关于AF488标记的antagonist在flow cytometry上面的问题，谢谢！ - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 关于AF488标记的antagonist在flow cytometry上面的问题，谢谢！

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t******n 发帖数: 33	1 一个荧光（Alexa Fluor 488）标记的antagonist可以抑制细胞表面的分子信号通路， IC50在100～200nM。但是用这个AF488标记的antagonist染色target高表达的细胞系，在flow cytometry上面看不见那个波峰向右边移动，请问大侠可能的原因是什么？谢谢！
c******8 发帖数: 36	2 你的抗体不work 吧！
s******c 发帖数: 331	3 如果你确定你的小分子结合你想看的target，那么最大的可能是dissociation太快。小分子和抗体的结合动力学有时候会差很多，描述小分子作用方式的不能仅仅用affinity 或IC50，小分子哪怕affinity在single digit nM range，可能dissociation都是秒级的，这样在FACS里当然看不到。
t******n 发帖数: 33	4 谢谢回复！ＡＦ４８８标记应该work，高浓度的时候能看见非特异的结合。请问seraphzc，有什么办法可以解决这个off　rate太快的问题？我试了Ｆormaldehyde fix，对小分子好像不起作用，还有啥其他得可能方法吗？非常感谢！ affinity 【在 s******c 的大作中提到】 : 如果你确定你的小分子结合你想看的target，那么最大的可能是dissociation太快。小 : 分子和抗体的结合动力学有时候会差很多，描述小分子作用方式的不能仅仅用affinity : 或IC50，小分子哪怕affinity在single digit nM range，可能dissociation都是秒级 : 的，这样在FACS里当然看不到。

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