r**x
发帖数: 408 | 1 最近在做一个荧光能量转移的项目，基本想法是在硅胶表面标记荧光给体（555nm激发
565nm发射），同时在该固体表面生长一些高分子，在高分子的顶端标记上荧光受体（
650nm激发670nm发射），现在碰到很奇怪的现象，当设置激发波长在500nm的时候，设
置扫描范围从510到700nm，先扫描空白去离子水，发现一小峰在600nm，这应该是水的
RAMAN散射，然后扫描样品，发现在545nm处出现一强峰，以至于本该出现在565nm处的
给体激发峰呈现为一肩峰，见图。想请教一下大家，545nm处的强峰是由于什么引起的
呢，我的样品里并没有在545nm发射的物质啊。求高人不吝赐教。 |
w***7
发帖数: 45 | 2 硅胶的散射？做个空白硅胶看看
【在 r**x 的大作中提到】
: 最近在做一个荧光能量转移的项目，基本想法是在硅胶表面标记荧光给体（555nm激发
: 565nm发射），同时在该固体表面生长一些高分子，在高分子的顶端标记上荧光受体（
: 650nm激发670nm发射），现在碰到很奇怪的现象，当设置激发波长在500nm的时候，设
: 置扫描范围从510到700nm，先扫描空白去离子水，发现一小峰在600nm，这应该是水的
: RAMAN散射，然后扫描样品，发现在545nm处出现一强峰，以至于本该出现在565nm处的
: 给体激发峰呈现为一肩峰，见图。想请教一下大家，545nm处的强峰是由于什么引起的
: 呢，我的样品里并没有在545nm发射的物质啊。求高人不吝赐教。
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r**x
发帖数: 408 | 3 空白硅胶测过，在500nm激发时确实在此处有一强峰，但该峰不随着激发波长变化而改
变位置，要是RAMAN散射峰的话不是应该随着激发波长变化而变化吗？ |
d********y
发帖数: 176 | 4 那个545nm的峰应该就是是PDMS（或者其中杂质）的荧光信号。
那个600nm的峰随激发光波长改变位置吗？
要是你能够看到水的Raman signal,PDMS的Raman signal可比水强不少。不过500nm激发
，545nm的峰对应的Raman shift 是 1650 cm-1,是C=C的，不过如你所说应该受激发光
波长改变位置.一般说来Raman信号应该很弱。 |
w***7
发帖数: 45 | 5 Then it could be the fluorescence from impurities in your sample, as the
post upstairs suggested. You can try synchronous scanning fluorescence to
weaken it,
since the Ex/Em difference for your sample is about 10 nm and that is 40 for
this undemanded emission peak. This approach might help you, depending on
the
spectrum features of your system. Good luck!
【在 r**x 的大作中提到】
: 空白硅胶测过，在500nm激发时确实在此处有一强峰，但该峰不随着激发波长变化而改
: 变位置，要是RAMAN散射峰的话不是应该随着激发波长变化而变化吗？
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r**x
发帖数: 408 | 6
【在 d********y 的大作中提到】
: 那个545nm的峰应该就是是PDMS（或者其中杂质）的荧光信号。
: 那个600nm的峰随激发光波长改变位置吗？
: 要是你能够看到水的Raman signal,PDMS的Raman signal可比水强不少。不过500nm激发
: ，545nm的峰对应的Raman shift 是 1650 cm-1,是C=C的，不过如你所说应该受激发光
: 波长改变位置.一般说来Raman信号应该很弱。
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r**x
发帖数: 408 | 7 水的600nm的峰会随着激发波长改变位置，样品的600nm的峰是它本身所具有的肩峰。C=
C是从哪儿来的呢？我的基质是SILICA GEL，不是PDMS啊。求解惑
【在 d********y 的大作中提到】
: 那个545nm的峰应该就是是PDMS（或者其中杂质）的荧光信号。
: 那个600nm的峰随激发光波长改变位置吗？
: 要是你能够看到水的Raman signal,PDMS的Raman signal可比水强不少。不过500nm激发
: ，545nm的峰对应的Raman shift 是 1650 cm-1,是C=C的，不过如你所说应该受激发光
: 波长改变位置.一般说来Raman信号应该很弱。
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a***k
发帖数: 1038 | 8 在固体表面测荧光，真是自找苦吃啊，各种各样的超强散射和次级光谱会搞死人。
在液相里，见到瑞利散射就在挑战方法了，你这个比瑞利散射还要弱不知多少倍的拉曼
散射都
这么明显了，还是换方法吧，比如用镧系金属标记后做时间分辨荧光可以去除散射的问
题。
C=
【在 r**x 的大作中提到】
: 水的600nm的峰会随着激发波长改变位置，样品的600nm的峰是它本身所具有的肩峰。C=
: C是从哪儿来的呢？我的基质是SILICA GEL，不是PDMS啊。求解惑
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r**x
发帖数: 408 | 9 所以测不出来很愁人啊，之前也试过用CONFOCUL MICROSCOPE测，看得见FRET，但是没
法给出具体的强度，不好判断FRET到底是增强还是减弱，这样看来这个方法是不行的了？
【在 a***k 的大作中提到】
: 在固体表面测荧光，真是自找苦吃啊，各种各样的超强散射和次级光谱会搞死人。
: 在液相里，见到瑞利散射就在挑战方法了，你这个比瑞利散射还要弱不知多少倍的拉曼
: 散射都
: 这么明显了，还是换方法吧，比如用镧系金属标记后做时间分辨荧光可以去除散射的问
: 题。
:
: C=
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a***k
发帖数: 1038 | 10 你这个都做这么久了，就好好下工夫分析以下各种可能的散射和次级光谱吧。
你是不是加了在500纳米的notch filter啊？545纳米的峰有可能是滤掉超强瑞利散射后
产生的二级结构。
了？
【在 r**x 的大作中提到】
: 所以测不出来很愁人啊，之前也试过用CONFOCUL MICROSCOPE测，看得见FRET，但是没
: 法给出具体的强度，不好判断FRET到底是增强还是减弱，这样看来这个方法是不行的了？
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r**x
发帖数: 408 | 11 我没加NOTCH FILTER，就在仪器本身的设置里加了550-1100nm的emission filter. 我
还有一个问题，就是在510nm和520nm激发的时候，信号强度都还不大，但是一旦稍微长
一点的波长，比方540nm或550nm激发的时候，信号强度都打到超过量程了，这是为什么
呢？ |
a***k
发帖数: 1038 | 12 散射太强了，发射波长越靠近550纳米，你550-1100nm的emission filter就越顶不住了。
【在 r**x 的大作中提到】
: 我没加NOTCH FILTER，就在仪器本身的设置里加了550-1100nm的emission filter. 我
: 还有一个问题，就是在510nm和520nm激发的时候，信号强度都还不大，但是一旦稍微长
: 一点的波长，比方540nm或550nm激发的时候，信号强度都打到超过量程了，这是为什么
: 呢？
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r**x
发帖数: 408 | 13 这样的话在外边加个NOTCH FILTER可行吗？ |
r**x
发帖数: 408 | 14 这样的话在外边加个NOTCH FILTER可行吗？ |
a***k
发帖数: 1038 | 15 你的光源又不是激光那样的单色光，一般的NOTCH FILTER根本不匹配啊。
【在 r**x 的大作中提到】
: 这样的话在外边加个NOTCH FILTER可行吗？
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r**x
发帖数: 408 | 16 有没有一种特别的CUVET，只在对角线上装进薄薄的一层样品来测表面的荧光呢？ |
