做完蛋白Co-IP后，如何上样跑SDS-PAGE？ - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 做完蛋白Co-IP后，如何上样跑SDS-PAGE？

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e********r 发帖数: 147	1 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完 Protein-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这样的缓冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一样？）。如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验表明100度处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友，还有别的什么着数可以用吗？
v***a 发帖数: 1242	2 我现在也在做蛋白磷酸化实验，是用100度煮的。倒没注意过会让信号消失的问题。不过信号差是蛮差的，从来没有过特别explicit的。【在 e********r 的大作中提到】 : 最近在用Co-IP的方法检测细菌细胞内的蛋白磷酸化水平（32P标记）。最后洗完 : Protein-A agarose后，加2 X SDS上样缓冲液，如果直接吸一是太粘吸不出来，另外这 : 样的缓冲液里也没蛋白信号（文献上说37度处理5 min，试过不行，难道beads用的不一 : 样？）。如果100度煮5 min倒是能把蛋白从protein-A agarose上分离下来，但预实验 : 表明100度处理大概会使50%的磷酸化蛋白信号消失。请问做体内蛋白磷酸化检测的朋友 : ，还有别的什么着数可以用吗？
e********r 发帖数: 147	3 呵呵，同病相怜【在 v***a 的大作中提到】 : 我现在也在做蛋白磷酸化实验，是用100度煮的。倒没注意过会让信号消失的问题。不 : 过信号差是蛮差的，从来没有过特别explicit的。

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