v********e 发帖数: 1597 | 1 已完成用韩春雨在自然生物技术所报道的NgAGO做基因敲除的实验,按照韩春雨提供的
Genbank号找到了序列,做了密码子优化,在蛋白N端加了V5标签,C端加了SV40核定位
信号,全基因合成了这个蛋白的基因序列克隆到了lenti病毒载体,用包装的病毒转导
了A549细胞,可以检测到蛋白表达,克隆了转导细胞拿到了稳定表达NgAgo的细胞系,
按照韩春雨文章中列出的方法设计了一对gDNA 靶向基因RNASEL的起始密码子区域,10
倍于韩春雨所示DNA的量转染细胞,48小时后克隆转染细胞,一共筛选了36个克隆,未
见到任何RNASEL敲除的表型,大家看着办吧,我做不出来 |
n******7 发帖数: 12463 | |
s******y 发帖数: 17729 | 3 白瞎大把的时间和试剂,干点啥不好
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【在 v********e 的大作中提到】 : 已完成用韩春雨在自然生物技术所报道的NgAGO做基因敲除的实验,按照韩春雨提供的 : Genbank号找到了序列,做了密码子优化,在蛋白N端加了V5标签,C端加了SV40核定位 : 信号,全基因合成了这个蛋白的基因序列克隆到了lenti病毒载体,用包装的病毒转导 : 了A549细胞,可以检测到蛋白表达,克隆了转导细胞拿到了稳定表达NgAgo的细胞系, : 按照韩春雨文章中列出的方法设计了一对gDNA 靶向基因RNASEL的起始密码子区域,10 : 倍于韩春雨所示DNA的量转染细胞,48小时后克隆转染细胞,一共筛选了36个克隆,未 : 见到任何RNASEL敲除的表型,大家看着办吧,我做不出来
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P****R 发帖数: 22479 | 4 你做这个实验花了多少钱,多少时间?
应该开个发票去函韩春雨实验室报销。这个家伙不是很有钱吗?
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【在 v********e 的大作中提到】 : 已完成用韩春雨在自然生物技术所报道的NgAGO做基因敲除的实验,按照韩春雨提供的 : Genbank号找到了序列,做了密码子优化,在蛋白N端加了V5标签,C端加了SV40核定位 : 信号,全基因合成了这个蛋白的基因序列克隆到了lenti病毒载体,用包装的病毒转导 : 了A549细胞,可以检测到蛋白表达,克隆了转导细胞拿到了稳定表达NgAgo的细胞系, : 按照韩春雨文章中列出的方法设计了一对gDNA 靶向基因RNASEL的起始密码子区域,10 : 倍于韩春雨所示DNA的量转染细胞,48小时后克隆转染细胞,一共筛选了36个克隆,未 : 见到任何RNASEL敲除的表型,大家看着办吧,我做不出来
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c********n 发帖数: 225 | 5 Addgene blog 2016 August Update
http://blog.addgene.org/editors-choice-august-2016?utm_content=38511677
https://twitter.com/Addgene/status/771807413632659457
2016年8月份, NgAgo的话题,在别的论坛也没闲着:
1. Pooran's Google Survey: Most Viewed Post (MVP)
2. 以及这个post带来的 "a bit of a Twitter storm surrounding NgAgo"
-2016年9月2日 |
n******g 发帖数: 2201 | 6 别嚷嚷了,给你一百万,重做一遍,记住要认真。
做出来了再给你5百万 |
m****a 发帖数: 270 | 7 Nostring, 你上次在博士蹲那顿晚饭还是别人付的钱,你能拿出一百万谁信?
【在 n******g 的大作中提到】 : 别嚷嚷了,给你一百万,重做一遍,记住要认真。 : 做出来了再给你5百万
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P****R 发帖数: 22479 | 8 晚饭哥,上次你蹭饭连小费都是别人给你垫的,你还好意思拿100万津巴布韦币来糊弄
人?
【在 n******g 的大作中提到】 : 别嚷嚷了,给你一百万,重做一遍,记住要认真。 : 做出来了再给你5百万
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F****8 发帖数: 289 | 9 谢谢楼主在此分享结果。看来火锅哥,晚饭哥,都是瞎JB扯。晚饭哥还厚着脸皮出来混
,火锅哥脸皮没那么厚,吃了火锅就再没出现,ID自杀了吧? |
w****a 发帖数: 139 | |
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P****R 发帖数: 22479 | 11 站在韩春雨/沈啸一边的都是这些无耻之尤。
【在 w****a 的大作中提到】 : 看了晚饭哥,明白了什么叫脸皮比城墙厚
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M**********7 发帖数: 127 | 12 楼主试试不戴手套,用矿泉水瓶装试剂,说不定就做出来了 |
v********e 发帖数: 1597 | 13 合成基因花了900美元,做克隆包装病毒大概花销500美元,做细胞估计花费也有500美
元,从设计试验到完成总共计算有2个多月,没有全力去做,因为还有许多其他工作
【在 P****R 的大作中提到】 : 站在韩春雨/沈啸一边的都是这些无耻之尤。
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j****n 发帖数: 3370 | 14 哪里合成基因这么便宜?还做了密码子优化
我们找的dna2.0 稍微大点蛋白都要好几千刀
是用的genescript?他们的倒是便宜
【在 v********e 的大作中提到】 : 合成基因花了900美元,做克隆包装病毒大概花销500美元,做细胞估计花费也有500美 : 元,从设计试验到完成总共计算有2个多月,没有全力去做,因为还有许多其他工作
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x*****n 发帖数: 1636 | 15 我是觉得这些重复都是无为的浪费,人家大可一句话说你技术不行把你抵挡回去,最好
还是派团队监视他自己做,如果他都做不出来看他怎么说
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【在 v********e 的大作中提到】 : 已完成用韩春雨在自然生物技术所报道的NgAGO做基因敲除的实验,按照韩春雨提供的 : Genbank号找到了序列,做了密码子优化,在蛋白N端加了V5标签,C端加了SV40核定位 : 信号,全基因合成了这个蛋白的基因序列克隆到了lenti病毒载体,用包装的病毒转导 : 了A549细胞,可以检测到蛋白表达,克隆了转导细胞拿到了稳定表达NgAgo的细胞系, : 按照韩春雨文章中列出的方法设计了一对gDNA 靶向基因RNASEL的起始密码子区域,10 : 倍于韩春雨所示DNA的量转染细胞,48小时后克隆转染细胞,一共筛选了36个克隆,未 : 见到任何RNASEL敲除的表型,大家看着办吧,我做不出来
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H****N 发帖数: 997 | 16 他们自己重复不出来也会有别的说辞。韩连试验记录都不肯晾,很说明问题。
【在 x*****n 的大作中提到】 : 我是觉得这些重复都是无为的浪费,人家大可一句话说你技术不行把你抵挡回去,最好 : 还是派团队监视他自己做,如果他都做不出来看他怎么说 : : 10
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