知道crispr啥protocol，以前实验室产病毒，293T也是不能confluent
【在 K********g 的大作中提到】
: 为什么张峰实验室的293细胞never reach over 75 % confluence
: 有什么说法吗？谢谢
|
c****r
发帖数: 9 | 5 应该没问题。U6 起始可用A或G。如果第一个不是A或G，则从其后第一个A货G起始，这
样你的gRNA会缺失几个碱基。而gRNA缺失三个碱基并不影响功能，反而提高专一性。
关于U6 promoter的起始，可参考： http://www.nature.com/mtna/journal/v3/n5/full/mtna201412a.html
【在 K********g 的大作中提到】
: 还有，构建了几个gRNA质粒，U6 Promoter 第一个不是G，要重新构建吗？THANKS
|
K********g
发帖数: 58 | |
