a*****a
发帖数: 32 | 1 看到文献说先将DNA和98%Formamide或者0.1M的NaOH 1:1 混合，然后95度30分钟，然后
跑6M的Urea Gel就能分开两条互补链，但是实际上不行，如果加热95度30分钟，
会导致跑胶出现N条带(N>6, 可能是因为Tm值介于75-80，过高，导致部分aneal)；
如果不加热的话，aneal在一起的双链DNA (一条30bp，一条40bp) 的band又占了主要。
有没有哪位高人知道如何能将两条互补的DNA链跑出单链的band出来？
万分感谢！ |
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c****s
发帖数: 5892 | 2 两名前卑诗省自由党政府内阁部长助手腐败案的审理，经历一波三折之后，昨天（18日）下午终于在卑诗省最高法院开始，预计将持续6到8周。
助理首席法官马克肯兹（Anne MacKenzie）通知由7名男性和5名女性组成的陪审团，让他们重回法庭，给辩方更多准备时间。
据悉，有关什么证据可以呈交法庭的法律程序，已经使审理拖延了几年时间。对于背信和欺诈的指控，巴斯（David Basi）和威尔克（Bob Virk）表示自己无罪。受到指控的第三人是巴斯的侄子安尼尔（Aneal Basi ），他对于洗钱罪的指控也不认罪。
卑诗省以大约十亿元的价格卖掉省属卑诗铁路公司后，皇家骑警在2003年12月28日对省立法会进行了突击搜查，之后对上述三人提出了指控。检方指控他们把敏感材料泄露给一个竞标者，作为回报，他们接受了钱财和其它好处。但辩方认为，这两个人只是按他们政治上司的指令行事。这就把审理导向了卑诗省内阁，一个似乎不容亵渎的领地。高级公务员和内阁部长的的文件和电子邮件有可能在审理中发挥关键的作用。
检方表示，他们会传唤30位证人，包括高级政府官员，前财政厅厅长考林斯（Gary Collins）和前交通厅厅 |
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c****s
发帖数: 5892 | 3 检方律师星期二在开庭审理卑诗铁路腐败案时表示，两名前卑诗省政府内阁助手接受了成千上万元的现金、美食、全国橄榄球联赛在科罗拉多州举行的一场比赛的门票，他们还接受了为他们提供的联邦一级的政治性职位。作为交换，他们泄露了一些政府的秘密文件。
检方律师比尔·贝拉尔迪诺（Bill Berardino）星期二说，戴夫·巴斯（Dave Basi）和鲍勃·沃尔克（Bob Virk）把政府的情报交给了一个在维多利亚的游说者，这名游说者为参与竞买卑诗铁路的三家公司中的一家工作。
贝拉尔迪诺还指控第三名政府雇员阿尼尔·巴斯（Aneal Basi），把“正常支付款”从这名游说者的银行账户移到他堂兄戴夫·巴斯的银行账户。
沃尔克和戴夫·巴斯面对欺诈罪和背信罪指控，阿尼尔·巴斯被指控犯有洗钱罪。
贝拉尔迪诺在介绍这个案件时说，游说者埃里克·伯恩曼（Erik Bornmann）是关键证人，他将出庭作证，并接受豁免协议的保护。
法院得知，伯恩曼将谈论为Pilothouse公司工作时，他在交付钱财和其他好处中所起的作用。位于丹佛的OmniTrax公司在竞标购买卑诗铁路公司时，Pilothouse公司为OmniTrax公 |
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a***e
发帖数: 27968 | 4
it is a 10year old tech. but get the right film on gen10 could be quite
challenge. uniform anealing over almost 10m2 does require some R&D :)
that is why they pilot on gen4 first? if that is the case,
some shortage might be there at ip4 launch.
but aspect ratio? did you mean aperture ratio?
OLED yield and lifetime still a long standing issue.
even though 3* is really good at QC, it will be still big headache.
OLED or not will be more a marketing/business decision rather
then technology decision |
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w********2
发帖数: 16371 | 5 ☆─────────────────────────────────────☆
RVN (银河战舰的桅杆) 于 (Sun Jun 13 19:09:34 2010, 美东) 提到:
发信人: RVN (银河战舰的桅杆), 信区: PhotoGear
标 题: 无敌兔眼中的iphone 4
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jun 13 19:08:33 2010, 美东)
http://www.flickr.com/photos/scobleizer/4695267529/sizes/o/
赞2kw像素
iPhone 4的屏幕分辨率提升至了业界领先的960*640，每平方英寸像素数量达到326
个，在一英尺（约30厘米）距离外观看的精度号称已超过人眼像素识别极限。看来只有
2000万像素专业单反的原图才能象显微镜一样将这块彪悍屏幕的像素点逐一区分开来。
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guanjiu (傻钱酒倌) 于 (Sun Jun 13 20:13:32 2010, 美东) 提到:
好!
LG的屏果然登峰造... 阅读全帖 |
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c*****t
发帖数: 1879 | 6 I don't have the protocol w/ me, but I believe that you can look
it up in the journal Biotechniques. It is a quite reliable method
which is basically:
1. get a set of degenerate primers, usually designed specifically
for your organism.
2. design a specific primer which binds to one end of your DNA.
3. do 3 rounds of PCR, 3 minute elongation time, 10 minute extention time.
i) very low anealing temperature (35C?) for 25 cycles. take 1 ul,
do a 1:20 (or 1:100?) dilution and |
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s******s
发帖数: 13035 | 7 I can tell u what I have done in China
Synthesis 10 ssDNA of 60Nts each (indeed, should be 5 dsDNA with
anealing end), ligate 6 together to get Mixture1, ligate the other
4 to get Mixture2, ligate Mixture1, Mixture2 with vector and finally
got the right product. It means to ligate 10 ssDNA (5 ds fragment)
with vector in one step, and it works!!!! |
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W****C
发帖数: 1937 | 8
我觉得也是这个问题， 37度的时候还是容易开吧。
我猜用两对引物的就是合成的两个PCR产物一个3端多几个cg。。一个5几个gc， 然后高
温melt， 低温aneal， 产生部分3,5两端有CG overhang的双链， 再连到载体上。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 9 你应该看看你的两个引物是否有heterodimer
有些引物设计得不好的话，就互相overlap, 然后就一段一段的扩增起来了。
如果是这个问题，一个可以提高anealing temperature, 另外一个就是
重新设计引物。
另外，你们使用的pipet tip 有filter么？如果没有那就买有的 |
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j*****q
发帖数: 82 | 10 设计的primer的annealing temperature都是58度多，如果提太高，是不是连primer都
aneal不上去了？ |
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j*****q
发帖数: 82 | 11
今天试了60，62，64，66度anealing，跑了普通pcr，温度越高，条带越弱，而且没有
杂带。
真是奇怪啊。难不成copy number就是这么低？ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 12 +1
还可以做2step的
aneal和amplify都在60度
primer melting temp在55-60之间的都没问题 |
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s********n
发帖数: 2939 | 13 直接合成最简单，如果想省钱也可以是order G-block然后自己aneal。 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 14 re
记得aneal浓度100uM
连接浓度稀释到1-0.1uM |
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C*******e
发帖数: 4348 | 15 谢谢楼上各位
我有加了和不加DMSO的对照
也有试过10，20，30，40，50ng template/50 ul reaction
引物有用过Strategen protocol上说的完全互补的
也用过Zhang et al, 2004 Nucleic Acid Research上发表的要不完全overlap的
奇怪的是35个循环出了产物但是都跑well都在胶里
降到18个循环就什么都没有了
但还是转录了，完全没有克隆
重新设计引物什么的18个循环倒是有产物了
但是好多非特异带
只胶纯化8kb的那个带，往下做，没有克隆
想问问大家一般引物终浓度用多少？
PCR条件是根据引物用不同的anealing还是统一用SDM protocol里面的55度，
或者Zhang文章里的52度？ |
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H*****l
发帖数: 702 | 16 i could
a-si/c-si is junction interface----silicon heterojunction solar cell
a-si brings you high Ef difference, passivation on surface ( so no need on
diffusion) and still reasonable light transport
a-si is low temp process so no need to go to 800 for diffusion or anealing
and a-si dep is very fast since it is only 10-20 nm for a-si emitter/
passivator
the interest lies on " how to make efficiency from 200 degree process as
high as traditional 800-1000 degree process"
is |
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