s****y
发帖数: 62 | 1 菜鸟最近在读一些有关RAMAN 的文章， 尤其是SERS。
很多文章，在用 ELISA 和 SERS 联合起来检测antigen。
基本思路是，gold的nano particles上面加上antibody和raman reporter， 然后bond
想要检测的
antigen，然后用SERS 检测。
有1个疑问，想请教大家。
SERS的原理是纳米级的颗粒因为表面粗糙，所以会增强raman的信号。
既然这样，为什么要在gold nanoparticles上面链接raman reporter?
谢谢各位。 |
C********5
发帖数: 194 | |
s****y
发帖数: 62 | 3
普通的sers， 只是用 gold nanopartilces 去增强信号，也没有用 reporter，也可以
有信号啊。
所以这是我迷糊的地方。
【在 C********5 的大作中提到】
: 没REPORTER哪来RAMAN信号
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f**p
发帖数: 792 | 4 那是测的东西本身的raman, 你现在需要的是测两个东西的结合，用reporter可
能更好操作
【在 s****y 的大作中提到】
:
: 普通的sers， 只是用 gold nanopartilces 去增强信号，也没有用 reporter，也可以
: 有信号啊。
: 所以这是我迷糊的地方。
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v*****s
发帖数: 20290 | 5 antigen的Raman信号一般比较复杂，峰比较多，不同的antigen也不好区分。通过
antibody bond以后，把Au NP固定住，再通过reporter就可以准确定位了。这个一般是
做imaging的，需要有某种手段把没固定住的Au NP弄掉，防止干扰。另外一个原因是
reporter一般是dye，比antigen的信号要强几个数量级。
你可以具体说一下哪篇paper，大家一起讨论看看。
【在 s****y 的大作中提到】
:
: 普通的sers， 只是用 gold nanopartilces 去增强信号，也没有用 reporter，也可以
: 有信号啊。
: 所以这是我迷糊的地方。
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s****y
发帖数: 62 | 6
请问怎么上传附件，我可以把文件传上来。
我把paper的名字发过来。
在analytical chemistry 上面看的。
我还有一个问题。如果是因为antigen的信号比较弱，所以加reporter。那如果我用
antibody吸附
在Au NP上面去bond organic compound,那是不是就没有antigen信号复杂和信号比较弱
这个问题
了？这样的话。Au NP连接antibody去吸附 organic compound是不是直接用SERS就可以
测到？
谢谢楼上各位的解答。
【在 v*****s 的大作中提到】
: antigen的Raman信号一般比较复杂，峰比较多，不同的antigen也不好区分。通过
: antibody bond以后，把Au NP固定住，再通过reporter就可以准确定位了。这个一般是
: 做imaging的，需要有某种手段把没固定住的Au NP弄掉，防止干扰。另外一个原因是
: reporter一般是dye，比antigen的信号要强几个数量级。
: 你可以具体说一下哪篇paper，大家一起讨论看看。
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s****y
发帖数: 62 | 7
Anal. Chem. 2010, 82, 5290–5295
On-Chip Immunoassay Using Surface-Enhanced
Raman Scattering of Hollow Gold Nanospheres
【在 v*****s 的大作中提到】
: antigen的Raman信号一般比较复杂，峰比较多，不同的antigen也不好区分。通过
: antibody bond以后，把Au NP固定住，再通过reporter就可以准确定位了。这个一般是
: 做imaging的，需要有某种手段把没固定住的Au NP弄掉，防止干扰。另外一个原因是
: reporter一般是dye，比antigen的信号要强几个数量级。
: 你可以具体说一下哪篇paper，大家一起讨论看看。
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s****y
发帖数: 62 | 8
另外，如果加上了reporter, raman测出来的是reporter的信号，那怎么能判断是
antigen呢？
这些问题比较肤浅，希望不要见笑。我一直做GCMS 没了解过raman。
谢谢你的解答。
【在 v*****s 的大作中提到】
: antigen的Raman信号一般比较复杂，峰比较多，不同的antigen也不好区分。通过
: antibody bond以后，把Au NP固定住，再通过reporter就可以准确定位了。这个一般是
: 做imaging的，需要有某种手段把没固定住的Au NP弄掉，防止干扰。另外一个原因是
: reporter一般是dye，比antigen的信号要强几个数量级。
: 你可以具体说一下哪篇paper，大家一起讨论看看。
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b*******g
发帖数: 1309 | 9 你是缺乏sandwich assay 的常识
不管是用 raman，还是很Fluorescence，还是其他的
基本原理都是用antibody 识别analyte，然后 antibody 本身连一个信号reporter（或
者上第二个antibody，上面连reporter），
可以是这里的raman，也可以是酶催化的荧光，还可以是ECL，等等
因为antibody 跟antigen 是特异性结合，所以有antigen在，才有antibody，有
antibody 就有reporter的信号，而且这个信号说不准还是放大了几千几万倍，这样灵
敏度才高。
【在 s****y 的大作中提到】
:
: 另外，如果加上了reporter, raman测出来的是reporter的信号，那怎么能判断是
: antigen呢？
: 这些问题比较肤浅，希望不要见笑。我一直做GCMS 没了解过raman。
: 谢谢你的解答。
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s****y
发帖数: 62 | 10
一个问题是，raman 给出来的是function group的图谱，GCMS那种给出来的是保留时间
和碎片。
如果是raman的话，给出来的是reporter的信号，那从图谱上没办法判断是antigen的
function
group。
说的比较混乱，不知道这位专家能不能解答一下这个问题。
谢谢各位的帮忙了。
【在 b*******g 的大作中提到】
: 你是缺乏sandwich assay 的常识
: 不管是用 raman，还是很Fluorescence，还是其他的
: 基本原理都是用antibody 识别analyte，然后 antibody 本身连一个信号reporter（或
: 者上第二个antibody，上面连reporter），
: 可以是这里的raman，也可以是酶催化的荧光，还可以是ECL，等等
: 因为antibody 跟antigen 是特异性结合，所以有antigen在，才有antibody，有
: antibody 就有reporter的信号，而且这个信号说不准还是放大了几千几万倍，这样灵
: 敏度才高。
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b*******g
发帖数: 1309 | 11 GC-MS or any MS 是直接检测analyte 的信号
你上面提到的是间接检测，不是直接检测antigen的raman 信号，而是间接检测
reporter 信号，然后这个信号强度是跟antigen的浓度相关的
其中antibody 的存在，保证了reporter的信号是跟antigen有关
好好看看这个ELISA 的wiki
http://en.wikipedia.org/wiki/ELISA
另外所有的 immuno assay 大致都是这个原理，跟你想像的直接检测不一样
【在 s****y 的大作中提到】
:
: 一个问题是，raman 给出来的是function group的图谱，GCMS那种给出来的是保留时间
: 和碎片。
: 如果是raman的话，给出来的是reporter的信号，那从图谱上没办法判断是antigen的
: function
: group。
: 说的比较混乱，不知道这位专家能不能解答一下这个问题。
: 谢谢各位的帮忙了。
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s****y
发帖数: 62 | 12
再有一个quick question
我知道大部分antigen 和 antibody 都是特异性链接。
但是不排除有一种antibody可以选择2个antigen。 如果说，我的 target antigen是在
一个matrix里
面，里面有其他的干扰的物质，那我有用SERS就没有办法得到非常准确的结果了。
这样想对吗？
谢谢这位师兄。
【在 b*******g 的大作中提到】
: GC-MS or any MS 是直接检测analyte 的信号
: 你上面提到的是间接检测，不是直接检测antigen的raman 信号，而是间接检测
: reporter 信号，然后这个信号强度是跟antigen的浓度相关的
: 其中antibody 的存在，保证了reporter的信号是跟antigen有关
: 好好看看这个ELISA 的wiki
: http://en.wikipedia.org/wiki/ELISA
: 另外所有的 immuno assay 大致都是这个原理，跟你想像的直接检测不一样
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b*******g
发帖数: 1309 | 13 特异性很高，matrix 干扰问题不大
一般先吸附，然后多次wash，把matrix洗掉，然后再测信号
有问题的是非特异性吸附 |
s****y
发帖数: 62 | 14
谢谢你，明白了。是根据2个比较出来的
一个图是raman reporter 没有任何sandwich complexes连上面的信号
一个是有sandwich complexes链接上面的信号。
比较第二个信号比第一个信号减弱多少来判断出来多少antigen吸附在antibody上面
这个理解对不对。谢谢你的回复。
【在 b*******g 的大作中提到】
: 特异性很高，matrix 干扰问题不大
: 一般先吸附，然后多次wash，把matrix洗掉，然后再测信号
: 有问题的是非特异性吸附
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v*****s
发帖数: 20290 | 15 是，如果你的目标监测物就是那个organic compound。
环境监测里面比如大气，水质检测里面这种方法用得多，灵敏度非常高，特别是目标物
有不易混淆的特征峰的时候。连antibody都不需要加，一般的organic compond很容易
吸附在Au NP表面的，如果是Ag的，就更容易了。这也是SERS比fluoresence优越的地方
，可以做直接检测，所谓的label free detection，
【在 s****y 的大作中提到】
:
: 谢谢你，明白了。是根据2个比较出来的
: 一个图是raman reporter 没有任何sandwich complexes连上面的信号
: 一个是有sandwich complexes链接上面的信号。
: 比较第二个信号比第一个信号减弱多少来判断出来多少antigen吸附在antibody上面
: 这个理解对不对。谢谢你的回复。
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